IKB激酶在系统性红斑狼疮患者中的表达及临床意义

张继云 王 梅

（新疆医科大学第二附属医院 新疆 乌鲁木齐 830000）

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种免疫功能紊乱、产生一系列自身抗体，可累及多种脏器的自身免疫性疾病。其临床表现多样，病情往往呈缓解和恶化交替进行，发病机制尚不明确。SLE免疫调节异常的表现极其复杂，包括自身反应性淋巴细胞耐受异常、凋亡异常、细胞因子分泌及其受体表达异常以及对激活信号内源性反应增高等［1－2］。我们推测SLE患者体内高水平的TNF－α可能通过激活IKK－β，使IKKβ／NF－κB通路异常活化，参与了SLE的发病。

1 材料与方法

1.1 研究对象：20例SLE女性住院患者，年龄（38±4）岁，诊断均符合1997年美国风湿病学院修订的SLE分类标准［13］。15例健康女性作为正常对照组，年龄（39±7）岁，均无风湿病史和风湿病家族史。

1.2 实验方法

1.2.1 酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定血浆游离TNF－α水平：静脉采血分离血清，－20℃贮存备用。测定前，将样本置于室温中融化混匀，采用定量的酶联免疫测定法（ELISA法）测定血浆中TNF－α水平。测定所使用的试剂购自美国R＆D Systems Inc和Sigma Inc，测定步骤按照试剂使用说明书操作。

1.2.2 引物设计及合成：检索NCBI网站GenBank查询人IKK－β基因的mRNA序列，利用primer express软件设计引物，IKKβ上游引物：5’－GGCAAACCGTAC－TCCAAGCAC－3’，下游引物：5’－CCTTGTCTGCACACTGGAGGTC－3’。

1.2.3 实时荧光定量聚合酶链反应：Trizol法抽提总RNA，用含反转录酶PrimeScriptTMRTase逆转录酶试剂盒将RNA逆转录为cDNA，－70℃保存。引物序列：在ABI Prism 7500测序仪（Applied Biosysterms公司）上以cDNA为模版利用DNA聚合酶TaKaRa EX TapTMHS进行实时定量PCR扩增反应，具体操作参照SYBR PrimeScriptTMRT－PCR试剂盒说明书进行。

1.2.4 Western blot法检测IKK－β蛋白表达水平：收集PBMC，加裂解液冰上振荡裂解60min，12000r／min离心20min后取上清，－80℃保存。结果用Labwork凝胶图像分析软件对胶片扫描测定感光区带的感光密度，并进行数据统计处理。

1.3 统计学处理：采用SPSS16.0软件进行数据统计分析。计量资料用±s表示。按照患者与正常人分组进行方差齐性分析，方差齐性行独立样本t检验，方差不齐行Mann－Whitney秩和检验，直线相关分析判断各指标问的相关性，p＜0.05为差异有统计学意义。

2 实验结果

2.1 SLE患者与健康对照组外周血TNF水平比较：SLE患者外周血TNF－α水平（242.88±49.95pg／ml）显著高于正常对照组（115.23±31.55pg／ml），差异有统计学意义（p＝0.000）；

2.2 SLE患者与健康对照组外周血IKK－β表达水平比较：实时荧光定量PCR结果显示SLE患者IKK－β基因表达水平（1.91±1.36）与正常对照组（1.89±2.38）相比无差异（p＝0.894），蛋白印迹实验结果显示SLE患者IKKβ蛋白表达水平较正常对照组升高，差异有统计学意义（p＝0.009）；

2.3 IKKβ表达水平和疾病活动性的相关性：SLE患者IKKβ蛋白表达水平与抗dsDNA抗体水平呈正相关（r＝0.342，P＝0.001），与抗核抗体呈正相关（r＝0.262，P＝0.005）。

3 讨论

IKK－β是一种蛋白激酶，在NF－κB激活过程中扮演着重要的角色。当IKK－β被高水平炎性因子TNF－α激活后，能引起IKKβ／NF－κB通路异常活化，从而引起T、B淋巴细胞的增殖、活化，调控炎症因子的转录表达，并且能调节抗体的产生。为了进一步探讨IKK－β在SLE中的作用和意义，本文研究了IKK－β与抗双链DNA（dsDNA）和抗核抗体（ANA）的关系，结果发现，SLE患者IKK－β的表达与dsDNA、ANA均呈正相关关系，提示IKK－β与SLE患者抗体的产生密切相关，阻抑IKK－β的活化或许有利于SLE的治疗。

综上所述，SLE患者血清TNF－α水平升高，能够激活IKK－β，使其表达增加，异常活化NF－κB通路，参与了SLE的发病，并且IKK－β的表达与dsDNA、ANA水平密切相关。因此，IKK－β有望成为自身免疫性疾病治疗的靶分子。

［1］Rahman A，Iscnberg DA.Systemic lupus erythematesus.N Eng J Med.2008，358：929－939

［2］Kumar KR，Li L，Yah M，et a1.Regulation of B cell tolerance by the lupus susceptibility gene Lyl08.Science，2006，312：1665－1669