HPLC 测定玉郎伞中芒柄花素的含量

陆 晖 陆瑞勇

广西壮族自治区花红药业股份有限公司，广西 柳州 545007

玉郎伞为豆科植物疏叶崖豆Millettia pulchra(Benth.)Kurz var.laxior(Dunn)Z.Wei的根，又名小牛力、单刀根、大罗伞等[1]，为广西壮、瑶族传统习用民族药，也是花红药业独家品种消肿止痛酊主药之一，具有散瘀，消肿，止痛，宁神功效，用于治疗小儿疳积、跌打肿痛、骨折等症[2]。为了更好的控制药材质量，对玉郎伞中芒柄花素的HPLC测定方法进行了系统研究。

1 材料

1.1 仪器 1200高效液相色谱仪 (美国安捷伦);G1311A四元泵;G1314B可变波长检测器;G1316A高性能自动进样器;AL104型电子分析天平 (梅特勒－托利多仪器有限公司);SB4200DT型超声波清洗机 (宁波新芝生物科技股份有限公司);HK－08型摇摆式粉碎机 (广州旭朗机械设备有限公司)。

1.2 试药 芒柄花素 (由上海源叶生物科技有限公司提供，经HPLC检查纯度＞99%)，乙腈、磷酸为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为娃哈哈饮用纯净水。5批玉郎伞样品均由广西中医药大学韦松基教授鉴定为为豆科植物疏叶崖豆Millettia pulchra(Benth.)Kurz var.laxior(Dunn)Z.Wei的根，药材来源见表2。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Zorbax XDB－C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm);以乙腈 －0.5%磷酸 (35:65)为流动相;检测波长:250nm;柱温:30℃;流速:1.0ml/min;进样量 10μl。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取芒柄花素对照品5.1mg，置于20ml量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，作为贮备液 (芒柄花素浓度为0.255mg/ml)，精密量取贮备液1ml，置于25ml量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，即得芒柄花素浓度为0.0102mg/ml的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取玉郎伞粉末 (过三号筛)约1g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入50ml甲醇，密塞，称定重量，超声处理30min，取出，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4 标准曲线的绘制 精密吸取芒柄花素对照品溶液 (C=0.0102mg/ml)2、5、10、15、20、2μl进样，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以峰面积A对进样量 (μg)进行线性回归计算，得线性回归方程为:A=1.571×104X－10.681，R=0.9999。芒柄花素在0.0204～0.255μg，与峰面积线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取芒柄花素对照品溶液 (C=0.0102mg/ml)10μl，连续进样5次测定，芒柄花素的RSD为0.07%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取供试品溶液 (5号样品)，分别于0、4、8、24h进样 10μl，测定，芒柄花素面积值 RSD为0.5%，表明供试品溶液在24h有良好的稳定性。

2.7 重复性试验 对同一批玉郎伞药材 (5号样品)平行制备5份供试品溶液，分别进样测定，计算其芒柄花素含量，其RSD为2.1%，表明该方法的重复性良好。

2.8 加样回收率试验 精密称取同一批玉郎伞药材粉末(5号样品，含芒柄花素0.2469mg/g)5份，各取约1g，每份等量加入芒柄花素贮备液 (C=0.255mg/ml)1.0ml，按“2.3”项下进行样品制备并测定，计算回收率。芒柄花素的平均回收率为98.27%，RSD为0.8%，结果见表1。

表1 芒柄花素加样回收率试验结果 (n=5)

2.9 样品测定 按“2.3”项，对5批玉郎伞药材进行测定，每批平行测定两份，测定结果见表2。

表2 药材来源及样品含量测定结果(n=5)

3 讨论

玉郎伞作为为广西壮、瑶族传统习用民族药，具有广泛的使用基础。但其含量测定的文献很少，其执行标准《广西壮族自治区壮药质量标准》无含量测定项，本文建立了玉郎伞药材中芒柄花素的含量测定方法，并测定了不同产地的玉郎伞，可为玉郎伞药材质量标准的建立提供参考。

[1]广西壮族自治区食品药品监督管理局.广西壮族自治区壮药质量标准(第一卷)[S].南宁:广西科学技术出版社，2008:72.

[2]广西卫生厅.广西中药志 (第二辑) [M].南宁:广西人民出版社，1963:74.