高效液相色谱法测定安神胶囊中酸枣仁皂苷A含量

陈骁勇，葛玉松

(1.江苏省盐城市第一人民医院，江苏 盐城 224001; 2.江苏省盐城市药品检验所，江苏 盐城 224002)

安神胶囊是一种常用中成药，由炒酸枣仁、川芎、五味子等几味药组方，具有补血滋阴、养心安神的功效。原标准[1]只有五味子、川芎的薄层鉴别以及五味子的高效液相色谱法含量测定。酸枣仁具有养心补肝、宁心安神、敛汗、生津功能，作为方中君药，却没有质量控制标准。为有效、准确地控制安神胶囊的质量，笔者参照文献[2－5]，以酸枣仁皂苷A为检测指标，建立了测定安神胶囊中酸枣仁皂苷A含量的高效液相色谱蒸发光散射检测器法，现报道如下。

1 仪器与试药

Aglient1200型高效液相色谱仪，包括G1311A四元泵高效液相色谱仪、G1322A真空脱气机、G1329A自动进样器、G1316A柱温箱、Varian 380－LC蒸发光检测器、Aglient色谱工作站(美国安捷伦公司);XS205DU型电子天平(梅特勒－托利多国际股份有限公司)。酸枣仁皂苷A对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110734－200510);安神胶囊(市售品);乙腈为色谱纯，水为娃娃哈纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Capcell pakmg C18色谱柱(150mm ×4.6mm，5μm);流动相:乙腈－水(40∶60);检测器:蒸发光散射检测器;流速:0.6mL/min，柱温:30℃。ELDS检测参数:漂移管温度为90℃;蒸发器气流:1.4 SLM;理论板数按酸枣仁皂苷A计算应不低于2 000[3]。

2.2 溶液制备

精密称取五氧化二磷减压干燥12 h以上的酸枣仁皂苷A对照品10.39mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取本品20粒内容物，研细，取约2.5 g，精密称定，加甲醇60mL，超声处理1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40mL，弃去氨洗涤液，再用水洗涤2次，每次40mL，分到正丁醇液，回收溶剂至干，残渣用水5mL溶解，通过D101型大也吸附树脂柱(内径为1 cm，柱高为10 cm)，用水40mL和40%乙醇30mL洗脱，弃去洗脱液，再用乙醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取不含炒酸枣仁的处方药味，按安神胶囊的制备工艺，制成阴性样品，再依法制备阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密量取质量浓度为0.207 8 g/L的对照品溶液适量，分别精密吸取 2，4，6，8，10，20 μL，按照 2.1 项下方法进样，以进样量的自然对数(Y)为横坐标、峰面积积分值的自然对数(X)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=0.561 9X － 1.764 7，r=0.998 4(n=6)。结果表明，酸枣仁皂苷A进样量在 0.415 6～4.156 0μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

专属性试验:取2.2项下3种溶液各10μL，按2.1项下色谱条件进样。结果阴性对照品溶液色谱在与对照品溶液色谱相同保留时间处未见色谱峰，故认为阴性对照无干扰。色谱图见图1。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液，连续进样6次，每次进样10 μL。结果的 RSD=0.38%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液，于 0，2，4，8，12，24 h 时分别测定峰面积。结果的 RSD=1.7%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验:取同一批号样品6份，按2.2项下方法制备溶液，照2.1项下色谱条件测定。结果酸枣仁皂苷A平均含量为0.146 1mg/g，RSD=1.2%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:取已知含量的同一批号(批号为20110501，含量为 0.146 1mg/g)样品约 2.0，2.5，3.0 g 各 3 份，精密称定，分别精密加入 2.2 项下对照品溶液 0.8，1.0，1.2mL，按供试品溶液制备溶液，照2.1项下色谱条件测定，计算加样回收率。结果见表1。

表1 酸枣仁皂苷A加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

同一批号的样品分别取2份，依法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液5，10μL和供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，照2.1项下色谱条件测定，按外标两点法对数方程计算含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=2)

3 讨论

安神胶囊临床用于阴血不足、失眠多梦、心悸不宁、五心烦热、盗汗耳鸣等症[1]。其主要成分为炒酸枣仁，而酸枣仁有效成分为各种皂苷类、黄酮类，酸枣仁中所含的皂苷类成分被一致认为是酸枣仁镇静催眠作用的有效成分[5－10]。因此可通过测定酸枣仁皂苷A的含量对酸枣仁药材的质量进行控制，进而有效、准确地控制安神胶囊的质量。

曾分别用超声处理、水浴回流等方法操作，发现两者差别不大，因超声在实际工作中使用方便，因此用超声处理[11]。曾有报道采用反相高效液相色谱法测定酸皂仁皂苷A[12]。酸枣仁皂苷类成分紫外吸收差，因此不能用紫外法。蒸发光散射检测器属通用型检测器，因此可用于同时测定酸枣仁中皂苷类成分和黄芪甲苷。从样品含量测定结果可以发现，各个批号样品含量测定数据相差较大，可能是因为原标准中炒酸枣仁没有质量控制指标，各个厂家所用酸枣仁质量有差别。

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