第四代HIV 诊断试剂检测HIV 抗体假阳性原因分析

顾春瑜，刘英丽，王海滨，孙婷婷，何丽婧

获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，即艾滋病，已成为21 世纪危害人类健康的主要疾病之一，早期发现、早期预防隔离是阻止HIV 传播的有效手段。HIV 检测的第四代诊断试剂具有较高的敏感性，能将窗口期缩短4 ～5 d［1］，但灵敏度提高的同时假阳性率也随之增加。本研究旨在通过回顾近几年我院HIV 初筛阳性的标本，分析第四代试剂检测HIV 抗体出现假阳性的原因。

1 材料与方法

1.1 标本来源 2010－01 至2012－01 我院HIV初筛阳性标本119 例，来自于有创检查和手术前准备的患者，以及疑似HIV 感染者。其中男86 例，女33 例，年龄16 ～85 岁，平均(45.29 ±18.14)岁。

1.2 试剂和仪器 仪器为罗氏全自动免疫分析仪Roche cobas6000(瑞士罗氏公司生产)，酶标仪RT－6000、洗板机RT－3000(深圳雷杜生命科学有限公司生产)。HIV 四代试剂、HIV－P24 抗原试剂由罗氏公司提供，HIV 三代试剂由万泰生物药业股份有限公司提供。

1.3 HIV 抗体和HIV－P24 抗原联合检测( HIV 四代试剂) 利用电化学发光技术对人血清中HIV 抗体及HIV－P24 抗原同时进行定性分析，实验在Roche cobas6000 全自动免疫分析系统上进行。按照说明书判定结果:S/CO≥1 为阳性;0.9≤S/CO ＜1 为灰区;S/CO≤0.9 为阴性。

1.4 HIV 抗体及HIV－P24 抗原分别检测 为了排除同一个实验系统同时检测抗原和抗体引起的实验干扰，将58 例HIV 四代试剂检测S/CO≤10 的初筛阳性标本分别用HIV 三代试剂(ELISA 法)检测HIV 抗体，用HIV－P24 抗原试剂检测HIV－P24 抗原，实验步骤按照说明书进行，检测结果与四代试剂检测结果比较。

1.5 HIV 确认实验 按照《全国艾滋病检测技术规范》(2009 年版)的要求［2］，所用HIV 初筛阳性标本重新抽血用两种试剂同时进行复检，双阴性者报告为阴性，双阳性或一阴一阳的标本送HIV 确证实验室(本实验室标本送至北京市CDC 和全军HIV实验室)，采用Westblot 法进行确认试验。

2 结果

2.1 HIV 抗体初筛阳性的标本确认结果 119 例HIV 抗体初筛阳性标本送至HIV 确认实验室回报结果见表1。根据不同S/CO 范围HIV 抗体确认结果分布，所有HIV 抗体阳性标本S/CO ＞150;HIV抗体阴性和HIV 抗体不确定的标本S/CO≤150，且绝大部分S/CO≤10。

表1 119 例HIV 抗体初筛阳性的标本确认结果分布(n;%)

2.2 各种疾病在假阳性组中的分布 51 例假阳性患者的既往病史，详见表2，其中肿瘤及血液病构成比最大。

表2 各种疾病在HIV 假阳性组中的分布

2.3 HIV 抗体及HIV－P24 抗原联合检测和分开检测对比 对58 例HIV 四代试剂检测S/CO≤10的初筛阳性标本，分别检测HIV 抗体和HIV－P24抗原，比较前后两次的检测结果见表3。

表3 HIV 抗体及HIV－P24 抗原联合检测和分开检测对比

3 讨论

快速准确地检测HIV 抗体并为临床诊断和治疗艾滋病提供可靠的依据，已成为检验工作者刻不容缓的责任。但HIV 抗体检测的假阳性结果给HIV 初筛实验室的工作带来诸多不便，也造成了巨大医疗资源浪费，同时给受检者带来沉重的心理负担。尤其是第四代试剂的出现，假阳性现象更为突出，因此本研究希望通过分析假阳性结果的原因，减少HIV 抗体检测假阳性的发生。

3.1 HIV－P24 抗原与假阳性 随着HIV 检测技术的提高，HIV 4 代试剂已逐渐取代了HIV 3 代试剂，它能在同一个检测系统同时检测HIV(1 +2)抗体与P24 抗原。P24 抗原属HIV－1 核心蛋白，在病毒的包装和成熟过程中发挥重要作用，其氨基酸序列在HIV 各毒株之间高度保守，缺失P24 抗原会导致病毒无法正常组装［3］。在HIV 感染早期，病毒大量复制而产生抗体极少时，通过检测血清或血浆P24 抗原，可以将“窗口期”缩短，故P24 抗原在HIV－1 早期感染的检测中有重要价值［4］。但由于第4代HIV 检测试剂的固相载体上同时包被抗p24 的单克隆抗体和HIV 抗原，而载体的表面积是固定的，因此在检测过程中，吸附到载体上的抗体和抗原的量均会受到限制，导致抗原和抗体检测之间的干扰现象，这可能是造成检测假阳性的重要原因之一［5］。为了证明这个假设，本实验将58 例S/CO≤10 的初筛阳性标本，分别检测HIV 抗体和HIV－P24 抗原，其中有25 例HIV 抗体和HIV－P24 抗原结果为阴性，确认结果也为阴性，这证明四代试剂在同一个系统同时检测抗原和抗体会出现干扰现象，但由于标本量较少，还需要进一步的实验研究。同时P24 抗原具有的非特异性［6］，在本实验中，随访复查8 例HIV 抗体不确定患者，带型无进展，全部被诊断为阴性，带型模式出现最多的是P24，这说明HIV 抗体检测的假阳性与P24 抗原的非特异性相关。

3.2 其他疾病与假阳性 其他疾病是HIV 抗体检测假阳性的另一个重要原因，如恶性肿瘤、心血管疾病、透析、自身免疫性疾病、妊娠等［7－9］，这些疾病可使患者体内含有某些治疗性抗体、类脂嗜异性抗体、类风湿因子、甲胎蛋白等，这些物质会与试剂中的抗原成分非特异结合，从而发生假阳性。本研究初筛阳性的119 例标本中，经Westblot 实验确认，共有51例HIV 抗体阴性，其中肿瘤14 例、烧伤8 例、妊娠7例，位列前3 位，合计约占56.8%，在这前3 位的疾病中烧伤位居第2 位，这和以往的别的报道不同。笔者发现在我院初筛阳性的送检标本中，其中1 例患者先后2 次送检，前后的S/CO 值有较大差异，这说明该患者体内某种物质干扰了检测，推测与烧伤患者的用药有关，但还未经证实。这也是我院作为以烧伤为特色的医院HIV 抗体检测假阳性率较其他医院高的原因之一。

3.3 S/CO 比值与假阳性 运用四代试剂在全自动化学发光免疫分析系统检测HIV 抗体使HIV 抗体检测更标准化更敏感，它减少了人为的因素，从加样到测试全部机器操作，重复性好。因此在分析假阳性原因时不需要分析过多的人为因素。但化学发光分析系统的高灵敏度与HIV 四代试剂高敏感性的叠加，使HIV 抗体检测的假阳性率大大增加，本研究中119 例初筛阳性标本只有40 例为确认实验阳性，笔者发现HIV 抗体阳性的标本S/CO 值全都在150 以上，而HIV 抗体假阳性的标本S/CO 比值大部分在1 ～10 之间。随着S /CO 值的增高，初筛结果与确证阳性符合率也随之升高。因此当1 ＜S/CO≤10 时，HIV 抗体阳性的可能性小，多为体内某些抗原物质干扰所致［10］，实验室检测人员应依据实验检测结果，结合受检者相应病史和个体状况进行综合分析，有条件可以将HIV 抗体与p24 抗原分别检测，以排除假阳性。

总之，HIV 抗体检测的假阳性有多方面原因，四代试剂因其固有的特点较三代试剂假阳性率高，因此在临床应用中应根据实际情况具体分析。虽然HIV 抗体检测已开展多年，但应用化学发光技术检测HIV 抗体还刚开始应用于临床，HIV 抗体四代试剂的假阳性原因还有待我们进一步的研究。

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