珍珠水解液脂质体的制备＊

王秀珍，王园园

(1.绍兴文理学院，浙江 绍兴 312000;2.浙江美诺华药物化学有限公司 浙江 上虞 312369)

珍珠美容由来已久，我国珍珠产量不断提高，急需新产品开发和产品升级。不同珍珠产品对皮肤抗衰老作用效果尚无对比研究，珍珠养颜对皮肤作用机理在国内也尚无研究，其药用疗效无现代研究方法证实及量化，对珍珠的基础研究不足限制了其产业的发展。珍珠养殖是绍兴的支柱产业，利用现代药剂学新成果开发珍珠新产品，有利于产业升级。脂质体化妆品具有普通化妆品不可比拟的效果[1]，可直接为表皮细胞提供营养和补充细胞间质，其特有性能和优异的美容效果来源于脂质体的特有结构。目前，尚无有关珍珠类脂质体的研究。因此，本试验中根据近年文献报道的脂质体制备方面方法，先把珍珠粉酸解使成珍珠液，再用旋转蒸发－冷冻干燥法制备珍珠脂质体，利用电镜观察珍珠类脂质体形态并测定其粒径分布，现报道如下。

1 仪器与试药

电子恒温不锈钢水浴锅(HHS－4S，上海南洋仪器有限公司);电子恒速搅拌器(GS12－2，上海医械专机厂);电子精密天平(PB303－N);台式高速离心机(LG10－24A);电子万用炉(浙江省上虞市道墟立明化验仪器厂);摄影生物显微镜(XS－212－303);透射电子显微镜(JEOL－1011日本电子)。珍珠(直径3～8 mm，绍兴诸暨山下湖产);无水氯化钙(上海化学试剂有限公司)、氯化钾(上海化学试剂公司)、硝酸钾(北京红星化工厂)、硝酸钠(西安化学试剂厂)均为化学纯;茚三酮(上海剂剂三厂)为分析纯;甘氨酸(上海康达氨基酸厂)为生化试剂;司盘60 150 g，胆固醇100 g，聚乙二醇 6000(PEG6000)22.5 g，无水乙醇适量，0.1 mol pH=6.8 的磷酸盐缓冲溶液 677.5 g。

2 方法与结果

2.1 珍珠水解液制备[2－3]

取珍珠洗净烘干，在洁净环境中砸开，去除母核，置球磨机内反复粉碎;精密称取10 g珍珠粉，置250mL烧杯内，加6mol/L盐酸溶液40 mL，磁力搅拌12 h，抽滤、水洗，抽滤液减压蒸馏出盐酸溶液约20mL后，定容至100mL，将再生好的阴离子树脂装柱，柱高约33 cm，将上述溶液过阴离子树脂除去Cl－，再过阳离子树脂除去Ca2+，浓缩定溶至100mL;测定其pH并用氨基酸自动分析仪定性定量分析氨基酸。结果珍珠水解液的Cl－的质量浓度为0.84%。氨基酸自动化分析仪分析表明，样品中含有门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、酰氨酸、缬氨酸、脯氨酸等。

2.2 珍珠类脂质体制备[4－6]

处方:珍珠水解液 100 mL，司盘 60 150 g，胆固醇 100 g，PEG6000 22.5 g，无水乙醇适量，0.1mol pH=6.8 的磷酸盐缓冲溶液 677.5 g。

制备方法:称取司盘 60 150 g、胆固醇 100 g和 PEG6000 22.5 g等固体辅料于西林瓶中，加无水乙醇，60℃水浴加热并电磁搅拌使溶解完全;60～65℃旋转蒸发形成薄膜，加入0.1mol pH=6.8的磷酸盐缓冲溶液，60℃水浴搅拌15min，再室温搅拌5min，后取出，边冷却边搅拌，即形成泡囊。加入珍珠水解液30mL，混合均匀，真空冻干24 h，室温放置，缓慢融化，溶解于500mL磷酸盐缓冲溶液中，即成脂质体分散液。

2.3 珍珠脂质体分散液电镜观察

取泡囊1mL，加pH=6.8的磷酸盐缓冲溶液至100mL，摇匀，取1滴点样于有碳膜的铜网上，用 pH=6.5 的磷钨酸染色，透射电镜8～10万倍下观察类脂质体大小、粒径分布。结果脂质体在电镜下为多囊脂质体，形态为不规则圆形，粒径分布10～500 nm，差异较大，见图1 A。将泡囊置冰箱5℃冷藏48 h，重新观察。结果脂质体的形态较为丰满，呈规则圆形，粒径分布无明显变化，见图1B。

图1 脂质体分散液电镜下形态

2.4 纳米珍珠粉类脂质体包封率测定[7]

取制备的珍珠脂质体溶液2 g，加0.1mol pH=6.8的磷酸盐缓冲溶液至20 g，混匀，置专用高速离心管中，配对后放入离心机中离心，转速为 15 000 r/min，分别离心 20，30，40min，观察游离珍珠水液与脂质体分离情况。结果30，40 min离心时无外观差异。分离液体，测出游离珍珠水解液质量为1.365 g。计算包封率(QW)=(W总－W游)/W总×100%，结果包封率为(2－1.365)/2 ×100%=31.75%。

3 讨论

珍珠水解液为澄清液体。在珍珠粉水解过程中，除使用盐酸外，没使用任何别的有害物质，因此只要将Cl－降低到一定程度，就可保证珍珠水解液的安全使用。本试验中过阴离子树脂后，珍珠水解液内Cl－质量浓度为0.84%，pH为6.2。

由于珍珠水解液为混合物而非单组分药物，所以珍珠水解液与脂质体膜相互作用更复杂，其所形成的脂质体在电镜下观察为多囊脂质体[8]，脂层由许多同心囊泡构成，由于珍珠水解液中各成分的油水分配系数不同，故亲脂性强的组分分散于泡囊的脂质双分子层中，亲水性强的组分可在泡囊的水相中，在水相与膜内部的交界磷脂中包有两性化合物。因此，电镜下的脂质体形态为不规则圆形，粒径分布10～500 nm，差异较大。

冷冻过程中，由于冰晶的形成使脂质体膜破裂，形成冰晶与破碎的脂膜同时存在的不稳定状态;然后在融化时暴露的脂膜会互相融合重新形成脂质体。此方法最大的优点是不需要加入机溶剂，而且在2.1项下操作中，经过阳离子树脂除去Ca2+时的同时除去了其他高强度的离子，所以冻融过程不仅增加了脂质体的稳定性[5]，而且提高了脂溶性药物的包封率[6]。这是制备包囊蛋白质、多肽微粒制剂的主要方法。本试验电镜下观察到，该脂质体的形态为较丰满、呈规则圆形，粒径分布无明显变化，稳定性增加。

[1]陈怀颖，王咏梅，常 首，等.纳米脂质体化妆品的质量研究[J].中国化妆品，2008(6):92－94.

[2]刘其城，唐良荣，毛小辉，等.淡水珍珠水解液的制备研究[J].食品与机械，1999，74(6):21 －22.

[3]吴红棉，蒋志红，雷晓凌.传统“珍珠水解液”的工艺改进研究[J].湛江水产学院学报，1994，14(2):57－60.

[4]孙 芸，许汉林.中药脂质体制备的研究进展[J].中华医学研究杂志，2004，4(7):619－621.

[5]敬思群，迪里努尔·阿布都热合曼，米热班古·本太力甫.高寒香菊花黄酮固体脂质体制备工艺优化[J].中国酿造，2011(11):50－54.

[6]李志平，梁 庆，刘文彬，等.哈西奈德脂质体制备方法的选择及其含量与包封率的测定[J].今日药学，2011，21(6):332－334.

[7]李唐棣，郝丽梅，梅兴国.脂质体包封率的研究进展[J].国外医学:药学分册，2006，33(3):224 －227.

[8]王晓梅，唐 星，何梅冰.多囊脂质体的研究进展[J].中国新药杂志，2006，15(15):1 243 －1 246.