草分枝杆菌协同抗生素对猪支原体和放线杆菌的控制研究

刘安石 黄洪波 黄迪辉 张成军 殷建建 刘进辉

（1.湖南农业大学动物医学院，长沙 410128；

2.湖南省南县畜牧水产局厂窖动物防疫站，南县 413200；

3.湖南省沅江市畜牧水产局草尾动物防疫站，沅江 413100；

4.湖南省芷江县畜牧水产局，芷江 419100）

草分枝杆菌协同抗生素对猪支原体和放线杆菌的控制研究

刘安石1黄洪波2黄迪辉3张成军4殷建建1刘进辉1

（1.湖南农业大学动物医学院，长沙 410128；

2.湖南省南县畜牧水产局厂窖动物防疫站，南县 413200；

3.湖南省沅江市畜牧水产局草尾动物防疫站，沅江 413100；

4.湖南省芷江县畜牧水产局，芷江 419100）

为探讨草分枝杆菌协同抗生素对因感染支原体肺炎、放线杆菌引起的猪呼吸道疾病的治疗作用。试验选用60日龄左右经实验室确诊感染了支原体或放线杆菌的保育猪群，随机分为草分枝杆菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组、草分枝杆菌治疗组和泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组，并从临床症状、治愈率和增重3个方面考察试验效果。试验结果表明：草分枝杆菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组能在短时间内控制其临床症状（咳嗽、喘气和体温等），增重效果最好，且治愈率均显著高于泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组（P＜0.05），极显著高于草分枝杆菌治疗组（P＜0.01），说明草分枝杆菌对因感染支原体肺炎、放线杆菌的猪呼吸道疾病有极好的辅助治疗作用，但单用效果不理想。

草分枝杆菌 泰妙菌素 替米考星 猪支原体肺炎 猪、放线杆菌 治愈率 辅助治疗

猪支原体肺炎（MPS）又称猪气喘病，是由猪肺炎支原体（Mhp）引起猪的一种接触性呼吸系统传染病，在我国广泛存在，是造成养猪业经济损失最重要的疾病之一[1]。长期以来人们对本病的认识不是十分清楚，直至1965年Mare、Switzer和Goodwin[2]等才证实本病的病原为肺炎支原体。猪放线杆菌引起的猪传染性胸膜肺炎（PCPP），近年来呈逐年增强的趋势，其发病率和死亡率逐渐升高，给养猪业带来了极大的损失[3]。猪气喘病和猪传染性胸膜肺炎的主要临床症状表现为咳嗽，呼吸困难，生长缓慢，饲料转化率降低和抵抗力下降。急性猪传染性胸膜肺炎出现体温升高，死亡率增加。如发生继发感染，可能出现食欲不振，呼吸极度困难，咳嗽加重，体温升高及衰竭和死亡。此两病是造成养猪业经济损失的重大疾病之一。

草分枝杆菌是抗酸分枝杆菌中的一种，基于其同结核分枝杆菌的生物亲缘性，可介入动物的免疫过程，调节机体免疫系统的免疫能力。灭活的草分枝杆菌进入动物体后可刺激T淋巴细胞释放出多种淋巴因子如MAF、MIF、MCF、MMF等[4]，这些因子作用于单核巨噬细胞系统，使之向病灶部位聚集、活化，对病原菌进行吞噬、杀伤和清除；同时，自然杀伤（NK）细胞、B淋巴细胞也活化、增多；IgM、IgG趋正常，持久的介入动物体的免疫过程，不断的调节细胞及体液免疫系统[5]。草分枝杆菌是一种非病原性细菌，在人医临床上主要用于治疗免疫功能低下的疾病，如肺和肺外结核、慢性支气管炎、支气管哮喘、支气管扩张、胸膜炎、风湿性关节炎、胃炎、肠炎、肝炎、慢性扁桃体炎和糖尿病[6]等。20世纪90年代来，作为1种生物调节剂用于恶性肿瘤的治疗[6]。同时还能促进淋巴细胞的增殖并提高其杀伤活性，明显改善细胞免疫功能，而且效果迅速，持续时间长[7]。草分枝杆菌注射液联合特异性免疫治疗对呼吸道疾病有较显著疗效[8-10]，但国内外对草分枝杆菌在动物呼吸道疾病方面的疗效认识仍存在较大空白，还有待进一步的研究。

本课题试验研究主要是将草分枝杆菌用于对猪呼吸道疾病的治疗与研究，打破常规西医治疗猪呼吸道疾病的现状，减少西药药物残留和对机体脏器功能的损伤。试验结果如果呈现积极作用，那么使用草分枝杆菌协同抗生素治疗猪的呼吸道疾病将缩短疗程，减少用药量，提高猪自身抵抗免疫力，避免猪因其他呼吸道疾病引起的反复发作，提升治疗效果，控制猪场呼吸道疾病。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试药品

灭活草分枝杆菌粉剂：含量≥20.0%，湖南圣雅凯生物科技有限公司；磷酸替米考星粉剂：含量≥75.0%，山东久隆恒信药业有限公司；支原净（泰妙菌素）：含量≥99%，上海诺华生产。

1.1.2 试验动物

长沙县、南县、芷江县规模猪场，60日龄左右经实验室确诊患支原体肺炎（气喘病）的保育仔猪60头，患支原体肺炎和放线杆菌胸膜肺炎仔猪60头，体重为23.0±0.5 kg。

1.1.3 主要仪器

PCR仪：ABI公司；MOTIC2.0光学显微镜：北京中显恒业仪器仪表有限公司；FA1104N 电子天平：成都一科仪器设备有限公司；TG16型高速离心机：长沙英泰仪器有限责任公司；SW—CJ—IC超净工作台：苏州安泰空气技术有限公司。

表1 试验猪的分组与处理

1.2 方法

1.2.1 试验动物的筛选与分组

选择湖南长沙县、南县和芷江县几个规模猪场的患有呼吸道疾病的60日龄左右，体重为23 kg左右的保育发病猪400头，从中再经临床诊断和实验室确诊后选择患有猪支原体肺炎的病60头，患支原体肺炎和胸膜肺炎的病猪60头，按照随机分组的原则，分为泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组（1、2组），草分枝杆菌治疗组（3、4组），草分枝杆菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组（5、6组），分组情况见表1。

1.2.2 试验药物使用方法

磷酸替米考星拌料添加比例是每1 t饲料加入100 g，泰妙菌素拌料添加比例是每1 t饲料加入125 g，草分枝杆菌粉剂拌料添加比例是每1 t饲料加入2.5 kg，连续使用7 d。

1.2.3 疗效评价标准与体重变化

治愈：在试验期间，仔猪经给药后，咳嗽、喘气、腹式呼吸、精神不振、食欲减退等临床症状均消失。根据每组治愈猪头数占整组试验猪头数的比率计算治愈率。

有效：症状减轻，停药后有复发。

无效：在试验期间，试验猪临床症状没有消失甚至出现死亡。根据每组没有治愈的猪头数占整组试验猪头数的比率计算无效率。

增重：根据开始时及20 d试验结束时每头猪的体重，计算每头猪的增重，然后计算每组试验猪的平均增重。

1.2.4 数据的分析与处理

用SPSS13.0进行数据的显著性检验，其中，治愈率用卡方检验（卡方值=n[（A11/n1n1+A12/n1n2+...+Arc/nrnc）-1]），初始体重、终末体重和日增重用方差分析，并进行多重比较。

2 结果与分析

2.1 试验治疗效果

各组试验猪只治疗效果如表2所示。对单纯患支原体肺炎和患支原体肺炎与胸膜肺炎混合感染的试验猪只，草分枝杆菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组的治愈率最高达97.5%。而单纯的草分枝杆菌试验组治愈率最低，仅为47.5%，泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组的治愈率为87.5%。试验结果表明：草分枝杆菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组治愈率显著高于泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组（P＜0.05），极显著高于草分枝杆菌治疗组（P＜0.01）。而泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组也极显著高于草分枝杆菌组（P＜0.01）。

2.2 试验增重结果

试验结束时称重，各组猪的增重效果如表3所示。初始体重各组差异均不显著（P＞0.05），但试验增重效果以5、6组既草分枝杆菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组最好，草分枝杆菌组增重最差，但各组之间差异不显著（P＜0.05）。

2.3 临床症状观察

药物治疗各组的临床症状均能在用药后得到缓解或消除，但草分枝杆菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组的临床症状减轻和消失的最快，用药第1 d就有明显好转，第2 d、第3 d临床症状恢复正常。泰妙菌素+磷酸替米考星治疗组大部分咳喘猪连续咳喘转为断续咳喘，第3～5 d症状明显减轻。而草分枝杆菌组治疗组恢复较慢。

3 讨论

3.1 试验结果表明，泰妙菌素+磷酸替米考星试验治疗组相比草分枝杆菌治疗组在猪支原体肺炎和放线杆菌胸膜肺炎的呼吸道疾病治疗方面有显著的疗效。在分组试验中，其治愈率和平均猪终重均好于单独草分枝杆菌治疗，这一结果与我们试验前的预想是一致的。替米考星是20世纪80年代由英国Elanco动物保健品公司开发成功的一种由泰乐菌素半合成的畜禽专用抗生素[11]，具有与泰乐菌素类似的分子结构和抗菌谱。其作用机理是与细菌核糖体或其反应底物（如tRNA、mRNA）相互所用，抑制蛋白质的合成——这意味着细胞存活所必需的结构蛋白和酶不能被合成[12]。泰妙菌素对猪支原体有较强的抑杀作用。抗生素虽然是一种有效的杀菌药物，但是一味的使用和增加抗生素的使用时间和剂量，会使其产生耐药性和导致药物残留，以至于进化成超级病毒或者细菌，威胁猪的健康与安全[13]。

而草分枝杆菌的作用主要是免疫增强，它可刺激动物机体内的T淋巴细胞释放多种淋巴因子，作用于单核巨噬细胞系统，使之向病灶部位聚集活化，对细菌和病毒进行吞噬、杀伤和清除；草分枝杆菌可使自然杀伤细胞、B淋巴细胞活化增多，IgM、IgG趋于正常，草分枝杆菌持久的介入动物体的免疫过程，不断的调节细胞免疫系统产生免疫功能[6-7]。从试验结果来看，第3组和4组中的患猪，其治愈率仅为47.5%，说明单独的草分枝杆菌在治疗猪呼吸道疾病上具有一定的作用，但没有起到较好的疗效，主要原因在于草分枝杆菌只具调节机体免疫的作用，不具有抑制和杀灭作用。所以，可以考虑草分枝杆菌单独长期饲料拌喂用于猪呼吸道疾病和其他疾病的预防，以提高猪的抵抗力，从而降低猪只疾病的发生。

表2 各药物治疗效果比较

表3 试验猪群体重比较（kg/头）

3.2 从试验结果来看，草分枝杆菌+泰妙菌素+磷酸替米考星在患病猪的治愈率、平均日增量中均高于其他组，其中，一组治愈率达到了100%，每头病猪的平均日增量也都达到0.45 kg，治疗效果显著。常规药物在治疗过程中，病原往往在动物体内血液循环较差，加之耐药性问题，对这几种病的急性病例用常规抗生素处理，往往效果不很理想，这增加了菌苗免疫预防和治疗的难度，目前猪源致病性细菌的耐药程度比较严重[14-16]。由于草分枝杆菌能增强猪的免疫力，将草分枝杆菌与药物按一定比例混合饲喂，不仅提高药物对疾病的治疗效果，而且能缩短病程，提高生猪的生长速度，也避免了因长期使用抗生素带来的细菌、病毒的变异，也可减少耐药性的产生。

4 结论

本试验结果表明：采用草分枝杆菌粉剂拌料对猪感染支原体肺炎和放线杆菌引起的呼吸道疾病具有显著辅助治疗作用，可作为临床上对猪感染支原体肺炎和放线杆菌的辅助治疗药物。

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