假藿香不同入药部位中齐墩果酸的含量测定

吕锡亮姬生国*

（1 河南省职工医院，河南 郑州 450002；2 广东药学院中药学院，广东 广州 510006）

假藿香不同入药部位中齐墩果酸的含量测定

吕锡亮1姬生国2*

（1 河南省职工医院，河南 郑州 450002；2 广东药学院中药学院，广东 广州 510006）

目的对民间中草药假藿香不同入药部位中齐墩果酸的含量进行进行比较，以确定适宜的入药部位。方法采用RP-HPLC法测定。色谱柱：ODS-C18色谱柱（4.6mm×250mm），流动相：甲醇-0.5%磷酸水（90∶10）；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：210nm。结果其根、茎、叶中含量分别为0.02106%，0.02681%，0.03206%。结论叶中含量比根中高0.011%，比茎中高0.00525%，茎和根含量相近，在药材重量上茎和根占85%以上，故建议以叶入药为佳。该方法快速、准确、灵敏度高、重现性好。

蛇百子；齐墩果酸；HPLC

1 仪器与材料

1.1 仪器及试剂

LC-2010AHT高效液相色谱仪（日本岛津公司），1/10万分析天平（日本岛津公司）SK250LH超声波清洁器（超声功率为100W，上海科导超声仪器有限公司），齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110709-200505），试验所用试剂除流动相为色谱纯外其余均为分析纯。

1.2 药材

实验材料采集于广州市广州大学城广东药学院药用植物园，经广东药学院中药学院姬生国教授鉴定为山香Hyptis suaveolens (L.) Poit。药材阴干，打粉，过筛备用。

2 方法与结果

表1 齐墩果酸加样回收率数据表（n=6）

2.1 色谱条件[3,4]

色谱柱：迪马Kromasil ODS柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-0.5%磷酸水（90∶10）；检测波长：210nm；流速：1mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL。

2.2 方法学考察

2.2.1 线性范围考察

精密量取上述对照品溶液0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，定容至5mL容量瓶中，配成系列浓度为0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL的齐墩果酸对照品溶液。以齐墩果酸浓度为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)作标准曲线,得回归方程：y=107x-1832.3，r=0.9996，齐墩果酸含量在0.05～0.5mg/mL范围内呈良好线性关系。

2.2.2 精密度考察

仪器精密度度实验：取齐墩果酸对照品贮备液，在上述色谱条件下，连续重复进样5次，以对照品峰面积计算偏差，RSD=0.40%。方法重现性实验：按供试品溶液的制备方法配制齐墩果酸样品溶液，连续重复进样5次，测定齐墩果酸峰面积值，RSD=0.40%。

2.2.3 稳定性考察

将上述齐墩果酸中等浓度的对照品溶液在第0、1、4、8、12、24h连续进样3次，分别测定峰面积，RSD=0.30%，齐墩果酸在24h内基本稳定。

2.2.4 加样回收率试验

精密量取已测定含量齐墩果酸含量的叶样品溶液6份，分别精密加入同一浓度的齐墩果酸对照品溶液，按供试品溶液的制备方法制备，在上述色谱条件下，测得齐墩果酸的回收率平均为98.93%，RSD为0.81%（表1）。

2.3 供试品溶液的制备与测定

2.3.1 对照品溶液的制备

精密称取齐墩果酸对照品0.0100g，加甲醇（色谱纯）溶解并定容至10mL，即为1mg/mL的对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备

精密称取药材根、茎、叶粗粉各5g，加95%乙醇45mL超声提取，过滤，滤液于旋转蒸发仪上蒸干后直接加甲醇定容至5mL。

2.3.3 样品的测定

取根茎叶三部位的样品，按2.4.2项下制备样品溶液，根据测定成分的线性范围进样，测定峰面积，由对应的线性方程计算其含量，结果见表2。对照品溶液及样品溶液的HPLC图见图1。

3 讨 论

3.1 假藿香中含有齐墩果酸和熊果酸，齐墩果酸和熊果酸是同分异构体，由于结构的相似性，性质极为相近，在进行液相分离时其保留时间基本一致，因此会出现很难分离。通过大量的实验，我们优选了齐墩果酸的HPLC条件。

3.2 样品提取方法的选择：用超声波提取法提取齐墩果酸，溶剂性质、溶剂量、溶剂浓度、超声时间、所加药材的质量和药材的粉碎度对齐墩果酸含量均有影响。本实验采用95%乙醇9倍的量作为根、茎、叶的提取溶剂，均超声提取2h，提取效果良好。

表2 样品中测定的齐墩果酸含量结果（n=6）

图1 对照品及蛇百子样品高效液相色谱图

3.3 色谱条件的选择及优化[5,6]：熊果酸和齐墩果酸是同分异构体，蛇百子同时含有这两个成分，在叶中较难分离。本实验尝试了三种色谱柱：①在Phenomenex Luna C18（2）150×4.6mm；②在Waters MS C185μm 250×4.6mm；③Dikma PLATISIL ODS 5μm 250×4.6mm。结果前两种色谱柱分离效果均不理想，因此，选用Dikma PLATISIL ODS 5μm 250×4.6mm。试验考察了以下色谱系统：甲醇-水，甲醇-磷酸水，乙腈-水，乙腈-磷酸水，所得的色谱图以甲醇-0.5%磷酸（90∶10）洗脱为最佳。

3.4 假藿香为一年生草本植物，植株高可到达2米，其茎、根粗壮，茎和根的重量占整株植物重量的85%以上，由实验结果可见，其根、茎、叶中含量分别为0.02106%，0.02681%，0.03206%。叶中含量比根中高0.011%，比茎中高0.00525%，由于，齐墩果酸为其主要有效成分，故此，建议入药用叶。

[1] 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(下册)[M].北京:人民卫生出版社,1978:65-66.

[2] 国家医药管理局中草药情报中心站编.植物药有效成分手册[M].北京:人民卫生出版社,1986:427-428.

[3] 江记武,肖庆祥.植物药有效成分手册[M].北京:人民卫生出版社,1986.

[4] 王天勇,杨文远.反相高效液相色谱法测定七种中药中齐墩果酸[J].分析测试学报,1995,14(4):82-84.

[5] 郑茂,范博,丁红,等.高效液相色谱法测定不同产地白花蛇舌草中齐墩果酸和熊果酸的含量[J].中国药物与临床,2010,10(3): 261-262.

[6] 刘伟,丁海杰.HPLC测定夏枯草中熊果酸、齐墩果酸、迷迭香酸的含量[J].中成药,2008,30(4):577-580.

Determination of Oleanolic Acid in Hyptis Suaveolents Different Vegetative Organs

LV Xi-liang1, JI Sheng-guo2

(1 Henan Province Worker's Hospital, Zhengzhou 450002, China; 2 School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China)

ObjectiveTo determinate the content of oleanolic acid in Hyptis suaveolents by RP- HPLC, and Choose appropriate medicinal organs.MethodsThe oleanolic acid was determined by HPLC, Column: ODS-C18(250×4.6mm), mobile phase: methanol-water (with 0.5% H3PO4), detection at 210nm, flow rate: 1.0mL/min, column temperature: 25℃.ResultsThe determination of oleanolic acid was 0.02106% in roots,0.02681% in stems, 0.03206% in leaves.ConclusionThe content in leaf than root high 0.011%, more than 0.00525% of the stem, high content of stems and roots. Stem and root content close, in medicinal materials on stem and root weight 85%, therefore, Suggest to clinical medicinal leaves as well. The established method is quick, accurate, sensitive and well repeated.

Hyptis suaveolents; Oleanolic acid; HPLC假藿香为唇形科植物山香Hyptis suaveolens (L.) Poit的干燥全草，别名逼死蛇、毛老虎，黄黄草、大还魂，主产于广东、广西、台湾等地。全草入药，是我国南方地区广泛使用的中草药。其性辛、温，味苦，有疏风散瘀，解毒定痛之功效，用于治疗感冒，风湿，湿疹，跌打创伤等症[1,2]。我院以此药材为主药，正在研制治疗湿疹的外用制剂，由于该植物植株高大，茎和根较重，大量运输成本较大，故此，对其不同入药部位中的齐墩果酸进行测定，为入药部位的选择以及以后研究制剂的质量控制提供参考。

R927.2

B

1671-8194（2013）17-0056-02

*通讯作者：E-mail：shengguo_ji@yahoo．cn