王素玲,刘洪志,季小慧
(1.黑龙江省齐齐哈尔林业学校,黑龙江 齐齐哈尔161006;2.黑龙江省苇河林业局青山林木种子园,黑龙江 哈尔滨150628;3.黑龙江省森林与环境科学研究院,黑龙江 齐齐哈尔161005)
连钱草(Glechomalongituba)(活血丹)为唇形科活血丹属多年生草本,具匍匐茎,逐节生根,直立茎,高6~30cm,基部通常淡紫红色,被短柔毛,单叶对生,叶片心型或倒肾型,长0.8~3.2cm,宽1~3cm,边缘具圆齿,被短柔毛,背面常常紫色。轮伞花絮,通常2花,稀具3~5花,花唇型,花冠淡蓝色,淡紫色至淡蓝紫色,长1.4~2.3cm,花期5—6月,果期6—7月,绿期4—10月,生于林缘、林下、山坡、路旁,黑龙江省大部分地区有分布。
连钱草是黑龙江省西部半干旱地区园林绿化中不可多得的耐阴地被植物。连钱草绿期长,枝叶繁茂,稠密,根系发达,极耐干旱,花后即匍地生长,形成地毯状地面,草层低矮,在林下侵占能力强,一旦成片,杂草不易侵入,在株行距15cm×15cm,全光照条件下,45d左右盖度可达100%。在一定庇阴条件下,如40%~60%光照条件下生长最为宜,观赏效果最好,在20%的光下也能生长,耐阴性较强,耐践踏,而且生长速度不很快,不会疯长、失控,繁殖容易,管理粗放,适宜做庇阴条件下的地被,在封闭性林下或林缘成片进行栽植,或栽植于大型公园林下作地被,其粗糙宽大的叶片,能够增加许多野趣[1]。
连钱草以往的繁殖方式以种子和扦插繁殖为主,然而,种子量少,不易采集。扦插繁殖系数较低,影响推广应用进度。为此,开展组培快繁对于扩大连钱草种群规模、保存种质资源等具有十分重要的意义。我们与2011—2012年对其进行了组培快繁的试验研究。
植株新萌发的侧芽为外植体
6- 苄基腺嘌呤(BA)、α- 萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA),均为分析纯试剂,由上海伯奥生物科技有限公司提供。生产试验中使用的琼脂粉也由上海伯奥生物科技有限公司提供,以绵白糖代替蔗糖。
诱导分化培养基:1/2MS+BA 2.0mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1(单位下同);增殖培养基:MS+BA 0.5~1.5+ NAA 0.1~0.5(见表1);生根培养基:1/2MS+IBA 0~1.0+NAA 0~1.0(见表2)。诱导分化培养基和增殖培养基蔗糖浓度为2.0%,生根培养基蔗糖浓度为2.0%;琼脂6g·L-1;pH值在高压灭菌前保持5.8~6.0;培养温度(25±2)℃、光照强度2000lx,连续光照10h·d-1。
侧芽连同茎段取出,流水下冲洗30min后,留上部茎段长0.5~1.0cm,置超净工作台中,先在75%酒精中浸30s,用无菌水冲洗1次,转入0.1%升汞中消毒30s~1min,用无菌水冲洗3~5次后,用无菌吸水纸吸去材料表面水分,接种到诱导分化培养基中,再依次转入增殖、生根培养基中,观察培养结果,生根后炼苗移栽。
在诱导分化培养基中20d左右的无菌苗四周萌发不定芽。将苗切下转入增殖培养基中。
表1 不同激素对连钱草组培苗增殖的影响
表1显示,连钱草在设计的几种培养基中均能繁殖、分化,相比之下,不同细胞分裂素和生长素浓度处理中,组培苗以培养基1/2MS+BA1mg·L-1+NAA1mg·L-1中的侧芽萌发迅速,30d形成丛生苗,长势良好,繁殖系数可达5.5左右。BA浓度低增殖率下降,BA浓度过高,组培苗分化多、长势弱。
从增殖培养基中切取长为1cm左右的茎段连同小叶,转接到生根培养基(见表2)中。结果表明:连钱草容易生根,在设计的几种培养基中均能生根,相比之下1/2MS+NAA0.1+IBA0.1的生根最佳,生根率达100%。根部成辐射状对称。
表2 不同生根培养基对组培苗生根的影响
将连钱草生根培养瓶上的扎口绳松开,使组培苗初步接触空气,让植株开始长出角质层。然后移去瓶口包扎物,让组培苗充分接触空气,2~3d后,组培苗对外界环境已逐渐适应,且培养基已开始长出菌类,此时进行组培苗的出瓶炼苗。首先,小心地用镊子夹持组培苗将苗从瓶中移出,用流水慢慢冲净植株根部的培养基,注意切勿伤及根部的根毛,小心地将洗净的脱毒苗移栽到事先已经灭菌处理过的营养杯中,并用塑料膜进行覆盖,使营养杯内的相对湿度保持在80%左右,以后定期放风,逐渐降低棚内的相对湿度,直至将塑料膜去掉,移栽成活率在95%以上。
通过试验筛选出连钱草增殖培养基和生根培养基,并成功移栽组培苗,发现连钱草在离体条件下生长迅速,分化和生根培养良好,作为黑龙江省少有的地被植物,在繁殖过程中,应该考虑在简化组织培养程序后,开展工厂化生产来提高繁殖系数,扩大连钱草种群,早日广泛应用于生产。
[1]王杰青.地被植物连钱草和紫花地丁的研究[D].哈尔滨:东北林业大学,2002