夜交藤片质量标准的研究

杨 宝 邬伟魁

（广东省梅州市食品药品监督检验所，广东 梅州 514071）

夜交藤片质量标准的研究

杨 宝 邬伟魁

（广东省梅州市食品药品监督检验所，广东 梅州 514071）

目的 建立夜交藤片的质量标准。方法 用TLC法对夜交藤片中首乌藤进行定性鉴别；用HPLC法对制剂中首乌藤的活性成分2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进行含量测定。色谱条件：色谱柱为SHIMADZUVP-ODS（4.6nm×250mm，5μm），流动相为乙腈∶水（28∶72），流速为1.0mL/min，检测波长为320nm，柱温为25℃。结果 薄层鉴别斑点清晰，阴性对照无干扰；2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在20～100μg/mL范围内呈良好的线性关系，r＝0.9999，平均回收率为96.45%，RSD为1.84% （n=6）。结论 该方法灵敏准确、专属性强，可用于夜交藤片的质量控制。

夜交藤片；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷

夜交藤片源于梅州医院的临床经验方，由首乌藤、合欢皮、远志等中药组成，具有祛痰开窍，滋阴健脑，安神益智的功效；临床多用于肝肾阴虚引起的心悸怔仲，失眠多梦，虚烦不安，忧郁，健忘及工作后疲劳等所致的脑力损伤等症。该制剂为医院制剂，原质量标准较低，制定于上世纪90年代。由于本品临床疗效良好，需求量较大，成为该院医院的主打品种。为更好地控制其质量，对本品进行质量标准研究。建立了君药首乌藤的TLC定性鉴别方法及其有效成分2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

梅特勒AB204-N型电子分析天平；BP211D电子天平；Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ-250DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；WFH-201B紫外透射反射仪（上海精科实业有限公司）。

1.2 材料

对照药品有：大黄素（批号：110756-200110）、大黄素甲醚（批号：110758-200610）、2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（批号：111537-201103），首乌藤（批号：120939-200404中国药品生物制品检定所提供）；夜交藤片（批号110305，110314，110321梅州市第三人民医院提供）；乙腈为色谱纯（天津四友化工），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）。

2 薄层色谱鉴别

取样品10片，除去糖衣，研细，加乙醇10mL，超声处理30min，滤过，滤液作为供试品溶液。取首乌藤对照药材1g，研细，加乙醇10mL，超声处理30min，滤过，滤液为对照品溶液。取大黄素、大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1mL含1mg的对照品溶液。首乌藤以外各药材按处方比例称取，按工艺提取，即得除首乌藤以外各药材混合干浸膏粉，取混合干粉约10g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，各吸取5μL上述五种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视[1-3]。在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图1。

图1 首乌藤薄层色谱图（1.供试品溶液；2.首乌藤对照药材溶液；3.阴性对照溶液；4.大黄素对照品；5.大黄素甲醚对照品）

3 含量测定

3.1 色谱条件与系统适用性试验[1]

Agilent 1100高效液相色谱仪；色谱柱：SHIMADZU VP-ODS 250 ×4.6，SN:8022538；流动相：乙腈∶水（28∶72）；流速：1.0mL/ min；柱温：25℃；进样量：10μL；测波长为320nm[4-6]。

3.2 对照品溶液制备[1]

精密称定2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品，加稀乙醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。

3.3 供试品溶液制备[7，8]

10片本品，去除糖衣，研沫，取适量（约相当于首乌藤药材0.5g）置25mL量瓶中，精密加入稀乙醇20mL，超声30min，加稀乙醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

3.4 线性关系考察

把所得对照品溶液浓度为：20μg/mL、40μg/mL、60μg/ mL、80μg/mL、100μg/mL。分别精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积。结果显示，2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在20～100μg/mL范围内线性关系良好。

3.5 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h，进样10μL，测定峰面积。结果：供试品溶液的平均峰面积为2723.89，RSD为0.062%，表明其稳定性较好。

3.6 重复性试验

取6份同一批号的样品，制备方法同供试品溶液。结果显示其重复性良好。

3.7 专属性试验

按色谱条件精密吸取上述制备的溶液10μL，测定峰面积。结果：阴性对照在对照品相同保留时间处无干扰峰，故认为其它药味对2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定无干扰。

3.8 样品含量测定

分别取3个批次的样品（批号110305，110314，110321），按3.3项方法制备供试品溶液，测得样品中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量为64.158，60.156，61.921mg/片。

4 讨 论

4.1 测定指标的考察

首乌藤为夜交藤片处方中君药，其主要成分为大黄素、大黄素甲醚、2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷。其中大黄素、大黄素甲醚为大黄、虎杖等药材常见的成分，而2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷是首乌藤中特有的成分，为更好控制药品质量，体现首乌藤药材中这一专属性成分，因此本实验最终以2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为含量测定的指标。实验结果表明：该含量测定方法简便、准确、专属性强。

4.2 阴性对照取样量选择

为体现阴性对照对2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷测定的影响，更具有代表性，故阴性对照溶液制备时取样量约为供试品溶液制备时的4倍。

4.3 流动相的选择

以不同比例的乙腈-水（28∶72、26∶74、20∶80、15∶85）作为流动相，考察流动相比例改变时，对样品中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰形和分离效果的影响。结果显示，乙腈比例变化对样品中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰形和分离效果有较大的影响。由于以乙腈∶水（28∶72）为流动相时，2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷出峰时间约6min，分离效果较好，故本实验采用乙腈：水为流动相。

4.4 供试品提取方法的选择

对供试品提取方法进行了对比和筛选：①2010版《中国药典》一部首乌藤含量测定项下方法，采用加热回流的方法。②本文方法，采用超声处理的方法。结果显示，2种方法所得结果基本一致，因此采用超声处理的方法，体现更方便、快捷的原则。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:中国医药科技出版社,2010: 164.

[2] 高晓霞.不同采集地制何首乌薄层色谱指纹图谱研究[J].中国实验方剂学杂志,2007,13(5):4.

[3] 范宋玲,孙冬梅.首乌藤药材质量标准的研究[J].中国实验方剂学杂志,2006,12(3):7.

[4] 廖海民,王玲丽.不同产地何首乌中二苯乙烯苷的测定[J].中草药,2006,37(4):603.

[5] 潘林梅,徐小燕.HPLC法测定制首乌及降脂通脉片中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量[J].中成药,2003,25(12):974.

[6] 尹宁宁,林林.HPLC测定杜羌通络酒中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量[J].中国中药杂志,2008,33(24):28.

[7] 徐绍新,石召华.不同干燥工艺对何首乌提取物中二苯乙烯苷含量的影响[J].中成药,2007,29(11):1694.

[8] 李海燕,宋汉敏.培元通脑胶囊质量标准研究[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(2):129.

R9

B

1671-8194（2013）26-0067-02