毛细管气相色谱法测定二氟泼尼酯原料药中5种有机溶剂的残留量Δ

冯光玲，冯爱国，丁文娟，孔祥雨，刘宪华（1.山东省医药工业研究所，济南250101；2.山东省化学药物重点实验室，济南 250101；.山东临沂动植物园，山东临沂 27607）

二氟泼尼酯（Difluprednate）又名醋酸丁酸二氟强的松龙，是一种泼尼松龙的二氟化衍生物，具有强效抗炎活性。该原料药国内正处于在研状态。其分子式为C27H34F2O7，相对分子质量为508.56，结构与其他皮质激素类药物相似，氟化在C-6位和C-9位。该化合物在合成工艺中使用了甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇等有机溶剂（所用溶剂由山东省医药工业研究所合成室依据合成路线提供），为保证用药安全，应对这5种有机溶剂残留量进行控制。由于气相色谱法具有分析速度快、分离效率高、灵敏度高的优点，被广泛用于药物中有机溶剂残留量的测定。为此，笔者建立了以N，N-二甲基甲酰胺（DMF）为溶剂（本品极微溶于水），采用毛细管气相色谱法[1]测定二氟泼尼酯原料药中5种有机溶剂残留量的方法，结果表明，建立的方法灵敏、准确。

1 材料

6890气相色谱仪、7694E自动顶空进样器（美国Agilent公司）。

二氟泼尼酯原料药（山东省医药工业研究所合成室提供，批号：120602、120604、120606，纯度：99.79%、99.81%、99.83%）；甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、乙醇和DMF均为分析纯，含量均≥99%。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：HP-5毛细管柱（5%苯基-95%甲基聚硅氧烷为固定液）；柱温：35℃保持5min，再以50℃/min的速率升温至200℃，保持5min；氢火焰离子化检测器，检测器温度：250℃；载气：高纯氮气，流速：30ml/min；进样口温度：200℃；分流比：10∶1。

采用顶空进样法测定，顶空进样条件：加热温度：100℃，加热时间：45min，进样量：2ml（顶空气体进样）。

2.2 溶液配制及系统适用性试验

空白溶液：精密量取DMF 2ml，置于顶空进样瓶中，作为空白溶液。

标准溶液贮备液：称取甲苯约89mg、二氯甲烷约60mg、正己烷约29mg、乙酸乙酯约500mg、乙醇约500mg，加入有适量DMF的100ml量瓶中，充分振摇使溶解，加DMF稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液贮备液。

标准溶液：精密量取上述贮备液5ml，置于50ml量瓶中，加DMF至刻度，摇匀，精密量取2ml置于顶空进样瓶中，作为标准溶液。

供试品溶液：精密称取二氟泼尼酯原料药0.2g，置于顶空进样瓶中，精密加入DMF 2ml，作为供试品溶液。

取标准溶液进行分析，色谱见图1A。由图1A可见，各溶剂分离良好，空白溶剂无干扰。

图1 毛细管气相色谱图A.标准溶液；B.供试品溶液；1.乙醇；2.二氯甲烷；3.正己烷；4.乙酸乙酯；5.甲苯；6.DMFFig 1 Capillary GC chromatogramsA.standard solutions；B.test samples solutions；1.alcohol；2.dichlormethane；3.n-hexane；4.acetic ether；5.methylbenzene；6.DMF

2.3 标准曲线的制备

分别精密量取标准溶液贮备液0.50、0.75、1.00、1.25、1.50ml，置于10ml量瓶中，加DMF稀释至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液2ml，分别置于顶空进样瓶中，按“2.1”项下色谱条件分别进样。分别以甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇质量浓度（c）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标绘制标准曲线，得甲苯：A＝0.8961c－1.076（r＝0.9995）；二氯甲烷：A＝0.2532c－0.4658（r＝0.9995）；正己烷：A＝6.3875c－6.9322（r＝0.9999）；乙酸乙酯：A＝0.7329c－23.4（r＝0.9992）；乙醇：A＝0.4517c－16.71（r＝0.9990）。结果表明，甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、乙醇检测质量浓度线性范围分别为44.53～133.59 µg/ml、30.03～90.08 µg/ml、14.51～43.52 µg/ml、250.1～750.3mg/ml、250.4～751.2mg/ml。

2.4 精密度试验

取标准溶液适量，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6次，记录色谱图，计算RSD。结果甲苯RSD为3.93%、二氯甲烷RSD为2.37%、正己烷RSD为3.83%、乙酸乙酯RSD为2.89%、乙醇RSD为3.22%。表明精密度符合要求。

2.5 回收率试验

精密称取样品（批号：120602）0.2g，共10份，其中1份精密加入2ml DMF，作为空白溶液；分别配制低（80%）、中（100%）、高（120%）3种浓度的对照溶液，精密量取上述不同浓度的对照溶液2ml，加入盛有样品的顶空进样瓶中。以“2.2”项下的标准溶液作为对照，分别进样。得甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇的低、中、高浓度的回收率分别为94.4%、95.7%、95.9%，95.6%、95.3%、96.7%，95.5%、93.8%、95.6%，96.3%、95.7%、96.8%，95.1%、95.9%、97.4%，平均回收率分别为95.2%（RSD＝1.07%）、96.7%（RSD＝1.76%）、94.9%（RSD＝1.98%）、96.1%（RSD＝1.95%）、96.1%（RSD＝1.12%），表明本法准确度符合要求。

2.6 定量限、最低检测限试验

将标准溶液逐级稀释，分别精密量取2ml，置于顶空进样瓶中，分析、记录色谱图，直至信噪比为10∶1和3∶1，即得定量限和检测限。结果甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇的定量限分别为0.445、0.36、0.116、0.5、0.125ng，检测限分别为0.178、0.06、0.029、0.15、0.04ng。

2.7 样品中有机溶剂残留量测定

精密量取标准溶液和供试品溶液适量，分别进样测定，以外标法计算。结果，3批样品的乙酸乙酯残留量平均值分别为0.20%、0.19%和0.19%，均未检出甲苯、二氯甲烷、正己烷和乙醇。其中批号为120602的样品色谱图见图1B。

3 讨论

本试验测定的5种有机溶剂沸点有差异，选用非极性柱或弱极性柱可以进行分离，但一般的填充柱达不到检测要求，故选用毛细管柱。

本试验采用程序升温的方法，先在35℃保持5min，使低沸点的溶剂有效分离，然后以50℃/min的速率升温至200℃，保持5min，使DMF加快出峰，以改善峰形。

为了保证用药的安全性，根据2010年版《中国药典》[2]的要求，将二氟泼尼酯中甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇的限度定为0.089%、0.06%、0.029%、0.5%和0.5%。

经过验证，本文建立的方法线性、精密度、回收率、定量限、检测限以及系统适用性均较好，能够准确、迅速地检测出二氟泼尼酯原料药中残留的甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇。

[1] 周研，刘波平，罗香，等.顶空毛细管气相色谱法测定非那雄胺中有机溶剂的残留量[J].分析测试学报，2007，26（1）：131.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录63.