HPLC法测定缩泉胶囊中乌药醚内酯的含量

李厚洋蔡其辉田宏现吴开慧

（1 常德市第一人民医院药剂科，湖南 常德 415000；2 吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000）

HPLC法测定缩泉胶囊中乌药醚内酯的含量

李厚洋1蔡其辉2田宏现2吴开慧1

（1 常德市第一人民医院药剂科，湖南 常德 415000；2 吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000）

目的 建立采用高效液相色谱法测定缩泉胶囊中乌药醚内酯含量的方法。方法 采用Shimadzu高效液相色谱仪，C18色谱柱；流动相为乙腈：水（56∶44），检测波长为235nm，流速为1.0mL/min。结果 乌药醚内酯在4.8～10.8μg范围内，呈现出良好的线形关系，r=0.9998；平均回收率98.2%，RSD为0.88%（n=5）。结论 本方法操作简单易行，专属性强，准确可靠，可用于缩泉胶囊的质量控制。

缩泉胶囊；高效液相色谱法；乌药醚内酯

缩泉胶囊由山药、益智仁、乌药3味药组成的复方制剂缩泉胶囊，具有补肾缩尿。用于肾虚之小便频有频数，夜卧遗尿[1]；而乌药为樟科植物乌药（Lindera aggregata（Sims）Kostern.）的干燥块根，具有顺气止痛，温肾散寒功能，用于胸腹胀痛，气逆喘急，膀胱虚冷，遗尿尿频，疝气，痛经等[2]，其主要有效成分是乌药醚内酯[3，4]，其中最能体现乌药特征的成分应是呋喃倍半萜及其内酯类成分[5]。因此，本文采用高效液相色谱法，对缩泉胶囊中乌药药材的乌药醚内酯含量进行测定，为缩泉胶囊的推广应用、质量控制提供有效依据。

1 实验材料

1.1 仪器

Shimadzu LC-10AT泵（日本岛津公司），Shimadzu SPD-10A紫外检测器（日本岛津公司）；Rheodyne 7125六通进样阀（loop=20μL）（日本岛津公司）；Shimadzu Pack-ODS柱，250×4.6mm（日本岛津公司）；N3000色谱工作站+forWindows2000（浙江大学智能研究所）；FA-2004电子分析天平（上海天平仪器厂）；KQ-250E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

乌药醚内酯（批号：200602，中国药品生物制品检定所）。缩泉胶囊（湖南汉森制药有限公司生产，规格：每粒装0.3g，本医院药剂科提供）。乙腈（湖南师大化学试剂厂，色谱纯），乙醚（湖南师大化学试剂厂，分析纯）；甲醇（湖南师大化学试剂厂，分析纯）；水为二次重蒸馏水（自制）。

2 实验方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取乌药醚内酯对照品15.0mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解，加甲醇至刻度，摇匀，即得每1mL中含乌药醚内酯0.6mg的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取装量差异项下的内容物，约1.0g，精密称定，置索氏提取器中，加入乙醚30mL，提取4h，提取液挥干，残渣用甲醇分次溶解，转移至25mL容量至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.3 色谱条件

色谱柱：Shimadzu Pack-ODS柱；乙腈∶水（56∶44）为流动相；检测波长为235nm，灵敏度：0.005AUFS，流速为1mL/min，柱温:室温，乌药醚内酯在此色谱条件下的保留时间为16min；具体见色谱图1：对照品A、样品C。

2.4 方法学考察

2.4.1 准确性试验

精密吸取对照品溶液10μL，重复进样6次，分别测定峰面积值，计算出乌药醚内酯的RSD为1.46%。

表1 回收率测定结果

图1 乌药醚内酯对照品（A）、空白（B）、样品（C）色谱图

2.4.2 重复性试验

取同一批样品（批号：080201），按2.2项下供试品溶液操作方法，制备6份供试品溶液，按在上述色谱条件下，精密吸取10μL，重复平行测定，根据峰面积值，计算出乌药醚内酯的RSD为1.10%。

2.4.3 线性关系考察

取上述对照品的溶液分别以8.0，10.0，12.0，14.0，16.0，18.0μL进样分析，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积值（Y）为横坐标、以对照品的进样量（X）为纵坐标作图，进行线性回归。得回归方程分别为：Y（乌药醚内酯）=7362X+431.6，r=0.9998。结果表明乌药醚内酯进样量在4.8～10.8μg范围内线性关系良好。

2.4.4 空白试验

按照质量标准与处方比例制备缺味（乌药）中药的阴性样品的制剂，按2.2项下供试品溶液操作方法进行样品处理，所得的空白试液，精密吸取20μL，注入液相色谱仪中，测定分析，结果显示无干扰，具体见色谱图图1：空白（B）。

2.4.5 稳定性试验

取供试品溶液（批号为080201，含量为0.10mg/粒），每2h进样一次，共测定6次，每次20μL，将峰面积代入回归方程，计算，样品中乌药醚内酯的RSD值（n=6）为1.24%；试验结果显示，供试品在12h内稳定性良好。

2.4.6 加样回收率试验

精密称取装量差异项下的缩泉胶囊（批号为080201，含量为0.10mg/粒）的内容物，6份，每份1.0g，每份加入精密量取的乌药醚内酯对照液各0.1mL，6份样品同时提取，其方法同2.2项下的供试品溶液制备方法，制备样品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率。结果乌药醚内酯的加样平均回收率为 98.2%；RSD分别为0.88% （表1）。

2.5 样品测定

分别精密吸取对照品溶液与不同批号缩泉胶囊按2.2项下的供试液溶液制备方法，制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，用外标法计算出样品中乌药醚内酯的含量，结果分别见表2。

表2 缩泉胶囊中乌药醚内酯含量测定结果（n=5）

3 讨 论

3.1 色谱条件的选择

本试验，对流动相乙腈和水的比例进行试验考察，考察20∶80、30∶70、40∶60、60∶40、70∶30、80∶20等比例乙腈与水流动相溶液；实验结果表明：随着乙腈浓度的增加，出峰的时间提前，使样品的分离度不理想[6]；而乙腈浓度减少时，样品出现双峰、拖尾等现象；最后经试验确定，以乙腈∶水（5∶44）的流动相，获得较好的峰形，呈正态分布，分离度＞1.5。

3.2 提取时间的考察

采用乙醚为萃取溶媒，对萃取时间所得乌药醚内酯含量进行了考察，结果萃取4h后含量不再变化，故本实验选择萃取时间为4h。

3.3 本实验采用HPLC法测定缩泉胶囊中乌药药材中乌药醚内酯的含量，其提取方法简便，分析快速，与本药品原质量标准采用薄层鉴别制备后的乌药药材的质量，精密度更高，能更好地用于缩泉胶囊的质量控制。

参考方献

[1] 国家药品监督管理局标准(试行)WS3-654(Z-130)-2003(Z)[S].

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社,2010:71-72.

[3] 蔡立红,俞桂新,王峥涛,等.高效液相色谱法测定乌药中乌药醚内酯的含量[J].中国中药杂志,2004,29(7):657-659.

[4] 闫利利,王金芳,李秋月,等.乌药的化学成分研究[J].中国药业,2013, 22(2):16-17.

[5] 王军伟,阮冰.乌药的植化及药理研究概况[J].浙江中医杂志,2006, 41(11):6751.

[6] 余翠琴,陈方亮.高效液相色谱法测定乌药中乌药醚内酯[J].中草药,2009,40(6):983-984.

HPLC Determination of Linderane in Suoquan Capsules

LI Hou-yang1, CAI Qi-hui2, TIAN Hong-xian2, WU Kai-hui1
（1 Department of Pharmacy, Changde First People's Hospital, Changde 41500, China; 2 Biological Resources and Environment Science College, Jishou University, Jishou 416000, China）

Objective HPLC methods were established for the determination linderane of Suoquan capsules. Methods The separation was performed on a Shimadzu HPLC, C18 chromatography column; The mobile phase was composed of acetonitrile-water （56∶44）；The flowrate was 1.0mL/min; The detection wavelenth was 235nm. Results There is a good linear relationship within the rang of 4.8～10.8μg, r=0.9998; The average recovery was 98.2%; RSD=0.88%. Conclusions This method is simple, reproducible, accurate and reliable, and can be used for quality control of Suoquan capsule.

Suoquan; Capsules; HPLC; Linderane

R282.710.3

B

1671-8194（2013）33-0033-02