HPLC法测定蒙药清血八味散中甘草酸含量

李改莲

(内蒙古自治区中医医院，内蒙古 呼和浩特 010020)

本品主要由寒水石、紫草、土木香、栀子、瞿麦、石膏、甘草、牛黄等8味药材组成。有清血热作用。用于血热头痛、口渴目赤。本品收载卫生部药品标准蒙成分册［1］，标准中无含量测定指标。本文以甘草中甘草酸成分为指标，建立HPLC法的相对质量标准。

1 仪器、试剂及样品

仪器:1100型高效液相色谱仪(安捷伦)。NC－2000型色谱工作站(大连中北通用)。PL202－S/00型电子天平(上海梅特勒一托利多集团);M4821超声处理仪(上海昆山)。

试剂与样品:甲醇为色谱纯，其它为分析纯试剂。甘草酸单铵盐(0731－9704)，含量98．7%，由中国药品生物制品检定所提供。清血八味散(批号20030505，20030510，2003051)由内蒙古中蒙医研究所药物研究室制备。

2 方法与结果

2．1 色谱条件:色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶翡纳米柱(200×4．6mm，5μm)。甘草酸流动相:甲醇 －0．2mol乙酸铵－冰乙酸(310:190:5)，检测波长250nm，流量1mL·min－1，柱温℃。

2．2 测定溶液的制备与测定

2．2．1 对照品溶液的制备与测定:精密量取对照品甘草酸1．12mg，置10mL容量瓶内，加甲醇溶解至刻度，为A溶液，精密吸A溶液1mL置10mL量瓶内为B溶液，吸取A溶液8、6、4、2μL，B 溶液6、4、2、1μL 按色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品含量为横坐标，绘制标准曲线，作回归分析。回归方程:Y=1355919x－713，r=0．9996。甘草酸在0．0672～0．896μg范围内线性关系良好。2．2．2 供试品溶液的制备:取本品，细研，过100目筛，精密称重0．15g，置10mL量瓶内，加甲醇至刻度，样品溶液转移至50mL具塞锥形瓶中，称定重量，超声处理(功率100W，频率40kHz)40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静止，微孔滤膜过滤(0．45μm)，即的。

2．2．3 阴性试验:依照样品制备方法制备不含甘草的清血八味散阴性制剂，依照色谱条件测定，阴性对照品在甘草酸保留时间内无干扰峰出现。

2．3 精密度试验:精密吸取同一供试品溶液10μL，连续进样5次，测定甘草酸峰面积积分值，峰面积积分值RSD=0．46%，符合测定要求。

2．4 重复性试验:取同批次样品，按2．2．2项下的方法制备样品5份。测定结果，甘草酸平均含量为0．40mg·g－1，RSD 为1．2%。

2．5 稳定性试验:取同一供试品溶液4μL，分别于样品制备后第0、2、8、12h测定甘草酸峰面积，峰面积值 RSD=0．6%。样品溶液在12h内稳定。

2．6 回收率试验:精密称取6份同批号样品各0．1g，分置10mL 量瓶内，加．3mL(0．112mgμmL－1)标准品溶液，加甲醇至刻度。其余按2．2．2项下的方法制备样品，取续滤液10μL，照色谱条件测定。测定结果表明，平均回收率为102．6%，RSD=2．6

表1 样品甘草酸加样回收率测定

3 样品测定

分别吸取对照品溶液与样品溶液10μL，依上述色谱条件测定批样中甘草酸含量，3批样品，20030510，20030515 甘草酸的含量分别为．40、0．42、0．41mg·g－1，平均含量分别为．41mg·g－1。

4 小结

采用HPLC法测定清血八味散中甘草酸的含量，操作简便，准确可靠，可用于制定该药品的质量控制指标之一。

［1］国家药典委员会编辑．卫生部药品标准－蒙药分册［S］．1998，165

［2］国家药典委员会．中国药典［S］．一部．北京:中国医药科技出版社，2010，80