明目颗粒质量标准研究

张 昀，刘 路，李 钦

（河南大学 药学院，河南 开封 475004）

明目颗粒剂由赤芍、苍术、化橘红、菟丝子、防风、甘草等十多味中药组成，有疏肝逐瘀、活血明目等功效，经长期临床验证对治疗视网膜黄斑变性有较好的疗效。为了方便临床应用，我们将其开发成便于携带和服用的颗粒剂，并对该药进行质量标准研究，以保证临床用药安全、有效。通过实验研究及参考相关文献［1－5］，我们选择主要有效成分对制剂中苍术、化橘红、防风等味药物进行检识，要求检测方法专属性强、快速、简便、重视性好。选择君药赤芍制定含量测定方法，测定方法必须具有准确反映被测成分的能力，且要求重现性好、简便、快速、稳定。

1 仪器及试药

1.1 仪器

LC－2010A 高效液相色谱仪（日本岛津）；KQ－300VDE超声提取器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110736－200422）；甲醇为色谱纯；液相用水为新鲜重蒸水；其余试剂均为分析纯；样品自制。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 苍术的薄层色谱鉴别 取本品10g，研细，置250mL圆底烧瓶中，加水100mL，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，在提取柱下端预先放置5mL 乙醚，加热回流6h，将乙醚部分取出，挥干乙醚，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。取苍术标准对照药材粉末1g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得的苍术空白颗粒，按供试品的制法制成阴性对照液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60℃～90℃）－乙酸乙酯（20∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数为5%对二甲氨基苯甲醛与体积分数为10%硫酸溶液的混合液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一相同的污绿色主斑点（苍术素）；阴性对照色谱上无干扰。见图1。

2.1.2 化橘红的薄层色谱鉴别 取本品10g，研细，加甲醇20 mL，超声30 min，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液。取化橘红对照药材粉末0.5g，加甲醇10mL，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得的化橘红空白颗粒10g，按供试品的制法制成阴性对照液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一用5g／L氢氧化钠溶液制备的硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯－甲醇－水（100∶17∶13）为展开剂，展开约3cm，取出，晾干，再以甲苯－乙酸乙酯－冰醋酸－水（20∶10∶1.5∶1）的上层溶液为展开剂，展开约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照色谱上无干扰。见图2。

2.1.3 防风的薄层色谱鉴别 取本品15g，研细，加丙酮30mL，超声30min，滤过，滤液浓缩至干，残渣加无水乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。取防风对照药材粉末1g，加丙酮20mL，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得的防风空白颗粒15g，按供试品的制法制成阴性对照液。吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶GF254 薄层板上，以三氯甲烷－甲醇（4∶1.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照色谱上无干扰。见图3。

图1 苍术薄层色谱图

图2 化橘红薄层色谱图

图3 防风薄层色谱图

2.2 赤芍中有效成分芍药苷的含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱：Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：30℃；流动相：甲醇－ 水（23∶77）；检测波长：230nm；流速：1mL／min；进样量：10μL。在此色谱条件下，芍药苷的保留时间约12min，理论塔板数按芍药苷计算均不低于2000。

2.2.2 溶液的制备 ①对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。②供试品溶液的制备：取样品颗粒50g，研细，混匀，精密称取10g，置索氏提取器中，加乙醚50mL，水浴上回流1h，弃去乙醚液，残渣挥干乙醚，用甲醇80mL，超声处理40min提取，用甲醇10mL分2次洗涤残渣，合并甲醇液，浓缩至约15mL，过中性氧化铝柱（中性氧化铝8g装柱），用甲醇40mL 洗脱，收集洗脱液于50 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度即得供试品溶液。③阴性样品溶液的制备：按处方中药味的比例，不含赤芍，按成品工艺制成赤芍空白颗粒，再按供试品溶液的制备方法制成阴性样品对照液。

2.2.3 供试品、对照品、阴性溶液HPLC 图的比较分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液，注入高效液相色谱仪，采用紫外检测器进行检测。根据对照品、供试品、阴性样品的高效液相色谱图，可以看到供试品在芍药苷的保留时间出峰，分离度良好，而阴性样品无干扰。见图4、图5、图6。

图4 芍药苷标准品HPLC色谱图

图5 芍药苷样品HPLC色谱图

图6 芍药苷阴性对照品HPLC色谱图

2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取芍药苷对照品溶液（0.546g／L）2、5、10、15、20μL，注入高效液相色谱仪，按“2.2.1”色谱条件测定峰面积，以峰面积值为纵坐标，以进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝880598 X＋18045，r＝1.0000，结果表明芍药苷在1.092～10.920μg范围内有良好的线性关系。

2.2.5 精密度实验 精密吸取供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，重复进样5次，记录峰面积，结果RSD为1.0%，说明本方法精密度良好。

2.2.6 稳定性实验 精密称取样品10g，制成供试品溶液，12h内每间隔一段时间进样1次，结果RSD为1.4%，表明本法稳定性较好。

2.2.7 重现性实验 精密称取同一批号（061110）的5份样品各10g，制成5 份供试品溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，结果RSD为1.3%，重现性良好。

2.2.8 加样回收率实验 精密称取已知含量的样品（批号061110），分别加入一定量的对照品，制成供试品溶液。精密吸取6份供试品溶液，注入高效液相色谱仪。结果表明，平均加样回收率为97.03%，回收率的RDS为1.2%，说明供试品的制备回收率高，芍药苷在制备过程中损失较少，符合实验要求。

2.2.9 三批样品测定 精密称取样品，按上述方法处理，测定，计算芍药苷的含量。三批样品测定结果分别为2.72mg／g，2.64mg／g，2.61mg／g。

3 讨论

明目颗粒成分多，选用主药苍术、化橘红、防风做定性鉴别，结果斑点清晰，阴性无干扰，专属性强。芍药苷含量测定方法中，经多种比例流动相的反复筛选，选定甲醇－水（23∶77）为流动相，样品中芍药苷的峰形好，与杂质峰分离度好，保留时间合适。现代药理研究表明芍药具有调节免疫力、增加红细胞对低渗张力的抗性，抑制血小板聚集，抗凝，抗血栓，抗动脉粥样硬化，扩张血管等作用，芍药苷等单萜类化合物是这些生理活性的主要物质基础。

［1］桂蜀华，陈军，王林，等.HPLC法同时测定银翘柴桂颗粒中绿原酸、芍药苷和黄芩苷［J］.中成药，2011，33（7）：1175－1178.

［2］张小帆，王培娜，王文琳.高效液相色谱法测定不同产地丹参中丹参酮ⅡA的含量［J］.河南大学学报：医学版，2003，22（1）：38.

［3］于开红.视舒茶的质量控制［J］.现代中药研究与实践，2012，26（1）：64－66.

［4］冯川，刘唯芬，慕善学，等.RP－HPLC法测定清胰利胆颗粒中绿原酸和芍药苷的含量［J］.沈阳药科大学学报，2012，29（3）：219－222.

［5］弓晓东，谈瑄忠，毛春芹，等.芍红消积颗粒的质量标准研究［J］.中国药房，2012，23（3）：250－252.