复方毛冬青离子透入剂的薄层鉴定及总黄酮的含量测定

陈 凌，王法琴，杨尧新

(1.兰州大学第二医院;2.兰州大学药学院，兰州 730030)

复方毛冬青离子透入剂是由毛冬青、红花、当归、吲哚美辛等中西药组成，经直流电局部导入，具有活血化瘀、消肿活筋、消炎止痛的功能。用于治疗急慢性扭挫伤、跌打肿痛、落枕、肩周炎、骨质增生、腰肌劳损、陈旧性伤痛、风湿及类风湿疼痛，腰椎间盘突出引起的腰腿痛等症。为了鉴别本制剂成分以及有效地控制制剂的内在质量，本研究对制剂中红花、当归、毛冬青进行了薄层色谱鉴定，对制剂中主要成分总黄酮采用紫外分光光度法进行含量测定，旨在为该制剂的质量控制提供有效的定量、定性方法，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 UV-2401PC紫外可见分光光度计(日本岛津);吉尼斯系列电子分析天平(Model NE2155，Genius，Germany);SYG2004恒温水浴锅。

1.2 材料 芦丁(批号:080-9002，中国药品生物制品检定所);复方毛冬青离子透入剂(自制)，薄层G板(自制);纯化水;其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.2.1 毛冬青 供试品溶液的制备:精密量取本品30 ml于锥形瓶中，加入甲醇30 ml混匀，静置20 min，过滤，滤液回收甲醇至干，向其中加入约2 ml水溶解，置离心管中再加入2 ml正丁醇，超声震荡后离心，取上层正丁醇液作供试品溶液，置冰箱中备用。取毛冬青空白对照样品30 ml，同法制得空白对照溶液。另取毛冬青对照药材5 g置于锥形瓶中，加入甲醇50 ml后，超声震荡提取40 min，过滤，滤液回收甲醇至干，向其中加入约5 ml水溶解，用正丁醇10 ml、10 ml、5 ml分 3 次萃取，合并萃取液蒸干，加入甲醇2 ml溶解后置冰箱中保存，作为对照药材溶液。薄层色谱法试验:以文献［1-2］TLC法，分别吸取供试品溶液，空白对照溶液，对照药材溶液各10 μl点于同一块硅胶G薄层板上，以冰醋酸—乙酸乙酯—甲酸(10∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的主斑点，空白对照无干扰，见图1。

图1 毛冬青的TLC

2.2.2 红花 取样品20 ml水浴蒸干，称取0.5 g粉末加入80%丙酮1 ml溶解，摇匀后置冰箱中备用。取红花空白对照样品20 ml，同法制得空白对照溶液。另取红花对照药材2 g，用40%乙醇浸泡过夜，过滤，水浴蒸干滤液，残渣用80%丙酮1 ml溶解后，作为对照药材溶液。以文献［1］TLC法，分别吸取供试，空白对照样品溶液，对照药材溶液各10 μL点于同一块硅胶 G薄层板上，以正丁醇-甲醇-水(6∶1∶5)为展开剂，展开，取出，晾干，用氨水薰15 min，在紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，空白对照无干扰，见图2。

图2 红花的TLC

2.2.3 当归 取水浴蒸干后的样品0.5 g，加入20 ml乙醚超声10 min，过滤，50°C 水浴蒸干滤液，残渣加入95%乙醇1 ml溶解，作为供试品溶液。取当归空白对照样品0.5 g，同法制得空白对照溶液。另取当归对照药材0.5 g，同法制得对照药材溶液。按文献［5］试验，分别吸取上述溶液各10 μl点于同一块硅胶G薄层板上，以苯—乙酸乙酯—甲酸(4∶1∶0.1)为展开剂 ，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)波长下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，空白对照无干扰，见图3。

图3 当归的TLC

2.3 含量测定

2.3.1 标准贮备液的制备 精密称取芦丁对照品10.15 mg，置 50 ml量瓶中，加适量 30% 乙醇，置80℃水浴中加热使溶解，放冷，加30%乙醇至刻度，摇匀，即得(每1 ml中含无水芦丁0.203 mg)。

2.3.2 供试品溶液的制备 精密量取样品续滤液5 ml，置25 ml容量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀。精密量取稀释液0.4 ml，置10 ml容量瓶中，加入亚硝酸钠溶液(1.25→25)0.3 ml，摇匀，放置 6 min，再加入硝酸铝溶液(2.5→25)0.3 ml，摇匀，放置 6 min，加入 1 mol·L‐1氢氧化钠溶液 4 ml，加 30% 乙醇定容至刻度，摇匀，放置10 min，作为供试品溶液。

2.3.3 测定波长的选择 精密量取标准贮备液2 ml，置10 ml容量瓶中，按 2.3.2 项下操作，作为对照品溶液。另精密量取供试品溶液2份，其中一份如对照品溶液处理，作为供试品溶液，另一份直接用30%乙醇定容至刻度，作为阴性样品溶液。利用紫外可见分光光度计在200～800 nm波长范围内扫描，用加等量显色剂的30%乙醇液做空白，测得在510 nm波长处有最大吸收，测定吸收度。如图4所示:

图4 紫外分光光谱图

2.3.4 线性关系考察 精密吸取 0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 ml对照品溶液，分别置 10 ml容量瓶中，按2.3.2项下操作。在510 nm波长处测定吸收度，用加等量显色剂的乙醇液做空白，以浓度(C)对吸收度(A)作线性回归，得回归方程为 C=94.24-0.459(r=0.9998)。结果表明:芦丁在 10.15 ～101.5 μg·ml-1浓度范围内呈良好线性关系。

2.3.5 精密度实验 精密吸取对照品溶液1.0，2.0，3.0 ml于10 ml容量瓶中，按2.3.2 项下操作。测定吸收度，计算日内RSD及日间RSD，日内RSD=0.98%(n=5)，日间 RSD。

2.3.6 稳定性试验 精密量取供试品溶液0.5 ml和对照溶液3 ml分别置于10 ml容量瓶中，按2.3.2项下操作。供试品溶液利用未加显色剂的供试品做空白，对照品溶液利用加等量显色剂的乙醇液做空白，在60 min内每隔15 min在510 nm测定吸收度。结果表明:对照液吸收度在60 min内变化不大，供试品溶液吸收度在60 min内RSD=0.469%。

2.3.7 重复性实验 精密量取5份供试品溶液0.5 ml于10 ml容量瓶中，按2.3.2项下操作，以未加显色剂的供试品溶液做空白，在510 nm处测定吸收度，RSD=0.736%(n=5)。

2.3.8 加样回收率试验 精密量取已知含量的供试品溶液适量，加入芦丁对照品溶液，按2.3.2项下操作，利用未加显色剂的供试品溶液做空白，在510 nm波长处测定吸收度，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.3.9 复方毛冬青离子透入剂总黄酮含量测定分别精密量取3批供试品溶液0.4 ml于10 ml容量瓶中，按前面方法加入显色剂的方法显色，利用未加显色剂的供试品做空白，在510 nm波长处测定吸收度，结果见表2。

表2 样品总黄酮含量测定结果(n=3)

3 讨论

由本实验结果可知，复方毛冬青离子透入剂中毛冬青、红花、当归通过薄层色谱进行鉴别，供试品在与药材对照品色谱相应的位置上显相同颜色荧光主斑点，而其空白对照组色谱不具有此斑点。此方法操作简单、效果明显、易于观察。采用紫外分光光度法测定复方毛冬青离子透入剂中总黄酮的含量，其在510 nm波长处有最大吸收，通过测得标准曲线可知:黄酮在10.15 ～101.5 μg·ml‐1质量浓度范围内与吸收度线性关系良好。通过加样回收实验以及总黄酮含量的测定可得其结果精密度高、重现性良好、稳定性好、结果准确可靠。因此，通过薄层色谱以及采用紫外分光光度法对复方毛冬青离子透入剂进行鉴别和成份含量测定方法可靠。

［1］中国药典2005年版一部［S］.2005，附录:31-32.

［2］何艳玲，罗 健，杨昌金.复方毛冬青注射液质量标准研究［J］.中药材，2001，24(7):512.

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