补气类中药对大鼠胃溃疡EGFR、bFGFR蛋白表达的影响1）

李廷荃，化金凤，索 炜，贾力莉

消化性溃疡是临床常见病、多发病，具有慢性、反复发作的特点，溃疡的复发与溃疡愈合质量有关，溃疡愈合质量又与溃疡边缘表皮生长因子（EGFR）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及其受体表达有关[1]。中医认为补气类中药能托疮生肌，鼓舞气血生长，常用于溃疡久溃不敛，具有生肌长肉，促进组织修复的作用，与EGFR、bFGF在溃疡愈合过程中的作用相似。本研究观察人参、太子参对大鼠胃溃疡愈合过程中EGFR、bFGFR表达的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 SD大鼠适应性饲养1周后随机分为5组，即正常组、模型组、人参组、太子参组、洛赛克组，每组12只。

1.1.2 药物 灌胃药物均采用山西省中医院中药房免煎剂。江阴天江药业有限公司生产。

1.1.3 主要试剂 EGFR、bFGFR免疫组化试剂盒，武汉博士德生物工程有限公司生产。

1.2 造模与药物干预 大鼠适应性饲养1周后随机分为5组，除正常组外，其余各组采用Okabe乙酸涂抹法制作大鼠胃溃疡模型[2]。术后当日给大鼠自由饮水，次日开始自由饮食。在造模结束后24h，人参组、太子参组均以5g／kg给药，洛赛克组20 mg／kg给药，模型组、正常组灌服生理盐水。各组给药量为10 ml／kg，每日1次。

1.3 检测项目与方法

1.3.1 取材 以上动物在药物干预后14d、21d，从各组中随机取出6只，以3%的戊巴比妥钠麻醉后（之前大鼠禁食24h），剖腹取胃，沿胃大弯剪开，以生理盐水洗净后，放置在冰袋上的器皿中。留取距溃疡边缘（2～3）mm胃组织，沿经溃疡中心最长轴中点纵切；若无溃疡，则在相同部位，即胃小弯角切迹下方约5mm处切取1cm×1cm大小的胃组织。迅速浸入4%多聚甲醛中固定。进行常规石蜡包埋，用AIWA切片机切取4μm切片，用于免疫组化、病理组织学检查。

1.3.2 观察溃疡发生情况 HE染色观测病理组织，免疫组化法检测胃黏膜EGFR、bFGFR蛋白的表达。

1.4 统计学处理 采用SPSS13.0分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，多个样本均数比较采用方差分析，多个样本均数间两两比较采用LSD法。

2 结 果

2.1 各组大鼠溃疡愈合情况（见表1）

表1 各组溃疡发生数比较 例

2.2 大鼠胃溃疡组织学变化 术后14d，空白组大鼠胃黏膜结构完整，腺体排列整齐，未见明显的炎性细胞浸润；模型组见明显溃疡，可见大量坏死组织，肌层纤维结构不清，固有层大量炎细胞浸润，血管扩张；人参组、太子参组溃疡较轻，固有层、黏膜肌层可见炎性细胞浸润，黏膜肌层水肿较轻，中度血管扩张，溃疡底部见有肉芽组织和瘢痕形成，黏膜肌层增厚，新生血管较丰富；洛赛克组溃疡程度也较轻，仍有大量炎细胞、中性粒细胞浸润，微血管较少。术后21d，模型组2例明显溃疡，固有层和黏膜层仍有大量炎细胞浸润，固有层血管扩张明显，黏膜上皮脱落，其中人参组、太子参组溃疡愈合较佳，洛赛克组溃疡也愈合，但固有层、黏膜肌层仍有少量炎细胞中性粒细胞浸润。

2.3 胃黏膜EGFR、bFGFR蛋白的表达 术后14d，正常组EGFR和bFGFR略有表达，但明显低于其他组别（P＜0.05），人参组、太子参组EGFR表达比例高于模型组（P＜0.05），洛赛克组EGFR和bFGF表达比例明显无统计学意义（P＞0.05）。详见表2。

表2 术后14dEGFR、bFGFR阳性细胞及染色结果（±s）%

表2 术后14dEGFR、bFGFR阳性细胞及染色结果（±s）%

组别 n EGFR阳性细胞（%） 染色度bFGFR阳性细胞比例（%） 染色度空白 6 17.00±6.71＋ 16.00±6.52 －模型组 6 23.00±2.742） ＋＋ 35.00±25.25 ＋＋＋人参组 6 64.00±28.811） ＋＋ 18.00±4.47 ＋太子参组 6 74.00±35.781） ＋＋ 14.00±5.48 ＋洛赛克组 6 16.00±5.482） ＋ 14.00±5.48 ＋与模型组比较，1）P＜0.05；与太子参组比较，2）P＜0.05注：－为无色，＋为浅黄色，＋＋为棕黄色，＋＋＋为棕褐色。

术后21d，空白组EGFR和bFGF略有表达，但明显低于其他组别（P＜0.0 5），模型组EGFR和bFGF表达上升（P＜0.05），人参组、太子参组EGFR表达与14d比较无统计学意义，bFGFR表达与14d比较明显升高（P＜0.05），洛赛克EGFR和bFGFR明显低于中药组（P＜0.05），各组间EGFR和bFGF表达无统计学意义。详见表3。

表3 术后21dEGFR、bFGFR阳性细胞及染色结果（±s） %

表3 术后21dEGFR、bFGFR阳性细胞及染色结果（±s） %

组别 n EGFR阳性细胞（%） 染色度bFGFR阳性细胞比例（%） 染色度空白 6 18.00±4.471） ＋ 16.00±5.481） ＋模型组 6 86.50±8.94 ＋＋＋ 76.00±31.30 ＋＋＋人参组 6 90.00±0.00 ＋＋＋ 74.00±8.94 ＋＋太子参组 6 90.00±0.00 ＋＋ 80.00±17.32 ＋＋洛赛克组 6 23.00±20.491） ＋ 29.00±29.241） ＋与模型组比较，1）P＜0.05注：－为无色，＋为浅黄色，＋＋为棕黄色，＋＋＋为棕褐色。

3 讨 论

胃溃疡属中医“胃脘痛”、“痞证”、“吐酸”范畴。其发生多因饮食不节、情志不畅及外感六淫，导致脏腑气机失调，经脉不通，局部组织失养，与邪毒、瘀血有关。本病以脾虚为主，胃热为标，虚实并见，寒热错杂为主要病理特征，治疗以理气健脾治其本，清热活血化瘀治其标[3]。中医理论认为补气药可以健脾益气，托疮生肌，鼓舞气血生长，促进组织修复，常用于溃疡久溃不敛，与EGFR、bFGF在溃疡愈合过程中的作用相似，研究资料表明[4]，EGFR主要促进溃疡边缘的黏膜上皮成分发生变化，上皮细胞失去分化能力，发生增殖，移行到肉芽组织表面，覆盖溃疡底部，促进溃疡愈合；而bFGF则主要促进肉芽组织不断更新、改构、修复，肉芽组织为固有膜层的修复提供结缔组织，为微血管网的修复提供微血管网，肉芽组织中的血管形成建立了毛细血管网，有利于物质、氧、激素、生长因子等运送到溃疡底层，另外血管重构是损伤区域胃腺体重建的前提，因而它在创面愈合和组织再生过程中起决定作用。

人参组、太子参组早期促进EGFR表达为主，后期bFGFR表达亦增加，洛赛克和中药组都可促进大鼠胃溃疡愈合，但洛赛克对大鼠胃溃疡组织愈合的组织学程度不同，对EGFR和bFGF表达不显著。本实验正常胃黏膜中有少量EGFR和bFGFR表达，胃溃疡时表达显著增加，且中药组能够增强它的表达，人参组、太子参组，早期促进EGFR表达为主，使溃疡边缘的黏膜上皮成分发生变化，发生增殖，移行到肉芽组织表面，覆盖溃疡底部，促进溃疡愈合，后期随着大鼠自愈过程，模型组也表达增加，但其发生较迟，溃疡愈合也较晚，此时人参组、太子参组EGFR表达仍高、bFGFR表达也逐渐增加，更加速创面愈合和组织再生。洛赛克组各时点EGFR和bFGFR表达较低，这可能和其治疗胃溃疡的机制有关，而且溃疡愈合与中药组比较仍存在组织学差异。可能是导致临床复发率较高的原因。

[1]Tarnawski A，Stachura J，Durbin T，et al.Increased expression of epidermal growth factor receptor during gastric ulcer healing in rats[J].Gastroenterology，1992，102（2）：695－698.

[2]Okabe S，Roth JL，Pfeiffer CJ.A method for experimental，penetrating gastric and duodenal ulcers in rats[J].Am J Dig，1971，16（3）：277－284.

[3]张敏.益气活血方对实验性胃溃疡的作用及作用机制的研究[D].呼和浩特：内蒙古医学院，2009.

[4]李廷荃，马贵同.补气活血中药对大鼠胃溃疡愈合过程中EGFR、bFGFR 蛋白表达的影响[J].上海中医药杂志，2008：42（7）：78－80.