高效液相色谱法测定苗药柏花草胶囊中盐酸小檗碱含量

罗永惠 任彩芬

（1.贵州德良方药业股份有限公司，贵州 兴义 562400；2.贵州大成药业有限公司，贵州 龙里 551200）

柏花草胶囊批准文号为：国药准字Z20110015，由黄柏、灵芝、仙鹤草、红花、百合共 5味中药组成，原为我省苗族民间长期使用确有疗效的验方。有清热止血，补气养阴的功效，用于治疗痔疮症见肛门肿痛，便时滴血，伴见口干口苦，大便干结、或伴见头晕目眩、四肢无力、面色无华、失眠多梦等症。为提高质量标准，经研究，建立了该制剂中君药黄柏有效组分盐酸小碱高效液相色谱（HPLC）的含量测定方法，极道如下。

1 仪器与试药

岛津LC-IATvp型高效液相色谱仪（SPD-10A紫外检测器），咸马龙色谱数据工作站；岛津UV-250IPC紫外 -可见分光光度计；梅特勒-托利多GF-2000型、AG245型电子天平。柏花草胶囊（贵州德良方药业股份有限公司），批号为 20090501、20090603、20090605；甲醇为色谱试剂，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯；盐酸小檗碱（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为110751-200810）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：SUPELCOSILTM LC-C18（5μm，250×4.6i.d.mm）。

流动相：乙腈-四氢呋喃 -0.05mol·L-1磷酸二氢钾（含 0.07%三乙胺，磷酸调 PH为 3）（140∶40∶820）；流速：1.2ml/min；柱温：30℃；检测波长：430nm；灵敏度0.5；进样量 10μl。

在此色谱条件下，理论塔板数以盐酸小檗碱计应不低于4000，阴性对照样品溶液在与对照品溶液和供试品溶液相同保留时间处未显色谱峰，故无干扰（图1）。

2.2 溶液制备：精密称取盐酸小檗碱对照品15.51mg（含量 98.14%）,置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得每1mL含0.305mg的对照品溶液。取装量差异项下的内容物，混合均匀，取约0.4g，精密称定，置100mL容量瓶中，精密加入甲醇-水-盐酸（80∶19∶1）50mL，密塞，于超声波中超声提取 10min，摇匀，静置，取上清液用0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。取除黄柏外的其余处方量药材饮片，按处方比例及工艺制备不含黄柏的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察：标准曲线的绘制：精密吸取对照品溶液 2、4、6、8、10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱以峰面积（μV·s）对质量（μg）进行线性回归计算（图7-3）， 得 回 归 线 性 方 程 为 ：C （μg）=6.9173×10-6A+9.186×10-3，τ=0.9999，拟和为过坐标原点的直线方程为 C（μg）=6.948×10-6A.将一供试品溶液进样分析所得峰面积分别代入上两式方程计算，结果的相对偏差为0.055%，由此可视截距近似为零，故正文采用外标一点法计算含量。线性范围为0.610～3.050μg。

对照品

样品

阴性

溶剂

精密度试验：取一供试品，按药材质量标准草案中供试液的制备方法制备供试液，重复进样5次，依法测定计算。峰面积值的RSD为0.47%（n=5），表明仪器精密度良好。

重现性试验：取同一批号的样品（批号为20090501）5份，精密称定同法制备5份供试液，分别进样，测定峰面积，结果盐酸小檗碱平均含量为3.53%，RSD为0.63%.表明方法重现性较好。

稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别在制备后0、2、4、6、12、24h进行测定峰面积。结果表明供试品溶液在 24h内测定稳定性良好，RSD为 0.11%（n=5）。

加样回收率试验：称取已测定含量为4.72%的样品（批号为 20090601）细粉 150mg,加入不同量的盐酸小檗碱对照品，同法制备6份供试液，分别进样，测定峰面积，结果盐酸小檗碱的平均回收率为99.16%，RSD为0.11%，说明具有较好的加样回收率。

2.4 样品含量测定：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，按上述色谱条件测定十批样品的盐酸小檗碱含量结果，其结果分别为21.55、21.20、16.80、16.20、16.10、18.20、17.90、24.10、23.50、23.80mg/粒（n=2）.

3 讨 论

根据盐酸小檗碱紫外扫描结果，盐酸小檗碱在228.6、264.6、348.8、429.4nm处均有显著吸收峰，实验结果表明，在430nm下检测，图谱分离较好，阴性对照无干扰，故选定430nm为制剂中盐酸小檗碱的检测波长。用乙腈-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸二氢钾（含0.07%三乙胺，磷酸调 pH为 3）（140∶40∶820）；乙腈-0.1%磷酸溶液（每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g）（50∶50）等流动相试验，结果以文中所用流动相所得图谱峰形，分离度较好。曾以流速为0.8、1.0、1.2ml/min进行试验，结果流速为1.0ml/min时峰形、压力最好。根据10批样品测定结果及考虑到黄柏药材的产地、采收季节、制剂等因素，按70%计算，可考虑柏花草胶囊中盐酸小檗碱的含量限度为不得少于10mg/粒。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社,2005,10.

[2]张绪峤.药物制剂设备与车间工艺设计[M].北京：中国医药科技出版社,2000,8.