藏药安神丸的毒理学研究

红 梅 陈秋红 刘有菊 王志瑾

（1.青海省藏医药研究院药物研究所， 青海 西宁 810003；2.青海高原医学科学研究所中心实验室，青海 西宁810012）

藏药安神丸由槟榔、沉香、丁香、肉豆蔻、木香、广枣等15味藏药组成，用于养心安神，治疗失眠、神经衰弱的藏药精品，是西藏医保品种。先后被列入《青海省藏药标准》[1]和《卫生部部颁药品标准》[2]。在治疗神经官能症有独特的疗效[3]。为观察藏药安神丸的安全性，进行了为期14天的急性毒性实验和3个月的长期毒性实验研究，提供科学的实验依据。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂：安神丸由金诃藏药药业生产部提供，批号：20110303，成年人常规用量 0.03g/（kg.d）实验前加蒸馏水制成一定浓度的混悬液，置冰箱备用。

1.2 实验动物：KM种小鼠、体质量 18～22g，清洁级，均由青海省实验动物中心提供，合格证号：青医动字第零零一号，SD大鼠体质量90～110g，由军事医学科学院提供，合格证号：1100007611。雌雄各半，分笼饲养，室温（22±2）℃,温度 40%～60%，人工控制光照昼夜各 12h，自由饮水。

1.3 仪器：全自动生化分析仪 Olympas-au640（日本）、血细胞分析仪 KX-21N（日本）、电子天平、离心机、石蜡切片机、显微镜（北航医学图象分析管理系统）等。

1.4 统计学分析：各项指标均用组间比较进行显著性t检验，所有剂量资料以均数±标准差表示。

1.5 实验方法

1.5.1 急性毒性实验[4]：经预实验，由于受药物浓度以及给药体积的限制，无法测出半数致死量（LD50），只能测定其1日内最大耐受量。

表1 给药、停药期间大鼠体质量变化情况（ ± s）

表1 给药、停药期间大鼠体质量变化情况（ ± s）

与空白对照组比较，P>0.05

日期（w） 空白对照组 安神丸低 安神丸中 安神丸高给药前体质量第一第二第三第四第五第六第七第八第九第十第十一第十二第十三停药第一停药第二117.40±8.06 152.91±10.46 186.68±16.69 213.75±27.97 240.78±38.89 261.64±47.42 279.80±58.15 301.70±67.65 307.28±70.68 323.22±78.61 320.79±78.98 325.72±85.95 338.86±86.16 340.50±88.97 341.42±93.35 341.74±89.50 116.01±21.36 148.17±9.39 193.29±16.11 217.96±23.43 241.43±35.66 262.06±41.99 278.69±52.14 291.83±54.07 294.31±58.85 311.73±67.60 318.53±69.15 320.50±75.56 340.29±80.64 337.95±76.24 337.55±79.79 341.74±78.55 113.58±21.94 146.96±12.27 192.23±23.27 217.59±33.73 242.62±43.40 262.26±51.51 279.05±61.12 298.71±68.49 297.08±68.64 317.00±75.22 334.89±112.13 322.39±83.20 340.67±86.47 340.29±84.22 345.80±93.04 344.17±87.66 108.87±34.05 149.24±11.67 193.18±23.29 215.91±30.66 238.72±41.12 260.95±51.18 284.44±62.30 290.75±70.44 297.33±70.03 310.87±77.36 309.23±71.72 310.98±77.86 325.23±80.14 324.09±74.62 329.38±80.06 333.55±82.58

表2 给药 45d、90d及停药 15d大鼠脏器系数的变化（ ±s，n=10，mg/100g）

表2 给药 45d、90d及停药 15d大鼠脏器系数的变化（ ±s，n=10，mg/100g）

与空白对照组比较，P>0.05

项目 日期（d） 空白对照组 安神丸低 安神丸中 安神丸高心肝脾肺肾肾上腺大脑给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15 294.69±21.64 282.76±27.83 280.49±60.96 2628.70±257.03 2555.42±282.84 2592.44±427.26 176.79±24.38 169.00±30.29 182.97±31.55 504.13±46.09 502.30±54.57 485.23±103.57 689.45±44.44 582.94±51.01 594.17±112.53 17.49±5.08 16.39±7.39 13.03±6.24 672.4±135.52 620.86±147.03 606.01±163.25 285.00±80.05 263.88±20.87 265.91±40.30 3031.27±1028.94 2507.27±242.54 2959.37±492.55 195.95±64.33 179.88±27.72 166.30±24.79 546.86±174.14 475.43±77.92 624.93±399.49 655.95±211.09 582.60±37.04 534.08±69.83 19.71±5.74 16.00±7.29 16.15±7.23 697.35±153.08 627.63±149.22 610.33±142.55 303.73±64.83 275.22±26.74 276.40±28.26 3035.45±592.02 2541.98±148.42 2666.62±308.94 194.66±53.47 169.81±23.50 197.80±99.92 505.88±74.90 487.33±65.46 423.17±161.15 667.06±89.96 593.38±39.59 695.83±289.26 19.72±9.42 16.25±5.58 13.96±4.35 697.72±165.34 629.34±138.77 593.72±150.04 288.34±28.64 278.96±20.51 317.47±118.29 2930.81±308.94 2655.51±262.38 2760.41±230.88 192.34±46.35 189.03±30.57 151.65±62.56 475.51±51.87 485.85±56.53 438.98±108.27 677.90±52.59 624.86±50.58 618.49±71.85 19.30±5.41 15.54±6.61 16.05±5.55 691.65±156.59 654.23±143.34 651.72±145.03

表3 给药 45d、、90d及停药 15d大鼠的血液生化指标（± s，n=10）

表3 给药 45d、、90d及停药 15d大鼠的血液生化指标（± s，n=10）

与空白对照组比较，P>0.05

空白对照组项目 日期（d） 安神丸低 安神丸中 安神丸高ALT（U/L）AST（U/L）T-BIL（μmol/L）TP（g/L）A/G UA（μmol/L）ALB（g/L）BUN（mmol/L）GLU（mmol/L）CREA(umol/l)给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15 30.89±4.28 34.10±5.24 33.70±4.27 133.67±30.68 162.00±22.14 141.90±45.93 1.01±0.62 1.06±0.48 1.13±0.47 58.69±4.77 56.54±6.50 55.62±4.11 0.84±0.09 0.78±0.11 0.83±0.16 49.00±15.06 52.30±8.82 52.80±13.61 26.92±2.99 24.79±3.49 25.17±3.10 6.01±0.67 7.62±0.99 5.94±0.73 3.57±1.57 2.97±0.44 4.28±0.78 61.56±6.50 51.40±6.60 63.20±5.33 29.70±6.62 35.90±6.82 36.10±6.76 136.80±41.52 156.31±20.41 148.30±27.89 0.77±0.32 0.99±0.49 1.08±0.42 55.93±3.32 57.09±2.81 57.68±5.06 0.83±0.07 0.77±0.07 0.86±0.10 59.30±39.22 44.80±11.79 53.70±11.21 25.08±1.51 24.19±2.48 26.55±3.49 6.14±1.27 7.34±0.84 5.75±0.81 4.25±0.99 2.68±0.65 5.08±0.96 67.70±12.88 48.70±4.55 59.34±5.13 31.90±6.62 32.80±4.02 34.90±6.19 125.70±21.15 149.80±15.34 139.10±34.39 0.76±0.37 0.93±0.46 1.37±0.53 54.41±4.71 58.19±4.66 56.46±4.33 0.85±0.07 0.72±0.09 0.83±0.13 41.30±10.54 54.40±33.99 64.10±30.87 25.13±2.81 24.47±2.77 25.68±3.74 6.31±0.59 7.01±1.11 5.53±0.96 3.98±0.81 2.70±0.59 4.76±0.39 65.70±7.79 47.40±3.03 62.00±7.76 31.60±6.31 39.20±8.88 34.90±6.77 138.40±41.00 164.40±26.98 152.10±43.83 0.66±0.36 1.15±0.62 1.45±0.16 54.04±2.32 57.27±3.41 57.86±4.92 0.84±0.05 0.74±0.08 0.81±0.12 45.10±9.45 51.80±46.35 54.00±9.33 24.88±1.35 24.90±2.61 25.72±2.09 5.62±0.65 7.59±1.01 6.22±0.99 3.63±1.07 2.61±0.74 4.62±0.37 60.50±7.71 48.20±3.46 65.24±9.13

表4 给药 45d、、90d及停药 15d大鼠的血象指标（± s ，n=10）

表4 给药 45d、、90d及停药 15d大鼠的血象指标（± s ，n=10）

与空白对照组比较，P>0.05

安神丸低 安神丸中空白对照组安神丸高项目 日期（d）WBC（109/L）RBC（1012/L）HGB（g/L）HCT（%）MXD（%）NEUT（%）LYM（%）MCHC（g/L）MCH（pg）Plt（109/L）给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15给药45给药90停药15 3.27±1.34 3.39±1.84 4.66±2.30 8.29±0.73 8.22±0.84 8.61±0.86 166.67±10.81 151.50±10.36 154.60±12.00 48.63±2.44 46.38±2.73 47.99±3.43 3.58±1.40 3.52±2.11 3.91±0.82 15.54±6.47 11.54±7.87 10.74±4.53 72.88±25.28 78.78±5.27 82.06±3.02 331.25±6.42 326.70±8.38 322.00±5.60 20.17±0.69 18.52±0.71 18.00±0.58 865.24±88.07 786.90±96.57 881.20±102.67 4.27±1.55 3.88±1.87 4.38±4.38 8.02±0.63 8.67±0.86 8.63±0.61 155.50±11.33 160.00±8.37 157.90±9.33 47.65±3.95 47.85±2.58 48.00±2.47 4.04±1.54 4.93±3.89 3.11±1.40 16.23±5.60 13.47±6.55 11.24±4.41 83.34±2.93 77.20±4.96 83.18±4.76 326.50±8.46 328.43±6.00 328.80±6.43 19.75±0.34 18.57±1.09 18.32±0.45 866.2±170.99 824.80±142.94 815.50±108.73 3.41±1.65 3.64±1.93 3.53±1.70 7.89±0.53 0.70±0.67 8.88±0.80 159.90±11.92 155.50±6.20 162.10±10.06 47.93±3.48 47.05±1.34 48.98±2.62 4.09±2.07 4.02±1.07 3.13±1.64 19.98±7.13 12.35±3.79 15.46±10.05 73.21±6.56 77.91±3.95 76.16±7.21 333.60±5.13 330.50±4.74 324.15±5.82 20.26±0.53 18.09±0.79 18.32±0.73 862.80±71.73 845.61±113.27 906.60±105.72 3.61±1.86 4.11±1.98 4.20±2.55 7.84±0.49 8.29±0.70 8.33±0.81 159.80±10.00 152.60±11.34 151.50±11.69 47.67±2.46 46.76±3.39 46.98±2.86 3.04±1.84 3.33±1.15 5.36±5.11 15.14±7.29 11.32±5.12 11.49±6.30 78.63±7.18 78.78±3.03 78.26±7.35 335.10±6.97 326.40±7.41 322.40±6.57 20.38±0.56 18.43±0.44 18.25±0.51 853.00±81.79 827.40±75.54 880.80±123.38

取健康昆明种小白鼠60只，雌雄各半，随机分为2组，分别为空白组和安神丸组。选用拟临床实验的给药途径—灌胃（ig），以小鼠能够耐受的最大浓度0.35g/ml、最大体积0.5ml/只的药量24h内连续4次给予小鼠，空白对照组给痛体积的蒸馏水，实验期间观察动物行为、外观、毛色、尿色、粪便、活动情况、饮水和饮食量及检测给药前和给药后2周体质量等；抽取空白组和给药组雌雄各4只，处死、解剖，肉眼观察各脏器有无明显病变，取肝、肾脏器，进行常规病理学检查。

1.5.2 长期毒性实验[4]：健康高白鼠 128只，雌雄各半，随机分为4组，分别为空白组、安神丸低剂量组（0.75g/kg）、安神丸中剂量组（1.5g/kg）和安神丸高剂量组（3g/kg）（该剂量相当于临床拟日用药量的 25、50、100倍）组，每组32只。ig给药，每天1次，空白对照组给同体积的蒸馏水，共 90d，实验期间观察动物行为、外观、毛色、尿色、粪便、活动情况、饮水和饮食量及检测每周体质量；在给药45d、90d和停药 15d每组各处死 10只，腹主动脉采血测定血液学指标、血液生化指标，分别取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、大脑等脏器肉眼观察有无异常并称重，随后于各剂量组抽取3～4只大鼠所取脏器（雌雄各半），进行常规病理组织学检查。

2 实验结果

2.1 小鼠最大耐受量：24h给药4次藏成药安神丸混悬液，观察第四次给药时，发现雄性3只小鼠有轻微竖毛，精神不振。给药总剂量为35g/kg，相当于临床常规用药剂量的1167倍，药后观察 14d，小鼠外观、行为、体质量增长等均和空白组无明显差异，未出现小鼠死亡情况，各组小鼠解剖经肉眼观察，给药组与空白组比较小鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、肠等脏器亦无明显异常，对抽取的肝、肾组织的病理检查亦未见明显的病理改变。

2.2 大鼠长期毒性实验

2.2.1 安神丸对长毒大鼠行为、外观等影响：通过90d的实验观察表明，安神丸各组剂量组对大鼠的毛色、尿色、粪便、活动情况、外观、饮水和饮食量均无明显影响，和空白对照组比较无明显差异。

2.2.2 安神丸对长毒大鼠体质量的影响：实验结果见表1。结果表明 ig安神丸 3 g/kg、1.5 g/kg及 0.75g/kg对大鼠的体质量均未见明显的影响，和空白对照组比较无显著性差异（P>0.05）。

2.2.3 安神丸对长毒大鼠脏器比重的影响：实验结果见表2。结果表明：安神丸给药 90d后高、中、低各剂量组脏器指标均未见明显改变，和空白对照组比较无显著性差异（P>0.05）。

2.2.4 安神丸对长毒大鼠血液生化指标、血液学指标的影响：结果表明，安神丸给药 45、90、停药 15d后低、中、高各剂量组血液生化、血象指标均未见明显改变，和空白对照组比较无显著性差异（P>0.05）。

2.2.5 安神丸对长毒大鼠主要器官组织形态学的影响：藏药安神丸给药90d并停药15d，麻醉采血后，解剖取各组大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、大脑等主要脏器，首先肉眼观察色泽、形态、体积与空白组比较无明显异常，然后每组随机取3～4只大鼠脏器同一位置，4%的甲醛溶液固定，进行常规病理学检查。结果表明：各给药组脏器光镜下观察形态均无异常，与空白组比较未见药物性病变。

3 讨 论

本文观察了藏药安神丸最大耐受量为35g/kg，是临床剂量的 1167倍，连续观察 14d，小鼠外观、行为、体质量增长等均和空白组无明显差异，未出现小鼠死亡情况，各组小鼠解剖经肉眼观察，给药组小鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、肠等脏器亦无明显改变，取肝、肾光镜检查和空白组相比无明显差异。

长期毒性实验，以藏药安神丸每天灌胃连续90天，大鼠生长发育良好，无死亡，实验动物外观、行为活动、体质量增长、主要脏器系数、血象、血液生化等指标与空白对照组比较均无显著性差异。对心、肝、脾、肺、肾、肾上腺等主要脏器组织结构肉眼及光镜检查亦无异常发现。

以上毒性实验研究结果提示，大鼠在0.75～3g/(kg.d)连续灌胃给药 3个w，未发现药物所致的毒副反应，所以在临床用药周期内是安全的。

[1]青海省卫生厅.青海省藏药标准[S].1992:142.

[2]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准藏药[S].1995:316.

[3]多杰拉旦,扎登.藏药安神丸治疗神经官能症30例疗效观察[J].中国民族医药杂志,2001:7（4）：5,

[4]陈奇.中药药理研究方法学[M].第1版.北京:人民卫生出版社,