卵巢功能早衰的实验研究概述

胡晓华 陈冬梅 贾 磊

（河南省中医院妇产科，郑州450002）

卵巢功能早衰的实验研究概述

胡晓华 陈冬梅 贾 磊

（河南省中医院妇产科，郑州450002）

卵巢早衰；实验研究；综述

卵巢早衰（premat ure ovarian failure，POF）是指妇女在40岁以前因某种原因引起的闭经、不孕、雌激素缺乏，以及促性腺激素水平升高为特征的一种疾病［1］。临床主要表现为闭经、不孕，兼有面色潮红、烘热汗出、情绪波动、白带减少、失眠、性欲低下、阴道干涩等低雌激素的症状。中医学虽然没有卵巢早衰之名，但依据其临床表现，可归属于 “血枯”“闭经”“不孕”“绝经前后诸症”等范畴。POF的人群发生率约1%～3%，闭经患者中约2%～10%系卵巢早衰［2］，且近年来发病率呈上升趋势。近年来卵巢早衰的实验研究取得了很大进展，主要从以下几个方面进行研究。

1 动物模型的研究

由于POF病因涉及多方面，其具体发病机理尚不清楚。现将近年国内外学者根据POF的基本病因建立的较成熟动物模型总结如下。

1.1化疗药物模型Yucebilgin等［3］分别给雌性小鼠腹腔注射紫杉醇、顺铂、生理盐水，探讨紫杉醇和顺铂降低小鼠原始卵泡储备的作用。结果表明，年轻小鼠腹腔注射高剂量紫杉醇和顺铂会导致原始卵泡衰竭。Yeh等［4］通过观察腹腔注射不同剂量顺铂对大鼠各系统的影响，以此建立了化疗损伤性卵巢功能早衰动物模型。结果表明，顺铂可引起大鼠卵巢功能减退，并出现剂量相关性化疗药物所致卵泡细胞凋亡增加。Meirow等［5］用腹腔注射环磷酰胺形成雌性小鼠卵巢储备的亚临床损害模型，表明环磷酰胺对小鼠卵巢各级卵泡均有损伤，对始基卵泡的损伤明显，且随剂量递增损伤程度加重。

1.2自身免疫模型

1.2.1抗原免疫动物林建华等［6］以正常小鼠卵巢匀浆抽提物作为抗原免疫兔，制备兔抗鼠卵巢抗血清，并提取抗卵巢抗体（AOA），将AOA被动免疫小鼠，发现AOA可导致卵巢组织的病理改变，尤为明显的是透明带和颗粒细胞，随AOA剂量的增加而损伤加重，影响排卵和受精，从而降低卵巢功能。孙晓溪等［7］分别用猪卵透明带（PZP）、PZF单克隆抗体靶抗原和PZP的抗独特型抗体 （Ab2）免疫小鼠，其卵巢均出现不同程度的卵母细胞和颗粒细胞损伤，黄体数减少、消失；在正常对照组均无明显损伤。蔡立荣等［8］以免疫层析分离的猪卵透明带皮下和两后脚掌多点注射免疫小鼠建立POF的动物模型，其免疫组的生长滤泡和黄体数均下降。

1.2.2初生小鼠胸腺切除模型付莉等［9］以初生3天以内的BALB／c小鼠实施胸腺切除术后，在鼠龄24天时出现急性卵巢炎的表现，大量的卵泡受到淋巴细胞浸润、破坏，随后出现卵巢的萎缩。同时在外周血中促性腺激素水平增高、雌激素水平降低，出现抗卵细胞、抗ZP抗体。

1.3药物去势模型英国科学家Yu等［10］研究了给予超数排卵剂量的孕马血清促性腺激素 （PMSG）所致卵巢功能下降大鼠模型，发现模型鼠卵母细胞数量呈下降趋势，异常形态卵母细胞百分率均显著升高，卵巢干重下降，但无显著性差异。超数排卵鼠初、中、后期卵泡相呈现生长窦卵泡的异常形态，卵泡闭锁呈增多趋势，血清雄激素和雌二醇水平呈下降趋势。

2 性激素的研究

钟雪梅［11］以雌性幼年大鼠为研究对象，结果表明，补肾益精、养血益气药可显著增加大鼠子宫及卵巢重量，提高血清E2、P含量，使阴道上皮出现大量的角化细胞，增加大鼠卵巢的卵泡数和卵泡直径。其作用机理可能是通过补肾调节性腺轴的功能，促进卵泡发育及排卵。此外，补肾活血中药也能抑制体内抗体的产生，进而对POF的免疫机制产生调节作用。朱玲［12］等研究发现，补肾养精之代表方左归丸能减缓免疫性POF小鼠外周血FSH的升高，提高体内E2水平，抑制AOAb产生，改善POF小鼠卵巢免疫性炎症的损伤。Kimura等［13］研究发现雄激素受体缺陷型小鼠容易发生卵泡发育障碍和卵巢早衰，由此证明雄激素在卵泡发育中的重要作用。

3 自身免疫的研究

Bagavant H等［14］在动物实验中发现，在体内若有高浓度的透明带 （ZP）自身抗体，会引起雌鼠的生育能力下降。一般认为，ZP抗体妨碍受精、影响卵泡的发育，导致卵泡衰竭，从而引起绝经。ZP3是一种重要的透明带糖蛋白、精子受体，用ZP3免疫动物可以引起卵巢炎，而且，在用ZP3免疫后的动物血清中可以测得ZP3特异性T细胞应答及抗ZP3杭体，抗人类重组ZP3的IgG杭体可以导致卵泡破坏。孙晓溪等［15］分别用猪卵透明带（PZP）、PZP单克隆抗体靶抗原和PZP的抗独特型抗体（Ab2）免疫小鼠，其卵巢均出现不同程度的卵母细胞及颗粒细胞损伤，黄体数减少、消失；在正常对照组则均无明显损伤。Ab2免疫组IL-2水平与正常对照组无明显差异，IL-4水平有升高趋势；PZP免疫组IL-2水平明显升高，而IL-4水平则无明显差异；抗体效价与IL-4／IL-2比值呈负相关，说明随着抗体效价的逐渐增加，IL-4／IL-2比值有逐渐下降趋势。IL-2主要介导细胞免疫应答（Th1型免疫应答），IL-4主要介导体液免疫应答（Th2型免疫应答），从IL-4／IL-2比值结果来看，正常兔IgG和Ab2免疫组主要介导的是Th2型免疫应答，而PZP免疫组主要介导的是Th1型免疫应答，提示自身免疫性卵巢功能损伤与Th1型免疫应答有关。

4 自由基的研究

艾浩等［16］在顺铂致卵巢功能早衰发病机制与金雀异黄素调节作用的实验研究中发现，顺铂 （CDDP）用药后小鼠卵巢丙二醛 （MDA）含量明显升高，总氧化能力（T-AOC）明显降低，卵巢分泌性激素功能紊乱，HE染色显示排卵障碍的特点。提示氧化损伤和抗氧化能力的降低可能是CDDP造成卵巢功能早衰的一个重要原因。而应用金雀异黄素（GEN）后，MDA含量呈现降低的趋势，T-AOC也呈现升高的趋势，当给药量达到100mg／kg以上后两指标均接近正常水平，卵巢功能得到明显改善。减少氧化损伤和脂质过氧化物的沉积，增强卵巢局部抗氧化能力可能有利于卵巢功能早衰疾病的治疗。

5 组织形态学研究

伍娟娟等［17］在护卵汤对免疫性卵巢早衰模型小鼠CD4、+CD25+Treg和FoxP3表达的影响实验研究中发现，造模成功后卵巢体积缩小，各级卵泡可见，发育成熟的卵泡极少，卵泡颗粒细胞层减少，排列紊乱。部分卵泡发育不良，卵泡外形扭曲，伴有不规则地向邻近的间质延伸，有卵泡破碎产生颗粒细胞小巢或条索。卵巢间质可见较多淋巴细胞及浆细胞浸润；小鼠性周期随着免疫时间的延长，其周期性改变逐渐消失；小鼠卵巢重量指数下降明显。通过灌服护卵汤可使卵巢体积增加（卵巢重量指数上升），发育成熟卵泡，卵泡颗粒细胞层增多，卵巢间质淋巴细胞及浆细胞浸润减少。性周期在用药后趋向有规律。高慧等［18］在补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢组织形态学的影响实验研究中发现，补肾调冲中药可使受损的卵巢组织各级卵泡恢复生长，卵泡数明显增多，卵泡颗粒细胞层亦增多，黄体数增多，血管丰富，间质及纤维组织减少。电镜下可见卵泡颗粒细胞层丰富，颗粒细胞排列有序，结构清晰，胞质内线粒体较多，细胞核染色质均匀。

6 存在问题

卵巢功能早衰是一类严重影响妇女生殖健康及身心健康的疾病，是当今妇科学和生殖医学研究的难点。近年来中医药治疗卵巢功能早衰取得可喜的进展，但尚存在着一些不容忽视的问题，主要有以下几个方面：①研究出更加符合人类卵巢早衰病变的动物模型，最好能建立不同的证候模型使该模型更符合临床发病病因。②加强对药物作用机制研究，从不同层次进行药物作用的机制研究，如整体的、细胞的、分子的等，使药物在治疗该病方面的理论与现代科学紧密结合。③药物成分、药物组方的研究，如在中药方中究竟哪些中药具有明显的治疗卵巢功能早衰的作用，其有效成分是什么，哪些药物可以删减，以求用药的合理性。

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［5］Hirasawa A，Saito-Ohara F，Inoue J，et al．Association of 17q21-q24 gain in ovarian clear cell adenocarcinomas with poor prognosis and identification of PPM1Dand APPBP2 as likely amp lification targets［J］．Clin Cancer Res，2003，9：1995-2004．

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［16］艾浩，牛建昭．顺铂致卵巢功能早衰发病机制与金雀异黄素调节作用的实验研究［D］．北京：北京中医药大学，2007：89-93．

［17］伍娟娟，尤昭玲．护卵汤对免疫性卵巢早衰模型小鼠CD4+CD25+Treg和FoxP3表达的影响［D］．长沙：湖南中医药大学，2009：37-39．

［18］高慧，杨涓．补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢组织形态学的影响［J］．国医论坛，2008，23（1）：35-39．

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.22.123

：1672-2779（2013）-22-0164-02

吴义红

2013-09-28）