儿童与成人弥漫大B细胞淋巴瘤的Hans、Choi免疫分型和C-MYC基因特征

徐红艳，黄 慧，杨文萍*，黄传生，钟梅慧

(1.江西省儿童医院病理科;2.江西省肿瘤医院病理科，江西南昌330006)

弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)是成人最常见的成熟B细胞淋巴瘤，占成人非霍奇金淋巴瘤(NHL)的30% ～40%［1］，国外报道仅占儿童NHL的10%［2］。目前，国内外报道DLBCL的病例大多是针对成人或所有的发患者群，缺少系统的儿童与成人DLBCL的免疫分型及分子遗传学特征的比较研究，研究表明儿童和成人DLBCL在免疫表型及分子遗传学等方面有一定的差异，此差异与患者的治疗及预后密切相关［3－4］。因此本研究从收集到的NHL中随机选取了17例儿童DLBCL作为实验组，43例成人DLBCL作为对照组，进行免疫表型及C-MYC基因检测，旨在了解儿童与成人DLBCL的免疫分型及分子遗传学特征，为临床的治疗及预后判断提供有价值的参考依据。

1 材料与方法

1.1 病例资料

随机选取了江西省儿童医院病理科1984年9月－2011年7月和江西省肿瘤医院病理科2005年1月－2011年7月资料较完善的存档标本60例，其中儿童组17例，成人组43例。诊断标准参照2008年WHO造血与淋巴组织肿瘤分类［1］。所有标本均经4%中性甲醛液固定、石蜡包埋、4 μm厚切片、HE染色、光镜观察。随访截止时间为2012-03-31，采用电话或书信形式进行随访，临床资料来源于病历记载。

1.2 免疫组化染色

免疫组化SP法染色试剂盒和一抗(均Invitrogen公司)，操作按试剂盒说明书进行。30%以上的肿瘤细胞出现棕黄色为阳性。免疫表型根据Hans分型将DLBCL分为生发中心B细胞型(GCB型)和非生发中心 B细胞型(non-GCB型)(图1A)［2］，根据Choi分型将DLBCL分为GCB型和活化的B细胞型(ABC 型)(图1B)［3］。

1.3 FISH检测

所用探针为C-MYC双色分离重排探针(北京金菩嘉医疗科技有限公司)。实验操作和结果判定参照文献［5］。正常信号为2黄，基因断裂信号为1红、1绿及1黄。

1.4 统计学方法

用SPSS17.0统计学分析软件，生存曲线分析采用Kaplan-Meier法，单因素生存曲线比较采用Logrank检验，率的比较用χ2检验，不满足χ2检验条件时用Fisher精确概率法。

2 结果

2.1 病理组织形态

儿童DLBCL中15例为中心母细胞特征(图2):细胞较大，核圆形、卵圆形，可见2～4个核仁靠近核膜或单个核仁，核分裂象多;2例表现为细胞多形性、间质较多的纤维组织间隔。成人DLBCL中33例为中心母细胞型;8例呈中心母细胞和免疫母细胞混合性形态特征;1例为间变大细胞变型;1例为富T细胞变型。

图3 免疫表型阳性Fig 3 Immune phenotype positive

2.2 免疫组化结果

17例儿童 DLBCL中 CD10(图 3A)、BCL-6(图3B)、MUM1、FOXP1、GCET1 和 CD5 的表达率分别为9、8、5、5、11 和 0例。43例成人 DLBCL 中 CD10、BCL-6、MUM1(图 3C)、FOXP1(图 3D)、GCET1(图3E)和 CD5(图 3F)的表达率分别 1、28、28、29、11 和4例。Hans分型:17例儿童DLBCL中GCB型11例(64.7%)，non-GCB型6例(35.3%);43例成人DLBCL中 GCB型 9例(20.9%)，non-GCB型 34例(79.1%)。Choi分型:17例儿童DLBCL中GCB型13例(76.5%)，ABC型4例(23.5%);43例成人DLBCL中GCB型13例(30.2%)，ABC型30例(69.8%)。儿童组Hans分型和Choi分型总一致率为76.4%(13/17)，成人组Hans分型和Choi分型总一致率为74.4%(32/43)。

2.3 FISH结果

17例儿童DLBCL中C-MYC基因断裂5例(29.4%)(图4);43例成人DLBCL中C-MYC基因正常信号43例(100%)。

2.4 统计学分析

图4 C-MYC基因断裂Fig 4 C-MYC gene disruption(×1000)

儿童DLBCL的Hans及Choi分型与成人比较(P＜0.05);儿童DLBCL的Hans及Choi分型不同亚型的3年生存率(OS)比较无差异;成人DLBCL Hans及Choi分型不同亚型3年OS比较(P＜0.05)(图5);成人DLBCL组年龄＞55岁患者CD5阳性率明显高于年龄≤55岁者(P＜0.01);儿童DLBCL中CMYC基因断裂显著高于成人DLBCL(P＜0.01)。

3 讨论

图5 成人DLBCL Hans分型不同亚型及DLBCL Choi分型不同亚型的3年OSFig 5 Hans and Choi typing different subtypes of OS for 3 years in adult DLBCL

2000年通过对基因表达谱结果将DLBCL分为GCB型和ABC型，GCB型5年生存率为50%以上，而ABC型5年生存率不到20%［5］。随后根据CD10、BCL-6、MUM1蛋白表达情况，将DLBCL分为GCB型和non-GCB型，CD10和BCL-6阳性表达者预后较好［6］。后来在 Hans分型的基础上新增了GCET1及FOXP1，将84例DLBCL分为GCB型和ABC型，其中GCB型49例，ABC型35例，两者的5年生存率分别为61%和41%。约75%儿童DLBCL为GCB型，而成人只有22% ～50%为GCB型［7－11］，这可以解释儿童 DLBCL 预后较成人DLBCL好的原因。本研究儿童组Hans分型和Choi分型总一致率为75%(9/12)，成人组Hans分型和Choi分型总一致率为76.7%(33/43)。儿童组以GCB型为主，分型与预后无关;成人组以non-GCB型或ABC型为主，GCB型的3年OS显著高于non-GCB型或ABC型。

有研究把DLBCL分为CD5+DLBCL和CD5－DLBCL，约10%DLBCL表达CD5，多发生于老年女性结外组织，预后较差［8］，也有研究表明 CD5+DLBCL并不提示预后较差［9］。本研究儿童DLBCL组未见CD5阳性表达，成人DLBCL组CD5表达4例(9.3%)，年龄为56～73岁之间，其中3例为发生在颈部淋巴结的男性患者，1例发生在女性乳腺，4例患者生存时间为3～62月，死亡2例。

有报道在儿童DLBCL中，C-MYC基因重排率为25% ～35%［10］。报道的16例10～18岁儿童结内DLBCL中，有6例(37%)存在C-MYC基因易位，其中5例为GCB型［11］。儿童结内DLBCL中C-MYC基因易位者预后也较好，可能与儿童DLBCL多为GCB型有关。在成人DLBCL中，C-MYC基因重排率为 5% ～ 15%［12］，且与预后不良有关［13］。本组17例儿童DLBCL中，4例(23.5%)存在C-MYC基因重排，均为GCB型，病变部位分别为颈部淋巴结1例(7岁)、胃1例(13岁)、肠系膜淋巴结1例(6岁);其中1例术后2个月死亡(未化疗)，1例至随访结束时生存 34个月，失访 1例。43例成人DLBCL中，无 C-MYC基因重排病例，与文献报道［14－15］有差异，可能与实验所选标本或本地区的特点有关。

总之，儿童DLBCL以GCB型为主，预后较好;成人DLBCL以non-GCB或ABC型为主，预后相对较差，儿童DLBCL的C-MYC基因断裂明显高于成人，且以GCB型为主，预后较好。但由于本组儿童病例较少，还有待于今后积累资料进一步研究。

［1］Swerdlow SH，Campo E，Harris NL，et al．World Health Orgnization classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues［J］．Lyon:IARC Press，2008:262 － 266．

［2］Hans CP，Weiseuberger D，Greiner TC，et al．Confirmation of the molecular classification of diffuse large B-cell lymphoma by Immunohistochemistry using a tissue microarray［J］．Blood，2004，103:275 －282．

［3］Choi WW，Weisenburger DD，Greiner TC，et al．A new immunostain algorithm classifies diffuse large B-cell lymphoma into molecular subtypes with high accuracy［J］．Clin Cancer Res，2009，15:5494 －5502．

［4］杨文萍，黄慧，宫丽平，等．儿童散发性伯基特淋巴瘤的分子遗传学特征分析［J］．中华病理学杂志，2010，39:819－824．

［5］Alizadeh AA，Eisen MB，Davis ER，et al．Distinet types of diffuse large B-cell lymphoma identif;%96%94ied by gene expression profiling［J］．Nature，2000，403:503 －511．

［6］Oschlies I，Klapper W，Zimmermann M，et al．Diffuse large B-cell lymphoma in pediatric patients belongs predominantly to the germinal-center type B-cell lymphomas:a clinicopathologic analysis of cases included in the German BFM(Berlin-Frankfurt-Munster)Multicenter Trial［J］．Blood，2006，107:4047 －4052．

［7］Miles RR，Raphael M，McCarthy K，et al．Pediatric diffuse large B-cell lymphoma demonstrates a high proliferation index，frequent C-MYC protein expression，and a high incidence of germinal center subtype:report of the French-A-merican-British(FAB)international study group［J］．Pediatr Blood Cancer，2008，51:369 －374．

［8］Klapper W，Szczepanowski M，Burkhardt B，et al．Molecular profiling of pediatric mature B-cell lymphoma treated in population-based prospective clinical trials［J］．Blood，2008，112:1374 －1381．

［9］蒋会勇，李慧灵，胡海，等．弥漫性大B细胞淋巴瘤t(14;18)易位及BCL-2基因扩增的检测［J］．中华病理学杂志，2007，36:84 －89．

［10］李义，王国平，郗彦凤，等．弥漫性大B细胞淋巴瘤3q27染色体状态和不同亚型与预后的关系［J］．中华病理学杂志，2009，38:231 －236．

［11］Gualco G，Weiss LM，Harrington WJ，et al．Nodal diffuse large B-cell lymphomas in children and adolescents:immunohistochemical expression patterns and C-MYC translocation in relation to clinical outcome［J］．Am J Surg Pathol，2009，33:1815－1822．

［12］Savage KJ，Johnson NA，Ben-Neriah S，et al．MYC gene rearrangements are associated with a poor prognosis in diffuse large B-cell lymphoma patients treated with R-CHOP chemotherapy［J］．Blood，2009，114:3533 －3537．

［13］Shustik J，Han GM，Farinha，P，et al．Correlations between BCL－6 rearrangement and outcome in patients with diffuse large B-cell lymphoma treated with CHOP or R-CHOP［J］．Haematologica，2010，95:96 －101．

［14］Iqbal J，Neppalli VT，Wright G，et al．BCL-2 expression is a prognostic marker for the activated B-cell-like type of diffuse large B-cell lymphoma［J］．J Clin Oncol，2006，24:961－968．

［15］Chen Y，Han T，Iqbal J，et al．Diffuse large B-cell lymphoma in chinese patients:Immunophenotypic and cytogenetic analysis of 124 cases［J］．Am J Clin Pathol，2010，133:305－313．