犊牦牛腐败梭菌病诊断

张西云，李生庆，胡国元

（青海省畜牧兽医科学院兽医研究所，青海 西宁 810006）

1 发病情况

本病呈散发。患牛营养不良，30多头牛中有18头出现咳嗽症状，6头出现腹泻症状。患牛咳嗽初期，用青、链霉素治疗，6头好转，另12头仍有咳嗽症状，并死亡2头。

2 症状及剖检变化

病牛精神萎顿，食欲不振，咳嗽，体温达40～41℃。剖检见咽喉部和气管周围有淡黄色的水肿液，气管黏膜充血，心包内有渗出液，肺气肿，大面积瘀血，小叶边缘呈黑色，表面呈灰白色或白色，部分组织充血，肺门淋巴结形态、色泽、质地无变化，其他器官无眼观变化。

3 实验室检验

3.1 脏器触片 无菌取病死牛肝、脾、肺触片，瑞特氏染色，镜检，结果见粗大杆菌和双球菌。

3.2 脏器培养 无菌取病死牛肝、脾、肺接种于鲜血斜面和厌气肝汤中，37℃培养24h，结果鲜血斜面和厌气肝汤培养基中均有细菌生长。对培养物进行抹片，沙黄染色，镜检，结果见鲜血斜面培养物以双球菌为主，厌气肝汤培养物以大杆菌为主。鲜血斜面培养物经划平板接种得到双球菌，厌气肝汤培养物经加热得到梭状芽孢杆菌。

3.3 动物接种 无菌取病死牛肺脏剪碎、研磨，按1∶5加入无菌生理盐水混匀后静置，取静置后的上清液，以0.2 mL/只的量，皮下注射于2只小白鼠，结果，2只小白鼠分别于注后15h、17h死亡。剖检小鼠，其皮下充血，有胶冻样渗出，腹腔渗出物较多，消化道浆膜充血，肝、脾、肾肿胀，心、肺无眼观变化。肝被膜触片，染色，镜检，见长丝状、短链状或单个存在的大杆菌。接种小白鼠肝脏于厌气肝汤后镜检，见与病死牛脏器镜检相同的结果，厌气肝汤培养物培养至48 h开始形成芽孢，芽孢呈柠檬状，培养至72h，几乎全部形成芽孢体。

3.4 动物试验 分别将双球菌和大杆菌接种于普通肉汤和厌气肝汤中，37℃培养24h。

将双球菌培养物分别以0.2～0.4 mL/只的量皮下注射于2只小白鼠，结果，2只小白鼠一周后仍健活。

将大杆菌培养物原液以0.2 mL/只的量皮下注射于2只小白鼠后，观察其发病死亡情况，同时将该培养物用生理盐水稀释后，在毒力范围内皮下注射于小白鼠，并测定最小致死剂量。结果，注射原液的小白鼠在注射后12h左右死亡，同时测得该菌的最小致死剂量为500MLD/mL。剖检死亡小白鼠，其皮下及腹腔病变与前述接种小白鼠相同。

4 诊断

临床症状和实验室检验结果表明犊牦牛死亡是由腐败梭菌引起的。

5 小结

5.1 腐败梭菌为土壤常在菌，气温多变、多雨潮湿季节及转群造成犊牦牛体质下降时，其可引起发病。适时接种疫苗，尤其在牦牛转群或进入换季草场前进行加强免疫是预防本病的有效方法。

5.2 病牛死亡后应及时采取病料送检，因为腐败梭菌常存在于动物消化道内，其可在动物死后的数小时内大量繁殖并进入脏器，若不及时送检则可造成误诊从死亡动物脏器分离到的腐败梭菌必须通过接种试验才能确定其致病性。

5.3 腐败梭菌培养物离心上清液皮下和静脉注射小白鼠时毒力较弱，表明其代谢产物中的抗原成分较少，故只有采用菌液制备灭活菌苗进行免疫才能保证免疫效果。