周知午王 畅
(1 湖南省中医药研究院附属医院,湖南 长沙 410006;2 湖南中医药大学附属中西医结合医院,湖南 长沙 410000)
麻黄汤超微饮片和原药材组成成分的差异
周知午1王 畅2
(1 湖南省中医药研究院附属医院,湖南 长沙 410006;2 湖南中医药大学附属中西医结合医院,湖南 长沙 410000)
目的 探究中药麻黄汤超微饮片和原药材在成分组成上的差异。方法 采用经典方剂麻黄汤为研究对象,分别取等量的麻黄汤中的麻黄、桂枝,实验组使用中药超微饮片,对照组使用中药原材料。每组均先分别在显微镜下观察两组药材浸泡时的细胞壁的破壁情况,通过薄层色谱照片来鉴定麻黄、桂枝的化学成分,以及通过化学方法测定盐酸麻黄碱的浸出量。比较超微饮片和原药材成分组成的差异。结果 在显微镜下,超微饮片基本看不到完整的细胞,而原药材情况相反;薄层色谱照片显示,超微饮片与原药材在相同位置有相同斑点;超微饮片盐酸麻黄碱浸出量是原药材的 120 倍。结论 超微饮片与原药材化学成分基本相同,而通过超微技术的破壁处理,能使药物的有效成分盐酸麻黄碱更好的渗出,提高药物的使用效率。
超微饮片;组成成分;传统药材
中药超微饮片是的一种较新型中药饮片,主要采用了传统炮制技术、超微细胞破壁技术[1]。通过破碎细胞壁使得有效成分得以充分的浸出,比较传统的饮片技术,大大节约了煎煮时间、有效成分的使用率,从而提高药效。对于临床实际使用中采用超微饮片是否和传统饮片之间存在差异,一直是存在争议,本实验所以通过显微镜检测法、薄层色谱分析法、高分离度液相色谱法三个对比试验来比较超微饮片和原药材麻黄汤的差异[2],详情如下:
1.1 药品与试剂
麻黄10g,桂枝6g,杏仁12g,甘草4g,盐酸麻黄碱对照品;展开剂;0.5%碘的氯仿溶液;50%甲醇溶液。
1.2 仪器
UltMiate- 3000 型高效液相色谱仪;Nikon Eclipse E600 生物显微镜;研钵;点样器;薄层板;中性三氧化二铝柱;容量瓶(10mL)。
1.3 方法
1.3.1 细胞壁破壁情况及颗粒直径
分别取适量超微饮片和原药材麻黄汤样品,加适量92%左右的蒸馏水,制成水装片。调好显微镜,在显微镜下观察细胞壁的破壁情况及颗粒的直径,作好记录。
1.3.2 薄层色谱分析法
称取麻黄汤超微饮片32g和三倍的水一同放到研钵中,有规律的向一个方向研磨,尽量避免产生气泡,然后将除去少量气泡的混合物尽量平铺于玻板上(厚度0.2~0.3mm),置于水平台上在室温下晾干(约30min),然后置于100℃再进行烘干(约30min),留着备用[3]。再取出原药材32g用以上同样的方法制备玻片,备用。用点样器在薄层板上点样,点约距离为2cm左右的小圆点即可。将已经点完样的薄层板放到展开室的展开剂中,密封展开室盖。观察,直至小圆点展开一定距离(约10~14cm),取出,在室温下晾干,喷洒0.5%碘的氯仿溶液直至显色,进行比较分析。
1.3.3 盐酸麻黄碱的测定
将麻黄汤原药材32g制成粗粉,与甲醇30mL混合与锥形瓶中,称重,进行超声处理(约50min)。50min后继续称重,用甲醇补足,摇匀使之充分混合,过滤。将精密量取1mL滤液
置于中性三氧化二铝柱上,用甲醇溶液洗脱,收集约9mL洗脱液置于容量瓶中(量程10mL),滴加一滴磷酸,再倒入甲醇溶液直至刻度线,混合摇匀,作为实验组溶液。再取32g麻黄汤超微饮片,按照上述方法制得对照组溶液。精细称得7.08g盐酸麻黄碱置于容量瓶中,用甲醇溶液配制成10mL溶液,量取2.5mL移至25mL容量瓶中,再用甲醇溶液定容至刻度[4]。分别量取上述溶液0.5mL,1.0mL,1.5mL,2.0mL,2.5mL定容到10mL。在20倍溶剂条件下,观察在不同的时间段里盐酸麻黄碱的溶出量(mg/g)。
1.4 统计分析方法
采用SPSS 13.0软件处理, 组间比较采用两样本t检验;组内比较采用单向方差分析。
2.1 细胞壁破壁情况及颗粒直径
超微饮片的细胞基本看不到细胞壁,绝大多数样品都呈颗粒状,属于非细胞壁物质。视野中的细胞破壁率达到95%以上,其颗粒的平均直径据测量为6~36μm,最大颗粒直径达到100μm以上,绝大多数的颗粒直径均在26μm左右[5]。而原药材的细胞数较多,颗粒数较少。显微镜下视野中的破壁率低于20%,远远低于超微饮片的破壁率。
2.2 薄层色谱分析法
薄层色谱照片显示,超微饮片与原药材在相同位置有相同斑点,可以看出化学成分没有明显的差异。
2.3 盐酸麻黄碱的测定
2.3.1 探究实验组峰值面积值和浓度的关系
在上述试验中,为了探究峰面积值和麻黄碱浓度的关系,分别量取实验组的溶液0.5mL,1.0mL,1.5mL,2.0mL,2.5mL定容到10mL,它们依次是0.00305mg/mL,0.00621mg/mL,0.01312mg/mL,0.02132,mg/mL0.05324mg/mL。在色谱仪的测量下,得出他们的峰面积值分别为:1.1423、2.2134、4.1231、8.4723、17、8352.随着浓度的增加,峰面积不断增大呈正相关,P<0.05,具有统计学意义。结果见表1。
表1 探究实验组峰面积值和浓度的关系
2.3.2 超微饮片与常规饮片盐酸麻黄碱溶出速度比较
由表2可以看出,超微饮片在溶剂水中的溶出量经过10min,15min,20min,25min,30min,35min,35min,40min的结果如下:0.80,1.23,1.64,1.93,2.12,2.31mg。原药材的在相同条件的溶出量是3.12,4.13,4.64,4.98,5.25,5.83mg。在相同时间段内超微饮片的盐酸麻黄碱的溶出量远大于原药材,而且随着时间的增加,原药材溶出速率也稍大于超微饮片,P<0.05,具有统计学意义。结果见表2。
表2 超微饮片与常规饮片盐酸麻黄碱溶出速度比较
近年来,中医越来越受人们的追捧,使得中药的地位大幅提高。中医治病的好坏很大程度上取决于中药饮片的好坏。然而假药也随着中医的盛行日益增多。如何辨别药物真伪、如何使药物有效成分得以充足的利用是当务之急。
本项目应用仲景著名的麻黄桂枝汤,通过三个实验对比,来比较超微饮片和原药材的成分差异。通过细胞壁破壁情况及颗粒直径的测定的数据结果得知,超微饮片的细胞破壁率为95以上,颗粒的直径基本在6~36μm之间,而原材料的破壁率在20%以下,由此得知,超微饮片基本不含有完整的细胞而主要以颗粒为主,而原药材主要以细胞为主颗粒较少;薄层色谱分析实验结果表明,超微饮片和原药材在相同位置上具有相同的斑点,表明二者在化学组成上无明显差异。而盐酸麻黄碱的溶出量实验数据更加证明了,正是由于超微饮片通过破壁处理,使得有效成分得以更好的渗出。
中药超微饮片是现代较新型的中药饮片,它通过超微细胞破壁技术加工,使得药物的有效成分更充分的渗出,具有高效免煎煮、方便储存、干净卫生等诸多特点。而传统中药只通过传统制药技术处理有效成分难以被释放。喝中药往往需要多个疗程,甚至多种处方不同时期的应用,才能达到治愈的目的。这使得患者不得不自己在家里煎煮药方。但是药方的煎煮有很多注意事项,如需用瓷质锅、药物之间的配伍禁忌、药物的先煎后下等等,尤其由于药物大多为树根树皮,煎的时间不好拿捏,导致药物发挥不了药效。而中药超微饮片可以避免诸多缺点,既方便医师应用配伍,又克服了传统中药煎煮复杂的煎煮过程,使得人体可以充分的对药物得以吸收,提高了药物的治疗效果,大大提升了临床使用率。同时也使药物的采集率降低,从而为环保做出了贡献。
通过实验发现,超微饮片药物有效成分溶出量明显超过原料药,因此在临床直接使用超微片时尤其是量效关系明显的药物或剧毒药物时,应合理估算超微饮片与原料药物之间的换算,确保药物使用的安全、有效的基础上做到经济和环保。
[1]李青,董兆稀,赵冰清,等.十种中药超微饮片与传统饮片薄层色谱对比分析[J].湖南师范大学学报,2011,8(2):85-88.
[2]高晓慧,杨瑛,杨永华,等.茯苓超微粉与传统饮片的化学对比研究[J].湖南中医杂志,2008,24(3):93-94.
[3]Xu WY,Tang J, Ji CJ,et al.Application of a TLC chemical method to detection of cyclotides in plants [J].Chin Sci Bull,2008,53(11): 1671-1674.
[4]蔡光先,李勇敏,郑兵,等.中药超微饮片量效关系及安全性初探[J].中国新药杂志,2007,16(9):682-684.
[5]蔡光先,杨永华,李跃辉.超微粉体技术与中药饮片改革[J].世界科学技术中医药现代化,2004,6(2):67-70.
R286
:B
:1671-8194(2013)04-0100-02