丹芍生脉胶囊中丹酚酸B与芍药苷的含量测定

李怀斌 王 毅 陕西省咸阳市食品药品检验所（咸阳712000）

丹芍生脉胶囊是用来治疗心气不足，心阴虚引起的心悸气短，胸闷作痛等症的中药复方制剂，由丹参、赤芍、麦冬、五味子等组成。丹酚酸B 与芍药苷分别为该制剂中主药丹参和赤芍的主要有效成分［1，2，3，4］，为了能有效的控制该制剂的质量。本文将丹酚酸B与芍药苷作为该制剂的质量控制指标，采用高效液相色谱法对其进行含量方法学考察，为该制剂的质量控制与评价提供依据，现将其报道如下。

1 仪器与试药 1.1 仪器 岛津Lc－10ATVP型高效液相色谱仪；Sartorius AGME235S 型电子分析天平；超声波清洗器（无锡超声电子设备有限公司）。

1.2 对照品及试剂 丹酚酸B（批号：111562－200302，供含量测定用），芍药苷对照品（批号：110736－200321，供含量测定用）均购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯（天津四友）；水为二次蒸馏水；其它试剂均为分析纯。

1.3 阴性对照样品 系按处方和生产工艺自制分别不含丹参与赤芍的制剂。

2 方法与结果 2.1 色谱条件：色谱柱：Kromassil C18（5μm ，250mm×4.6mm）；流速：1.0mL／min。丹酚酸B以乙腈－甲醇－甲酸－水（10：30：1：59）为流动相，检测波长为286nm；芍药苷以甲醇－0.05mol／L磷酸二氢钾溶液（40∶65）为流动相，检测波长为230nm。进样量均为5μL。

2.2 供试品溶液的制备 2.2.1丹酚酸：B测定供试品溶液的制备［5］：取本品10粒内容物，精密称定，研细，取0.2g，精密称定，置50mL 量瓶中，加甲醇－水（1：1）适量，超声处理（功率80W，工作频率40KHz）20min，放冷，加甲醇－水（1：1）至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。

2.2.2芍药苷测定供试品溶液的制备：取本品10粒内容物，精密称定，研细，取1g，精密称定，加水5mL溶解后，加于已处理好的氧化铝柱（内径约0.9cm，中性氧化铝5g，干法装柱，并先用无水乙醇约20mL 预洗）上，用无水乙醇20mL 分次洗脱，收集洗脱液，置25mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 线性关系的考察 2.3.1丹酚酸B：精密称取丹酚酸B 对照品10.00mg，置50mL 量瓶中，加水至刻度，作为对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液1、2、3、4、5、6mL 分别置10mL 量瓶中，加水至刻度，其浓度分别为0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.12mg／mL。

2.3.2芍药苷：精密称取芍药苷对照品25.00mg，置25mL 量瓶中，加无水乙醇至刻度，作为对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液2、4、6、8、10mL，分别置10mL量瓶中，分别加入无水乙醇至刻度，其浓度分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1mg／mL

2.3.3测定与计算：分别吸取上述溶液各5μL 注入液相色谱仪，按2项下方法测定，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得丹酚酸B回归方程为Y ＝1E＋07X－2743（r＝0.9998），芍药苷回归方程为Y ＝8E＋0.6X－14882（r＝0.9999）；其线性范围分别为0.1～0.6μg与1 ～5μg。表明线性良好。

2.4 专属性试验 按测定用样品的处方和生产工艺，分别制备不含丹参的阴性对照样品和不含赤芍的阴性对照样品，同法制备空白供试品溶液，在上述色谱条件下进样10μl，结果在丹酚酸B 与芍药苷色谱峰对应的位置上，均未检测出对应色谱峰。说明其它药材中成分在该供试品的制备方法及色谱条件下对所测定成分不产生干扰。

2.5 精密度试验 取供试品溶液（批号20110201），按2项下方法和条件提取测定，重复进样5次，测定峰面积值，结果丹酚酸B RSD 为0.5%，芍药苷RSD 为1.0%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取本品（批号20110301），按2项下方法，于0h、2h、4h、6h、8h各进样一次，分别测定其丹酚酸B 与芍药苷峰面积积分值，结果RSD 分别为1.0%与1.4%。表明样品溶液制备后8h内进样稳定性良好。

2.7 重复性实验 按2 项下方法，对同一样品（批号20110301）分别制备5份供试品溶液，测丹酚酸B与芍药苷的含量，其RSD 分别为1.5%和2.2%，表明重复性较好。

2.8 加样回收率试验 2.8.1丹酚酸B：取已知含量的样品（批号20110301），平均含丹酚酸B8.7619mg／粒，精密称定5 份，分别加入浓度为0.145mg／mL 的丹酚酸B 对照品溶液10mL，按2项下方法和条件制备加样回收供试品溶液，并注入高效液相色谱仪，测定分析，结果见表1。

表1 丹酚酸B加样回收率实验结果

2.8.2芍药苷：精密称取已测知含量的样品（批号20110301，平均含芍药苷6.5561mg／粒）0.4g，精密称定，共5份，分别精密加入5mL芍药苷对照品溶液（1.35mg／mL），按2项下方法和条件方法制备加样回收供试品溶液，并注入高效液相色谱仪，测定分析，计算回收率。结果见表2。

表2 芍药苷加样回收率实验结果

2.9 样品的含量测定 对本品3批样品进行测定，结果见表3。

表3 样品中丹酚酸B含量测定结果

3 小结 3.1 丹酚酸 B 提取时，曾用超声处理10、20、30min（功率80W，频率40KHz）结果10、20、30min测定结果相近，为确保提取完全，故选择超声处理20min。

3.2 芍药苷曾尝试以甲醇20mL 称定重量 浸泡4h，超声20min，取续滤液测定与2.2.2项下方法比较，结果2.2.2项下方法分离较好。

3.3 参照有关资料［6］芍药苷测定用甲醇－0.05mol／L磷酸二氢钾溶液（40∶65）和磷酸盐缓冲液－乙腈（65∶10）分别为流动相进行比较，结果后者出峰时间较晚、测定结果不理想，故采用了前者。

3.4 本实验确定的方法测定丹酚酸B 和芍药苷含量，结果准确稳定，可作为本产品的质量控制项目。

［1］ 周 丹，权 伟，关 月，等；丹酚酸B 通过AkteNOS通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究＊［J］.陕西中医，2013，34（1）：104－107.

［2］ 陈昕琳，章怡祎，顾仁樾.丹参多酚酸B 对动脉粥样硬化大鼠OX40／OX40L免疫通路研究［J］.陕西中医，2012，33（6）：758－761.

［3］ 张 良，袁冬平，徐 立，等.丹酚酸B对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制研究［J］.中药新药与临床药理，2008，6（19）：467－469.

［4］ 孙 蓉，吕丽莉，郭守东，等，芍药苷对局灶性脑缺血模型及血脑屏障的影响［J］.中国药学杂志，2006，（11）：78－89.

［5］ 毕跃峰，贾陆，张小娟，等，不同提取方法对丹参中丹参酮ⅡA 和丹酚酸B 含量测定的影响［J］.药物分析杂志，2009，（07）：54.

［6］ 中国药典委员会.中国药典［M］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：120.