柴胡醋制前后抗炎作用比较研究

王丽娜， 汪 巍， 徐 驰， 许 枏，贾天柱

（辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600）

柴胡醋制前后抗炎作用比较研究

王丽娜， 汪 巍， 徐 驰， 许 枏，贾天柱*

（辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600）

目的 比较柴胡与醋柴胡抗炎作用的差异。方法 采用角叉菜胶致大鼠足跖肿胀法、二甲苯致大鼠耳肿胀和毛细血管通透性增加、棉球致大鼠肉芽增生法，及炎性介质前列腺素E2（PGE2）的量，观察比较柴胡和醋柴胡的抗炎作用。结果 生柴胡对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀，棉球引起的肉芽增生，二甲苯所致大鼠耳肿胀和毛细血管通透性增加均有拮抗作用 （P＜0.05），醋柴胡对二甲苯所致大鼠耳肿胀有拮抗作用 （P＜0.05）。生柴胡与醋柴胡抗炎作用有差异 （P＜0.05）。结论 以肿胀和渗出为指标，生柴胡抗炎作用优于醋柴胡。

柴胡；醋柴胡；炮制；抗炎

柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根，按性状不同，分别习称“北柴胡”及“南柴胡”。性味辛、苦，微寒，归肝、胆、肺经。具有疏散退热，疏肝解郁，升举阳气之功，临床用于感冒发热，寒热往来，胸胁胀痛，月经不调，子宫脱垂，脱肛等［1］。

柴胡主要含有柴胡皂苷 （Saikosaponins）、挥发油、α-菠菜甾醇、多糖等。根据化学结构不同，柴胡皂苷又分为柴胡皂苷a、b、c和d等，柴胡皂苷元有 F、E、G等［2］。柴胡皂苷和挥发油均有显著的抗炎作用。其中柴胡皂苷对许多炎症过程包括渗出、毛细血管通透性、炎症介质释放、白细胞游走和结缔组织增生等都有影响［3］。柴胡传统炮制方法有：醋柴胡、鳖血柴胡、酒柴胡、蜜炙柴胡，《中国药典》目前只收载醋柴胡。柴胡醋制后，柴胡皂苷d等多种成分含量降低，但柴胡醋制前后抗炎作用和机制差异研究报道较少。

为考察醋制前后柴胡抗炎作用及其机制差异，本实验选用急性炎症和亚急性炎症动物模型，分别以肿胀抑制率和血管通透性、炎性介质等为评价指标，考察柴胡醋制前后对抗炎作用的影响，为临床合理应用柴胡提供参考。

1 材料和方法

1.1 药物和试剂 柴胡饮片购于辽宁正大祥和药业集团有限公司，批号201105245，产地辽宁；醋柴胡为生柴胡加入定量米醋 （每100 kg用米醋20 kg）拌匀，稍焖润，待醋被吸尽后，置炒制容器内，用文火加热，炒干，取出晾冷。

样品：分别将生柴胡、醋柴胡水煎煮后浓缩至每1 mL折合生药1 g，备用；阿司匹林：拜耳医药保健有限公司，批号BJ04066。

角叉菜胶、伊文思蓝、PGE2ELISA试剂盒购于上海科兴商贸有限公司。

1.2 仪器 日立U-3010紫外-可见分光光度计

1.3 动物 SD成年大鼠40只，雄性，体质量 （160±20）g，由大连医科大学实验动物中心提供，清洁级 （CL）。按体质量随机分为4组，每组10只，分别为生柴胡组、醋柴胡组；空白对照组；阳性对照组 （阿司匹林）。各给药组和阳性对照组分别灌胃给予相应药物 ［5 g/（kg·d）］，空白对照组给同体积生理盐水，连续7 d。

1.3 实验方法

1.3.1 大鼠棉球肉芽肿形成实验［4］取各组动物。实验时首先将大鼠腹腔注射20%乌拉坦溶液0.3 mL/100 g麻醉，然后在各鼠的腋窝用碘酒消毒，75%酒精脱碘后，各切开1 cm长之小口，将已称定质量为20 mg的灭菌棉球，经高压灭菌，每个棉球加上青霉素溶液1 mg/0.1 mL，50℃烘干后，用眼科镊子从小切口处植入腋窝皮下，随即缝合皮肤。连续给药7 d后处死大鼠，打开原切口，剥离并取出棉球肉芽组织。于60℃烘箱中干燥1 h后称定质量，将称得质量减去棉球原质量即得肉芽肿的质量。比较各组肉芽肿质量。

1.3.2 角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及组织中炎症递质的影响实验［5］取各组动物，采用容积测量法。实验前先测量每鼠正常足跖容积，末次给药30 min后将大鼠右后肢拉直，自足跖中部皮下注射1%角叉菜胶0.1 mL/爪致炎。分别于

在致炎后6 h，眼眶取血并处死大鼠。自踝关节下剪下致炎足，称质量，划破足跖部皮肤投入有2.5 mL生理盐水的离心管中，浸泡并不停地振摇，2 h后弃足，将浸泡液和血于3 000 r/min离心15 min。各取上清液 0.15 mL，加入0.5 mol/L的KOH甲醇2 mL。于50℃下温育。20 min后每管加入2.5 mL甲醇。于278 nm波长下比色，以每克炎性组织相当的吸光度 （A）表示前列腺素E2（PGE2）的量。

1.3.3 二甲苯致大鼠耳肿胀实验［6］取各组动物，在

1.3.2 项实验致炎4 h后再次灌胃给药，30 min后在大鼠左耳前后两面涂抹二甲苯0.2 mL，1 h后将大鼠处死，剪下左右两耳片，用7 mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，用电子天平称两耳质量，用每只鼠的左耳质量减去右耳片质量，即为耳肿胀度。比较各组的耳片肿胀度。致炎后0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h测定其足跖容积，观察给药前后各鼠足趾容积的变化 （即肿胀度），比较各组差异。

1.3.4 大鼠毛细血管通透性实验［6］1.3.3项实验大鼠在耳部涂抹二甲苯后立即静脉注射1%的伊文思蓝5 mL/kg。待测定耳肿胀度后将左耳切碎，放入水-丙酮溶液 （3∶7）内浸泡48 h后，离心，上清液于721分光光度计610 nm下测吸光度，比较给药组与对照组着色程度的差异。结果见表2。

2 实验结果与分析

2.1 实验结果 见表1，表2，图1。

表1 柴胡、醋柴胡对大鼠棉球肉芽及耳肿胀的影响（±s）

表1 柴胡、醋柴胡对大鼠棉球肉芽及耳肿胀的影响（±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05；与生柴胡组比较，ΔP＜0.05。

组 别 动物数/只 肉芽质量/mg 耳肿胀度/mg对照组10 15.7±39.82 13.6±4.8生柴胡组 10 86.4±26.10* 10.0±5.7*醋柴胡组 10 94.7±29.87 12.9±4.7Δ阳性对照组 10 85.6±37.77* 7.2±6.1*

表2 柴胡、醋柴胡对角叉菜致大鼠足拓肿胀的影响（±s）

表2 柴胡、醋柴胡对角叉菜致大鼠足拓肿胀的影响（±s）

注：与模型组比较，*P＜0.05；与生柴胡组比较，△P＜0.05。

组 别0.5 h 2 h 4 h 6 h肿胀率/% 抵制率/% 肿胀率/% 抵制率/% 肿胀率/% 抵制率/% 肿胀率/% 抵制率/%对照组26.95±4.1 － 17.2±2.0 － 16.7±4.3 － 15.0±3.1 －生柴胡组 19.15±2.2 28.9 7.6±2.9* 55.8 4.85±3.3* 70.9 5.65±2.9* 62.3醋柴胡组 17.45±3.4 35.2 16.58±6.5Δ 3.6 12.97±3.9Δ 22.3 13.34±3.2Δ 11.1阳性对照组 14.6±4.5* 45.8 8.2±4.5* 52.3 6.77±2.3* 59.5 5.98±2.1*60.1

图1 柴胡、醋柴胡对大鼠毛细血管通透性及组织中炎症递质的影响

2.2 结果分析

2.2.1 角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及组织中炎症递质的影响实验 结果表明，大鼠致炎后足跖肿胀差别有统计学意义（P＜0.01），说明造模成功。生柴胡组与阳性对照组比较，足跖肿胀度有显著性差异 （P＜0.05），且抑制率＞30%，说明生柴胡可对抗角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀。醋柴胡组与模型组比较无显著改善。结果提示，生柴胡具有明显的抗炎作用，且抗炎作用持久，效果优于醋柴胡。生柴胡组与空白组比较PGE2量均降低，有显著性差异，结果提示生柴胡有较好的抑制炎性组织中PGE2的渗出。

2.2.2 大鼠棉球肉芽肿形成实验 结果表明，生柴胡组与阳性对照组比较，肉芽质量有显著性差异 （P＜0.05），说明生柴胡对棉球引起的肉芽肿有拮抗作用。醋柴胡与模型组比较无显著作用。结果提示，生柴胡具有拮抗亚急性炎症作用，且作用优于醋柴胡。

2.2.3 二甲苯致大鼠耳肿胀实验 结果表明，造模后左耳肿胀度明显增加，左右耳差别有统计学意义 （P＜0.01），说明造模成功。生柴胡组与模型组比较，耳肿胀度明显降低 （P＜0.05），说明生柴胡可对抗二甲苯所致大鼠耳肿胀。生柴胡组与醋柴胡组比较，耳肿胀度有明显差异 （P＜0.05），提示，生柴胡抗炎效果优于醋柴胡。

2.2.4 大鼠毛细血管通透性实验 结果表明，生柴胡组与阳性对照组比较，毛细血管通透性有显著性差异 （P＜0.05），说明生柴胡对二甲苯所致毛细血管通透性增加有拮抗作用。醋柴胡与模型组比较无显著性差异。结果提示，生柴胡具有抗炎作用，且作用优于醋柴胡。

3 讨论

柴胡为解表药，现代药理研究表明解表药主要具有解热发汗、抗炎镇痛等作用。而柴胡主要有效成分柴胡皂苷具有明显抗炎活性 （既有直接的抗炎作用，又有间接地通过肾上腺皮质产生抗炎作用［7］），且醋制后柴胡皂苷成分有明显变化，如柴胡醋制后柴胡皂苷a、d、挥发油、多糖等成分量降低［8-9］，而浸出物、柴胡皂苷b1、b2等成分的量增加［10］；挥发油组成发生变化［11］，部分成分转化，引起相应的药效学变化［12-15］；总皂苷的量都有所下降，柴胡皂苷b2的量从10.7%～78.2%都有不同程度的提高，柴胡皂苷a+c+d的量略有下降［16］，醋制品中柴胡皂苷 a、d的量低于生品，同时其相对应降解产物柴胡皂苷b1、b2的量高于生品［10］。因此以抗炎作用研究柴胡醋制前后药效变化，不仅可以揭示柴胡醋制前后抗炎作用变化，而且也可为炮制前后成分变化与药效作用的关联性研究提供依据。实验所用的药物为柴胡煎剂的浓缩液，与临床传统用药方法一致，且柴胡皂苷溶出率较高。

前列腺素作为一类重要的炎性介质，在炎症的全过程中都存在PGs的合成与释放，前列腺素E2（PGE2）不仅能增强组胺和缓激肽的作用，提高血管通透性，而且还有很强的扩张血管和致热，致痛的作用。根据本实验的结果，柴胡能够抑制角叉菜胶、二甲苯致炎后引起的局部肿胀，降低角叉菜胶致炎后血清及炎性部位的PGE2的量，对二甲苯所致毛细血管通透性增加有拮抗作用，提示柴胡抗炎作用可能与抑制前列腺素合成有关。而棉球肉芽肿模型为亚急性炎症模型，与临床上某些炎症的后期病理改变相似，本实验结果提示，生柴胡可抑制棉球引起炎症及结缔组织的增生。本实验采用3种不同机制的炎症模型，可以为多角度研究生、醋柴胡抗炎作用差异提供依据。生柴胡对急性炎症和亚急性炎症均有较好的抑制作用，醋柴胡与生柴胡相比抗炎作用较弱，虽对各炎症模型有一定缓解，但经统计学统计无显著作用，提示醋制后柴胡抗炎作用降低，这与传统炮制理论认为柴胡“入解表药生用”、 “外感生用”等相符，药效的改变可能与醋制后柴胡皂苷转化有关。

柴胡传统炮制方法有醋柴胡、鳖血柴胡、酒柴胡、蜜炙柴胡，《中国药典》目前只收载醋柴胡。醋柴胡重养肝柔肝，可以缓和升散之性，降低解表退热作用，取其引药入肝和养肝柔肝之功，并可增强疏肝止痛作用，多用于肝郁气滞的胁痛、腹痛及月经不调等症，如肝气郁结用柴胡疏肝散（《景岳全书》），肝郁血虚、月经不调用逍遥散（《处方集》）等。现代临床上运用醋柴胡治疗慢性肝炎、慢性胃炎、胆汁反流性胃炎、痛经崩漏、焦虑抑郁等［17-23］肝郁病症均有很好疗效。本实验结果也提示，从解表作用来看，醋柴胡作用不及生柴胡，本实验组将另文发表关于生醋柴胡疏肝解郁等作用的比较研究。

现今中药研究已从“整体-器官-细胞”水平发展到在分子、细胞水平探讨中药的作用机制。然而，中药抗炎作用的分子机制十分复杂，往往是通过多途径、多环节发挥作用的。因此本实验仅作为基础，今后将从更多的抗炎途径和环节对柴胡进行深入研究，解析柴胡解表作用机制的同时解析柴胡炮制原理。

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R285.5

B

1001-1528（2013）05-1079-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2013.05.054

2012-11-13

国家中医药管理局中医药行业科研专项项目 （201107007）

王丽娜 （1979—），女，讲师，研究方向：中药炮制与中药化学。Tel：（0411）87586014

*通信作者：贾天柱 （1951—），男，教授，研究方向：中药炮制工艺与原理解析研究。Tel：（0411）87586329