Th1/Th2型细胞因子表达失衡对干扰素γ诱发老年女性甲状腺功能低下的影响

李素清 刘 平 高 杨 刘金霞 马小彬

(承德医学院附属医院重症医学科，河北 承德 067000)

干扰素(IFN)-γ联合利巴韦林(病毒唑)在治疗慢性丙型肝炎(CHC)经常出现骨髓抑制、抑郁、甲状腺功能异常等严重不良反应，降低患者的依从性和治疗效果，而且，副作用的发生与年龄和性别有一定的相关性。以往的研究中发现老年女性患者，甲状腺功能减退发生率明显高于男性和青年患者〔1〕，甚至发生老年抑郁。本研究探讨IFN-γ对Th1/Th2细胞因子表达的影响并分析其与甲状腺功能低下的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 54例CHC患者，2006～2008年在我科门诊或住院病房行干扰素治疗，其中男30例，女24例;年龄18～65岁，平均35.6岁，并按年龄和性别分为3组，老年女性组13例、老年男性组15例和中青年组26例，所以乳腺病例既往无精神疾病及其他身心疾病等遗传疾病史。治疗前进行血、尿常规、肝功能、丙肝病毒抗体、丙肝病毒、甲状腺功能、肾功能、血糖、自身免疫相关项目等详细检查，严格按照中华人民共和国卫生行业标准《丙型病毒性肝炎诊断标准及处理原则》选择研究对象，排除其他肝炎病毒和HIV病毒感染〔1〕。另外选择同期体检的正常人血清20人份，作为正常对照组。

1.2 治疗方法 应用PEG-IFNα-2a 180μg，每周一次，皮下注射，治疗过程中严密监测患者用药后不良反应，出现自身免疫、骨髓抑制等严重不良反应者需被迫停药者，排除在统计分析范围内。所有病例在应用干扰素外均应用相似的保肝降酶治疗药物，在治疗观察期间没有服用其他对甲状腺水平有影响药物，饮食等。用药时间48 w。

1.3 甲状腺素水平的检测 分别在治疗前、治疗12 w和治疗终点(疗程结束时)，空腹抽取患者静脉血10 ml，分离血清和外周血单个核细胞，化学发光法检测血清总三碘甲状腺氨酸(T3)、游离三碘甲状腺氨酸(FT3)、总四碘甲状腺氨酸(T4)、游离四碘甲状腺素(T4)、促甲状腺素(TSH)、甲状腺球蛋白(TG)试剂盒由美国雅培公司提供，并按说明书要求进行操作。

1.4 RT-PCR 分离外周血单个核细胞，细胞总RNA抽提药盒TRIzol(Gibco公司)抽提细胞总RNA。按SuperscriptⅡ药盒(Gibco公司)说明书，将mRNA逆转录为cDNA。β-actin、IFN-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-10引物由上海生工合成。用所得cDNA进行RT-PCR反应，扩增内参照β-actin及IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10，PCR 反应条件和引物序列见表 1〔2〕。PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶(含终浓度0.5μg/ml溴乙锭)上电泳，Gel-PRO Analyzer凝胶定量分析软件进行灰度分析，得βactin及4种细胞因子灰度值，将4种细胞因子灰度值分别除以β-actin灰度值，从而得到细胞因子相对含量(%)。

1.5 统计学分析 测定结果采用x±s，应用SAS8.0统计软件进行分析，数据资料以x±s表示，采用t检验和方差分析。

2 结果

2.1 治疗12 w时各组CHC患者甲状腺激素水平 治疗12 w时，老年女性组与正常对照组比较，TSH升高，T3、T4、FT3、FT4降低(P＜0.05)。老年男性组FT4降低(P＜0.05)。与老年男性组和中青年组比较，老年女性组也出现显著性差异(P＜0.05)。见表2。

2.2 PEG-IFN-α2a治疗老年女性CHC病人过程中甲状腺激素水平 应用PEG-IFN-α2a治疗前和治疗结束后，老年女性CHC患者甲状腺激素水平与正常对照组比较，TSH升高，T3、T4、FT3、FT4降低，但无显著性差异，可能与在入选病例中，有2例患者甲状腺激素水平接近正常低限可能有关。治疗12 w时，患者出现甲状腺功能减低的表现，TSH升高，T3、T4、FT3和FT4降低，见表3。

2.3 PEG-IFN-α2a治疗CHC前后各组Th1/Th2表达水平的变化 对IFN-α联合病毒唑治疗12 w时Th1/Th2细胞因子表达水平进行分析，发现治疗后Th1类细胞因子IFN-γ和TNF-α的表达水平显著增高，Th2类细胞因子IL-4和IL-10的表达水平与治疗前相比无显著性变化，见表4和表5。

表1 Th1/Th2型细胞因子PCR引物序列扩增片段大小及扩增条件

表2 PEG-IFN-α2a治疗12 w时不同患者甲状腺激素水平比较(x±s)

表3 PEG-IFNα-2a治疗CHC患者前后甲状腺激素水平比较(x±s)

表4 PEG-IFNα-2a治疗CHC患者前后Th1表达水平的变化(x ± s，%)

表5 PEG-IFNα-2a治疗CHC患者前后Th2表达水平的变化(x ± s，%)

3 讨论

Th1和Th2细胞因子诱导的免疫反应相互抑制、相互调节，处于动态平衡状态，维持正常的细胞免疫和体液免疫功能〔3〕。IFN-α，作为一种炎症因子，联合病毒唑治疗CHC的机制之一是由于IFN-γ能够激活参与细胞免疫的IFN-γ、TNF-α、IL-2等Th1细胞因子，而参与体液免疫反应Th2类细胞因子，比如，IL-4、IL-5、IL-6、IL-10减低或变化不显著〔4〕，发挥抗病毒治疗作用和免疫调节作用的同时，经常诱发甲状腺功能低下、抑郁和焦虑等严重不良反应〔5，6〕，而且甲状腺功能低下与焦虑和抑郁等神经精神症状具有一定的相关性。其原因可能是干扰素作为一种炎性细胞因子，在这些细胞因子相互作用下，导致甲状腺本身出现自身免疫性炎症，分泌和合成甲状腺激素功能减退。本研究提示CHC患者的细胞免疫功能下降，对丙型肝炎病毒清除能力减弱，这可能是造成HCV持续感染的原因之一，抗病毒治疗充分激活了Th1型细胞免疫反应，患者的细胞免疫功能得到恢复，并因此获得了良好的治疗效果。与此同时，干扰素治疗后老年女性CHC患者更容易出现甲状腺激素水平下降，可能也与由Th1型细胞因子产生增多，引起Th1/Th2细胞因子失衡，上调甲状腺滤泡细胞主要组织相容抗原大分子的表达，介导细胞免疫，促进甲状腺内淋巴细胞浸润，并使浸润的淋巴细胞和巨噬细胞激活并释放IFN-α、IL-1、IL-6等细胞因子及产生氧自由基，甲状腺本身出现自身免疫性炎症，分泌和合成甲状腺激素功能减退〔5〕。

1 彭文伟.传染病学〔M〕.第5版.北京:人民卫生出版社，2001:15-45.

2 Abayli B，Canataroglu A，Akkiz H.Serum profile of T helper 1 and T helper 2 cytokines in patients with chronic hepatitis C virus infection〔J〕.Turk J Gastroenterol，2003;14(1):7-11.

3 Wan L，Kung YJ，Lin YJ，et al.Th1 and Th2 cytokines are elevated in HCV-infected SVR patients treated with interferon-α〔J〕.Biochem Biophys Res Comm，2009;20(379):855-60.

4 Fujimoto T，Tomimatsu M，Iga D.et al.Changes in the Th1/Th2 ratio during a 24-week course of an interferon alpha-2b plus ribavirin combination therapy for patients with chronic hepatitis C〔J〕.Hepatology，2008;(8 pt2):e432-7.

5 王欣怡，张文彬，刘金霞.干扰素致老年丙型肝炎患者抑郁与甲状腺功能低下的关系〔J〕.中国老年医学杂志，2010;30(9):1194-5.

6 刘振华，李素清，刘金霞.左甲状腺素对接受聚乙二醇干扰素治疗的丙型肝炎患者发生抑郁焦虑的影响〔J〕.中国全科医学杂志，2010;13(8):2457-9.