凝血因子在结直肠癌中的表达及相关性的研究＊

庄华章 陈永杰

（广东医学院附属观澜医院肛肠外科 广东深圳 518110）

D－二聚体是纤维蛋白单体活化因子交联后，再经纤维酶水解作用所产生的一种特殊降解产物，为纤维蛋白降解产物中的最小片段，其水平升高能特异性反映继发性纤溶活性的增强［1，2］，研究表明D－二聚体水平在肺癌、肝癌、前列腺癌、结直肠癌等多种实体肿瘤患者中也会明显升高［2］。PAI－1属于丝氨酸蛋白酶抑制剂（SERPINE）超家族之一。目前有研究表明PAI－1的过表达与癌细胞的侵袭和转移有着明显的正相关性［3］。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年9月至2013年9月年于观澜医院肛肠外科住院部的结直肠癌患者74例，年龄跨度42～77岁，中位年龄61岁，男44例，女30例。同时选择37例良性病患者作为对照组，年龄跨度19～62岁，中位年龄38岁；男26例，女11例。

纳入标准：所有参与实验的患者均要求年龄在18岁以上，结直肠癌患者经组织病理学检查确诊。

排除标准：患有严重外伤或大手术4周内者；伴溃疡性疾病者；骨组织损伤者；严重心血管或外周血管病变者；糖尿病、慢性阻塞性肺部疾病、肝肾疾病和免疫系统疾病等具有凝血功能障碍患者，近期服用抗凝药物者。

1.2 结直肠癌分期 分期方案为Dukes分期方案。所有结直肠癌患者均根据各项术前检查及术后病理结果进行分期，分为DukesAB期间和DukesCD个两组，本实验组患者AB期42例，CD期32例。

1.3 血清D－二聚体和PAI－1检测 入选患者安静仰卧10min，从肘正中静脉采集4mL静脉血注入非抗凝试管中，室温静置30min后，4℃下3000转／min离心10min，分离的血清于－80℃冷冻保存直至检测，采用ELISA法测定，术后同法测定。

1.4 统计方法 计量资料全部用mean±s表示，两组患者间D－二聚体和纤维蛋白原水平比较采用Independent－Samplest检验的方法，结直肠癌患者各亚组的比较采用单因素方差的方法。P＜0.05为有统计学意义。所有数据均用SPSS17.0软件包进行处理。

2 结 果

2.1 结直肠癌各组与对照组D－二聚体和PAI－1水平 结果如表1所示，结直肠癌患者的D－二聚体水平、PAI－1水平显著高于对照组，差异非常显著（P＜0.01）。

表1 结直肠癌组和对照组D－二聚体和PAI－1水平比较（mean±s）

2.2 各期患者D－二聚体的平均水平 结果如表2所示，在结直肠癌患者的各亚组中，DukesCD期患者的D－二聚体水平明显高于AB期，并有统计学意义（P＜0.05）。

表2 结直肠癌组内各亚组的D－二聚体水平比较（）

表2 结直肠癌组内各亚组的D－二聚体水平比较（）

分组 D－二聚体（μg／mL） P PAI－1（ng／mL）P DukesAB期208.12±37.98 32.68±0.71 DukesCD期624.30±118.420.03241.07±0.760.024

3 讨 论

D－二聚体是纤维蛋白单体活化因子交联后，再经纤维酶水解作用所产生的一种殊降解产物，为纤维蛋白溶解酶作用于血管内外交联纤维蛋白所产生的最小片段，其水平升高特异反映继发性纤溶活性的增强［1，2］，在血液凝固过程中，具有重要的正相关性［4～6］。生理条件下D－二聚体低表达甚至不表达，但是在病理条件下，D－二聚体的表达量显著上升［7］。目前已经发现在弥漫性血管内凝血、血管栓塞性疾患、心肌梗死等疾病中D－二聚体水平会有显著升高［7］。而进一步研究表明D－二聚体水平在肺癌、肝癌、前列腺癌、结直肠癌等多种实体肿瘤患者中也会明显升高：Nagy等［8］回顾性分析了300例恶性肿瘤患者，结果提示D－二聚体水平的增高与疾病的进展和死亡率的增高密切相关，提出D－二聚体是一个潜在的预测预后的标记物。而Ketut等［9］临床实验表明，血浆D－二聚体水平与实体肿瘤的临床分期呈正相关，D－二聚体高水平即提示肿瘤患者处于高凝状态，同时预示着不良预后。Masatoshi的研究表明［10］在结直肠癌患者中，D－二聚体水平与肿瘤的浸润深度、淋巴转移、血管侵犯、肝转移等有密切的相关性，结直肠癌患者D－二聚体的水平与肿瘤分期具有正相关性。目前，D－二聚体已经成为结直肠癌领域关注的热点生物标记物之一。

纤溶酶原激活物抑制剂－1（plasminogen activator inhibitor－1，PAI－1）属于丝氨酸蛋白酶抑制剂（SERPINE）超家族之一。从目前的研究看来PAI－1的过表达与癌细胞的侵袭和转移有着明显的正相关性。在多数的体外实验和组织免疫染色中都发现PAI－1在侵袭性较强的癌细胞中表现出了较高的表达趋势和敏感性，提示了PAI－1具有作为恶性侵袭性肿瘤标记物及作为预后因子的应用价值。László［11］等 人 应 用 组 织 蛋 白 酶 B 和 L（CATB，CATL）、u－PA、PAI－1、CEA及CA－199联合检测56例结直肠癌组织，25例溃疡性结肠炎组织，26例结直肠腺瘤组织和35例正常肠组织，结果显示PAI－1的 敏 感 度 为 94%，CATB82%，u－PA69%，CATL41%，高于 CEA（30%）及 CA－199（18%）。PAI－1，CATB和u－PA比CEA及CA－199表现出更高的精确度。PAI－1、CATB和CATL对结直肠癌的预后有重要影响。Yasuhide［12］等人的研究表明PAI－1的血浆水平是预测结直肠癌术后复发的一个有前景的生物标记物。

以上研究提示在结直肠癌患者中，存在某种机制，导致血液处于高凝状态。在本实验中，结直肠癌患者血清D－二聚体和PAI－1水平在手术前后均明显高于正常组（P＜0.01），而术后患者明显高于术前（P＜0.01），说明D－二聚体和PAI－1在一定程度上反映结直肠癌转移与机体的高凝状态具有相关性；而DukesCD期患者的D－二聚体和PAI－1水平显著高于AB期（P＜0.05），也就间接证明了CD期肿瘤生长的加剧。因此，本研究发现在结直肠癌的转移过程中，凝血机制的激活，纤维蛋白的活性度增高和纤溶因子释放的受阻，与该病的进展有重要的正相关性，进而可以影响到患者的预后。因此，D－二聚体和PAI－1对于结直肠癌的分期及预后可能有较大的参考意义，可成为一个指导诊疗的重要指标。

［1］Rosovsky RP，Kuter DJ.Catheter－related thrombosis in cancer patients：pathophy－siology，disgnosis，and management［J］.Hematol Oncol Clin North Am，2005，19（1）：183－202.

［2］Kalweit GA，Feindt P，Micek M，et al.Markers of activated hemostasis and fibrinolysis in patients with pulmonary malignancies：comparison of plasam levels in cantral venous and pulmonary venous blood［J］.Thromb Ras，2002，97（3）：105－111.

［3］Yasuhide Y，Tokuzo A，Kazuko M，et al.Plasma concertrations of VCAM－1and PAI－1：A predictive biomarker for post－operative recurrence in colorectal cancer.［J］.Cancer Sci，2010，101（8）：1886－1890.

［4］Sallah S，Husain A，Sigounas V，et al.Plasma coagulation markers in patients with solid tumors and venous thromboembolic disease receivingoral anticoagulation therapy［J］.ClinCancerRes，2004，10（21）：7238.

［5］黄尉国，王鸿利，张颖琪.血浆D－二聚体检测及其临床应用［J］.中华医学检验杂志，1995，18（2）：171.

［6］Tseng CS，Lo HW，Chen PH，et al.Clinical significance of plasma D－dimer levels and serum VEGF levels in patients with hepatocellular carcinoma［J］.Hepatogastroenterology，2004，51（59）：1454.

［7］Blackwell K，Hurwitz H，Lieberman G，et al.Circulating D－dimmer levels are better predictors of overall survival and disease progression than carcinoembryonic antigen levels in patients with metastatic colorectal carcinoma［J］.Cancer，2004，101（1）：77

［8］Nagy Z，Horvath O，Kadas J，et al.D－dimer as a potential prognostic marker［J］.Pathol Oncol Ras，2012，1（18）.

［9］Kakkar AK，DeRuvo N，Chinswangwatanakul V，et al.Extrinsic－pathway activation in cancer with high factorⅦa and tissue factor［J］.Lancet，1995，346（8981）：1004.

［10］Masatoshi O，Yoshitake A，Takashi O，et al.High preoperative plasma D－dimer level is associtated with advanced tumor and short survival after curative resection in patients with colorectal cancer［J］.Jpn J Clin Oncol，2001，31（8）：388.

［11］Laszlo H，Fabio F，Romilda C，et al.Tumor marker utility and prognostic relevance of cathepsin B，cathepsin L，urokinase－type plasminogen activator，plasmiknogen activator inhibitor type－1，CEA and CA－199in colorectal cancer［J］.BMC Cancer，2008，10（8）：194－206.

［12］Yasuhide Y，Tokuzo A，Kazuko M，et al.Plasma concertrations of VCAM－1and PAI－1：A predictive biomarker for post－operative recurrence in colorectal cancer.［J］.Cancer Sci，2010，101（8）：1886－1890.