复方茵陈制剂对小鼠肝功能生化指标的影响

俞 芳 福建省福清市畜牧兽医中心龙山畜牧兽医站 350300

肝脏是动物体内体积最大的实质性腺体和重要的代谢器官，它不仅参与物质代谢、生物转化(解毒与灭活)、凝血物质的生成和消除、胆汁的生成与排泄等等，而且因为其丰富的单核吞噬细胞，在特异和非特异免疫中也具有重要的作用。另外，肝脏在维持血糖水平相对稳定的过程中起着关键作用，它可将血液中的葡萄糖转化为肝糖原储存起来，也可将储存的肝糖原分解成葡萄糖参与氧化功能以及参与动物体生长发育的调控［1］。

近来养殖业中的动物肝病明显增多。如乳牛、黄牛暴发的乙型肝炎；鸡可发生乙型肝炎，脂肪肝综合征；雏鸭病毒性肝炎、乙型肝炎；猪、羊、家兔均可发生乙型肝炎。而且发展迅猛，如雏鸭病毒性肝炎［2］，是一种高度致死性传染病，在福建、江西等国内养鸭比较集中的省区均有该病大规模发生和流行，发病率高达70%，死亡率高达85%。这些都严重威胁着养殖业主的经济利益和人们的健康。因此，对动物肝脏疾病的有效治疗和控制，是广大兽医科技工作者亟待解决的问题。试验以四氯化碳（CCl4）引起的急性肝损伤为对照组，比较检测服用复方茵陈制剂后对动物肝脏中天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）指标的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药品 复方茵陈制剂，每克颗粒含0.564 g总药材（生药），由福建农林大学动物科技研究所制；联苯双酯滴丸，北京协和药厂生产，每丸1.5 mg，批号03120105。

1.1.2 试验动物 KM 小鼠，体重18～22 g，雌雄兼用，由福建医科大学试验动物中心提供。

1.1.3 仪器和试剂 紫外分光光度计VIS-7220，北京瑞利分仪仪器公司；高速冷冻离心机Anke TGL-16G，飞鸽公司；微量移液器，德国eppendorf 公司；离心管（1.5 mL），由福建农林大学药品试剂科提供；Stotorius BS210S 电子天平(d=0.1g)，北京塞多利斯天平有限公司。CCl4、花生油、AST 、ALT 试剂盒均购自南京建成公司。

1.2 方法

1.2.1 试验前准备及分组 将实验小鼠60 只随机分为6 组，每组10 只，称重。①为正常对照组（Ⅰ组，生理盐水，0.3 mL/10g）；②CCl4模型组（Ⅱ组，生理盐水，0.3 mL/10g）；③联苯双酯阳性对照组（Ⅲ组，2 mg/10g）；④～⑥为复方茵陈颗粒制剂高、中、低剂量组（Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组，按临床成人50 kg 每日31 g生药量的5倍、10倍、15倍折算为小鼠给药量，分别为16.5 g/kg 体重、11 g/kg 体重、5.5 g/kg 体重）。正式试验前，所有动物禁食不禁水12 h，用蒸馏水将复方茵陈颗粒配制成所需浓度的药液，将CCl4用花生油稀释成所需浓度。

1.2.2 模型的制备和给药 给药组每天灌胃给药1 次，连续4 d，空白组和模型组灌同等体积生理盐水。于给药第3 d，除正常对照组外，其余5 组颈部皮下注射0.5%四氯化碳-花生油溶液（0.1 mL/10g），注射后禁食不禁水，16 h 后模型建立。

1.3 检测指标和方法 注射CCl416 h 后立即进行眼眶采血，肝素抗凝，4 000 r/min 离心10 min，用微量移液器取上清液，装入离心管，标记。

AST、ALT的测定。分别吸取0.1 mL/支上清液，加入0.5 mL 天冬氨酸转氨酶基质液均匀混合，37 ℃水浴30 min，再加0.5 mL 2，4-二硝基苯肼液，混匀后，37 ℃水浴20 min，之后加入5 mL 0.4 mol/L氢氧化钠溶液，室温放置10 min。在505 nm 波长，1 cm 光径，蒸馏水调零，测各管的吸光度值，计算测定管（50 管）吸光度值与空白对照管（10 管）吸光度值差值，查标准曲线，求得相应的AST 活力单位，记录。

ALT（丙氨酸转氨酶）测定的操作过程同AST 测定，求得相应的ALT 活力单位，记录。

1.4 统计方法 结果采用SPSS11.0 统计软件，用方差F 检验、LSD 法比较组间和组内差异显著性。

2 结 果

观察复方茵陈制剂对急性肝损伤小鼠血浆酶指标的影响。由表1 可知，注射CCl416 h 后，II 组小鼠的血浆AST、ALT 比I 组分别提高111.63%和847.14%，差异极显著（P＜0.01），说明肝功能明显受损，造模成功。

用药Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组的血浆AST 分别比II 组降低38.10%、32.23%、28.21%，差异极显著（P＜0.01）。用药Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组的血浆ALT 分别比II组降低72.25%、42.99%、34.24%，差异极显著（P＜0.01）。

碱性磷酸酶（AKP）除Ⅲ组与I 组比较有显著性差异外，其余组间均不存在显著性。

表1 药物对小鼠肝损伤血浆AST、ALT的影响（n＝10，±SD）

3 讨论

3.1 肝损伤模型的选择 最近几年常用的动物肝脏疾病模型有化学药物中毒性肝炎模型（主要包括CCl4肝损伤模型、D-氨基半乳糖胺急性肝损伤模型、硫代乙酰胺肝损伤模型、α-萘异硫氰酸酯肝损伤模型、扑热息痛肝损伤模型、异硫氰酸苯酯和硝硫氰胺肝损伤模型）、免疫性肝损伤模型（卡介苗免疫性肝损伤模型、脂多糖免疫性肝损伤模型）和其他肝损伤模型［3］。复方茵陈制剂主要是保肝降酶作用，所以，选择CCl4急性肝损伤模型。而且CCl4是长期以来公认的复制肝损伤动物模型的化学物质，我国卫生部颁布的《中药药理实验指导原则》中明确指定应用CCl4肝损伤动物模型进行保肝降酶新药的药理实验，其模型成功率高，试验方法简便，重复性好，结果稳定［4］。

3.2 阳性对照组药物的确立 目前临床用于治疗各种急性、慢性肝炎，已获得药品批准文号的中成药和西药均可以作为阳性对照药。化学合成药联苯双酯，是合成无味子丙素的一种中间体，对动物有抗肝损伤作用，能增强肝脏解毒功能，临床对肝炎病人肝功能障碍有治疗作用，特别是降低血清丙氨酸转氨酶作用显著，优于国内外同类药品，已成为实验室研究的阳性对照药［5］。

3.3 肝功能生化实验指标检测 肝脏是人体物质代谢的中心器官，行使着多种重要的代谢功能。肝细胞除了具有一般细胞所共有的代谢功能外，还有一些特殊的代谢功能，肝功能实验方法不下500 余种，但临床常用的肝功能不过几十种。血清中的AST、ALT 活力升高与肝组织损伤程度和范围呈平行关系。整个肝内转氨酶的量约为血清中的100倍，因此，只要1%的肝细胞坏死便足以使血清中活性增加一倍。又由于肝细胞内转氨酶浓度比血清高1 000～5 000倍，当肝组织发生炎症和损伤时，因能量代谢障碍而致细胞膜通透性增加，细胞内转氨酶也可由于浓度梯度而泄漏入血，因此，血清转氨酶活性是肝细胞损害的最敏感指标。

3.4 复方茵陈制剂对小鼠急性肝损伤的保护作用复方茵陈制剂是提取茵陈、黄芩、大黄、甘草等有效成分研制而成的复方中药制剂。诸配方不仅充分发挥着本身的药效作用，还互相配合，具有疏肝解郁，活血行气散结之功能：（1）茵陈含有篙属香豆素、色原酮类、茵陈二炔、脂肪油及茵陈多肽等有效成分，具有利胆作用；抗肝损伤作用；解热镇痛、消炎作用；免疫调节作用［5］。（2）黄芩，其含有的黄芩苷有降压作用，降血脂作用，对由各种原因造成肝损伤动物模型具有明显的保护作用；黄芩素是一个很好的黄嘌呤氧化酶抑制剂，可用于治疗肝炎，另外还有很强的抗氧化、抗肿瘤作用。（3）大黄具有清除肝细胞炎症和胆汁淤积，清除氧自由基，减轻脂质过氧化反应，保护肝脏功能的作用［6］。（4）甘草可缓急止痛，调胃和肝。对四氯化碳所致的肝损伤有明显保护作用，可减轻肝细胞变性和坏死，降低血清转氨酶活力。明显的抗脂质过氧化作用。另外，还有抗炎、抗病毒、抗致突、解毒和抗氧化作用。

通过研究复方茵陈制剂对CCl4引起急性肝损伤整体模型的影响，发现其各剂量组均能不同程度明显降低血浆AST、ALT等酶的含量，减轻肝脏的病理性损伤，表现出明确的保肝作用。

另外，芮箐等［7］报道了复方茵陈胶囊的利胆、降脂作用及对四氯化碳、α-异硫氰酸氖酯所致的肝损伤具有显著的保护作用，能增加胆汁分泌，血清转氨酶活性明显降低。苏立盛等［8］报道中药肝灵对大鼠急性肝损伤的保护作用，并说明其保肝机理为保护肝细胞膜，抗脂质过氧化，促进蛋白合成，调节免疫。这些都与本试验的结果相一致。

4 总结

随着饲料工业的发展，抗生素和化学药物对动物的危害越来越受到人们的重视。而中草药添加剂将进入一个新的发展阶段，因为它独特的作用方式、良好效果、无残留、无抗药性以及无污染而使其成为一种理想的饲料添加剂。

［1］李仪奎，王钦茂.中药药理试验方法学［M］.上海:科学技术出版社，1991:382.

［2］万雪，王磊，宁官保，等.鸭病毒性I 型肝炎研究进展［J］.中国畜牧兽医，2005，32(8):57-59.

［3］黄正明，杨新波，曹文斌，等.化学性及免疫性肝损伤模型的方法学研究［J］.解放军药学学报，2005，21(1):42-46.

［4］张琪，陈辉，彭顺利，等.急性肝损伤动物模型具备研究进展［J］.吉林医药学院学报，2011，8(4):216.

［5］陈奇.中药药理试验方法学［M］.北京:人民卫生出版社，1993:837.

［6］张沛毅.当归对试验性肝损伤小鼠的抗自由基损伤作用［J］.中西结合肝病杂志，1996，6(4):21-22.

［7］芮箐，吴燕敏.复方茵陈胶囊的药效学研究［J］.天津药学，2004，16(1):7-9.

［8］苏立稳，盛国光，张建军，等.中药肝灵对大鼠急性肝损伤保护作用的试验研［J］.承德医学院学报，1998，15(1):9-11.