高效液相色谱法测定田七痛经胶囊中原儿茶酸含量

赵严丽，曾奇风

(1.广东省河源市食品药品检验所，广东 河源 517000;2.广东医学院，广东 东莞 523000)

田七痛经胶囊由五灵脂、三七、蒲黄、延胡索、木香等8味中药组方，具有通调气血、止痛调经的功效，用于经期腹痛及因寒所致的月经失调。方中五灵脂具有祛瘀止痛、活血通经的作用，原儿茶酸是其主要有效成分，可补血、活血、通络，用于月经不调。本试验中以田七痛经胶囊主要有效成分原儿茶酸为指标，采用高效液相法测定其含量，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC－2010 A型高效液相色谱仪;岛津UV－1601型紫外分光光度计;MettlerAG－135型电子分析天平(准确度0.01 mg);KQ250DA型超声清洗器。原儿茶酸对照品(供含量测定用，批号为110809－200604，中国药品生物制品检定所);田七痛经胶囊(亚宝药业大同制药有限公司，批号分别为20100901，20101006，20110609，规格为 0.4 g/粒);乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸、乙酸乙酯均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Inertsil C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－0.2%磷酸(8∶92);测定波长:260 nm;柱温:40℃;流速:0.6 mL/min;进样量:20 μL。理论板数按原儿茶酸峰计应不低于5000。

2.2 溶液制备

精密称取原儿茶酸对照品适量，加50%甲醇制成质量浓度为0.1075 g/L的对照品贮备液;再精密量取对照品贮备液适量，加50%甲醇制成8.6 μg/mL的对照品溶液。取装量差异项下的样品内容物约2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入0.1 mol/L盐酸2 mL润湿，再精密加入乙酸乙酯50 mL，密塞，称定质量，超声1 h使溶解，放冷，再称定质量，用乙酸乙酯补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，蒸干，残渣用50%甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取处方中除五灵脂外的其余药材，按处方量依法制成粉末，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

专属性试验:分别精密吸取2.2项下3种溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。由图1可见，供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液无干扰，表明方法可行。

线性关系考察:分别精密吸取质量浓度为8.6 μg/mL的对照品溶液 5，10，15，20，25，30 μL，注入液相色谱仪，测量峰面积。以峰面积(A)为纵坐标、质量浓度(C)为横坐标绘制标准曲线，得原儿茶酸回归方程 A=6371142.8571C－731.3333，r=1.0000(n=6)。结果表明，原儿茶酸进样量在0.043～0.258 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取原儿茶酸对照品溶液(8.6 μg/mL)20 μL，重复进样 5次。结果峰面积的 RSD 为 0.2%(n=5)，表明仪器精密度较好。

稳定性试验:取同一供试品(批号为20100901)溶液，室温下放置，于 0，4，8，12，24 h 时分别进样测定。结果的 RSD 为 0.8%(n=5)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验:取样品(批号为20100901)5份，依法制备供试品溶液并测定。结果原儿茶酸含量的 RSD为0.5%(n=5)，表明方法重复性较好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为20100901，原儿茶酸含量为 62.5555 μg/g，平均粒重 0.4082 g)适量，共 6 份。另取原儿茶酸对照品14.41 mg，用50%甲醇溶解并稀释成质量浓度为 14.41 μg/mL 的溶液，精密量取 4，5，6 mL 各 2 份，加入到6份样品中，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定。结果见表1。

表1 原儿茶酸加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定3批样品的原儿茶酸峰面积，按外标法计算含量。结果批号为20100901，20101006，20110609的3批样品，平均粒重分别为 0.4082，0.4054，0.4038 g，每粒含原儿茶酸分别为25.54，24.84，24.96 μg。

3 讨论

用紫外分光光度计对对照品溶液在200～400 nm波长范围进行扫描，结果在260 nm波长处具有最大吸收。故选择260 nm作为测定波长。

试验中采用了两种不同的溶剂提取原儿茶酸，即乙酸乙酯和甲醇，结果表明，乙酸乙酯提取法较甲醇提取法所提的产物的色谱峰分离清晰、峰面积高，故选择乙酸乙酯提取法。试验中比较了两种不同比例的流动相，即乙腈－0.2%磷酸溶液(4∶96)和乙腈 －0.2%磷酸溶液(8∶92)，结果表明，用乙腈 －0.2%磷酸溶液(8∶92)作为流动相时，色谱图基线较稳，样品中原儿茶酸与其他杂质峰能够完全分离，原儿茶酸的理论板数大于5000。

本方法准确、简便，重现性及回收率均理想，可以作为该制剂的质量控制方法。

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