罗红霉素原位胶化滴眼液的制备及质量控制

张 伟 秦玉花 赵红卫 董根山 孟宪丽 张丹丹 李金伟 曹 玮

1.河南省人民医院，河南郑州 450003；2.河南中医学院，河南郑州 450003

罗红霉素是第二代大环内酯类抗生素，体内的抗菌活性比红霉素要强1～4 倍[1]，其作用机制为大环内酯刺激带着肽链的tRNA，使其在肽链伸长过程中从核蛋白体解离，从而抑制细菌蛋白质的合成。主要作用于革兰阳性菌、厌氧菌、衣原体和支原体等常见致病菌[2]。淋球菌和嗜肺军团菌对罗红霉素的MIC90均约0.25mg/L，对类杆菌属的MIC90为24 mg/L，对梭菌属的MIC90为3.3 mg/L，肺炎衣原体MIC90为0.25mg/L，肺炎支原体MIC90为0.03 mg/L，溶脲脲原体MIC90为1 mg/L[3]。对于由衣原体、支原体、军团菌等病原体所引发的呼吸道感染、咽炎、喉炎及皮肤软组织感染等作为首选药物，在临床上有着广泛的应用[4]。眼部药物传递系统作为控制释放领域的重要分支，一直受到人们的关注，眼部的有效保护机制与高密度的敏感性促使人们开发安全合理的给药系统[5]。为延长药物在眼内的生物利用度及作用持续时间，笔者选用罗红霉素为模型药物，通过实验将其制备成原位胶化滴眼剂。给药后药液与泪液中的Ca2+等阳离子接触迅速转型为凝胶，能有效延长药物停留时间，增加疗效。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV2102C 型分光光度计（尤尼柯仪器有限公司（UNICO），81-2 型磁力搅拌器（上海司乐仪器有限公司），pHS-3数字式酸度计（金坛市国旺实验仪器厂）。

1.2 试药

罗红霉素（湖北兴银河化工有限公司，批号：091102），罗红霉素对照品（河南省药检所提供，批号120221-200901，含量97.8%），海藻酸钠（佳麦化工有限公司，批号100311）；硼酸（湖南华日制药有限公司，批号100117），其余辅料为药用规格，试剂为分析纯。水选用注射用水。

2 方法与结果

2.1 处方与制备

2.1.1 处方 罗红霉素1 g；海藻酸钠10 g；硼酸18 g；土温-80 20 g；尼泊金乙酯0.1 g；注射用水加至1 000 mL。

2.1.2 制备 取处方量海藻酸钠加水至100 mL，加热、搅拌使其溶解，静置备用；精密称取罗红霉素1 g、硼酸18 g 用适量吐温-80 研磨均匀，加入尼泊金乙酯0.1 g 缓慢搅拌加入热注射用水使溶解。在迅速搅拌下将罗红霉素溶液缓缓加入海藻酸钠溶液中，用浓度为0.1 mol/L的氢氧化钠溶液将pH 调节至5.0～7.0，搅拌至均匀，抽滤，经滤器加注射用水至1 000 mL，100℃流通蒸汽灭菌30 min，无菌分装，即得罗红霉素原位胶化滴眼液。

2.2 性状

罗红霉素原位胶化滴眼液为无色澄明液体，其他均符合《中国药典》2010年版有关滴眼液项下之规定。

2.3 鉴别

2.3.1 性状鉴别 取本品加入适量浓硫酸5 滴，缓缓摇匀，1 min 内溶液颜色呈深墨绿色。

2.3.2 光谱鉴别 精密量取罗红霉素原位胶化滴眼液适量，用浓度为0.1 mol/L的盐酸溶液使之溶解，然后加入50 mL硫酸，再用浓度为0.1 mol/L的盐酸溶液稀释为35μg/mL。在（482±1）nm 波长处有最大吸收。

2.4 含量测定

2.4.1 溶液配制 精密量取罗红霉素原位胶化滴眼液及罗红霉素对照品适量，分别置100 mL 容量瓶中，加入浓度为0.1 mol/L的盐酸溶液使之溶解，然后加入50 mL 硫酸，用浓度为0.1 mol/L的盐酸溶液定容，放置约50 min，备用。

2.4.2 波长的选择[6]以浓度为0.1 mol/L的盐酸溶液作为空白溶液，前平行测定作为空白。于200～520 nm 波长范围扫描记录紫外吸收光谱，结果表明罗红霉素于482 nm 波长处有最大吸收，并且在此波长处辅料无吸收，因此确定测定波长为482 nm。

2.4.3 标准曲线的绘制 精密称取干燥至恒重的罗红霉素对照品15mg 于100 mL 容量瓶中，加入浓度为0.1 mol/L的盐酸溶液使之溶解﹑定容，再精密量取续滤液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL分别置于10 mL 容量瓶中，加入5mL 硫酸再用0.1 mol/L 盐酸定容，放置约50 min，各取适量溶液于482 nm 波长处测定，以浓度（C）对吸收度（A）作图，绘制标准曲线。得回归方程为C=45.288A-0.667 6（r=0.999 6），结果显示：罗红霉素在15～60 μg/mL 范围内其线性关系良好。

2.4.4 精密度试验 取同一份所制样品溶液，测定吸收度，连续测定5次。结果RSD=0.65%。

2.4.5 稳定性试验 所包装完好的制样品于室温放置6个月后，观察其性状、色泽和含量等指标均符合《中国药典》2010年版滴眼剂项下各项规定。

2.4.6 回收率试验 按处方比例精密称取主药和辅药，定量配制高、中、低3 种浓度，每种浓度各取样3次照含量测定项下的方法测定含量，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率实验结果（n=3）

2.4.7 重现性试验 精密量取同一批样品，按“2.4.3”项下方法连续测定5次，分别记录峰面积，结果显示含量平均值为 96.94%，RSD=1.88%（n=5）。

2.4.8 样品的含量测定 精密量取所制样品4.0 mL 置于100 mL 容量瓶中，用浓度为0.1 mol/L 盐酸溶液溶解﹑摇匀，加5mL 硫酸，再用浓度为0.1 mol/L 盐酸溶液定容，取续滤液放置约30 min，照分光光度法在波长（482±10）nm 处分别测定吸收度，同时以0.1 mol/L 盐酸溶液同法处理作为空白，分别按二者吸收度的比值计算罗红霉素含量，经测定批号为110216，110422，110919 三批样品，含量分别为标示量的96.85%，98.24%，98.77%。

2.5 刺激性实验

取健康成年家兔[河南省人民医院动物实验中心，SCXK（豫）-2011-0023]5只，体重为（2.5±0.5）kg，每只兔右眼结膜囊内滴入本品1～2 滴，左眼滴入0.9%氯化钠作为对照，分别于30、45min 和1、24 h 时观察兔眼角膜有无充血、红肿、浑浊等现象，结果双眼无明显变化，家兔无明显躁动。结果表明本品无刺激性，用药安全。

3 讨论

普通滴眼剂给药后，在异物的刺激下，眼睑不由自主的快速眨动同时大量的分泌泪液，导致滴眼剂因泪水的冲洗、眼睑的眨动而迅速被清除，普通滴眼剂的生物利用度一般都低于1%[7]。眼部原位胶化给药系统能有效避免上述缺点，按照其形成凝胶的原理可分为温度敏感型凝胶、pH敏感型凝胶和离子敏感型凝胶[8]。在滴入眼睛后，受到温度、pH 和离子强度的影响，立即转型为凝胶，通过眼睑的眨动迅速在眼球表面形成一层均匀的保护膜，不易被泪水冲走，既能避免突发释放药物和流入鼻泪管而引起不适，又能在相当长的时间内缓慢释放药物，提供平稳有效的药物浓度[9]。从而达到了缓释效果，且无眼膏剂的油腻感和不易涂布均匀，使用不便等缺点，增加了患者用药的依从性，保证了治疗效果，使该药更有效、更安全地用于临床，因此值得推广应用。

本品属于离子敏感型凝胶，海藻酸钠是一种亲水性多聚糖，通过与人体泪液中所含有的Na+、K+、Ca2+等阳离子的络合，引发构象改变，在眼中可以使滴眼剂由溶液型迅速转化为凝胶型，能显著增加药物在眼睛里的停留时间，增加疗效。滴眼液本身是溶液型便于临床给药和分剂量，实验表明海藻酸钠是一种良好的药物载体，所形成的凝胶的强度依赖于海藻酸钠的浓度和β-D 甘露糖酸所占的比例[10]。

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