磁珠法提取粪便检材DNA

刘 莉 ，王卫华，唐剑锋，张清波

（1.烟台市公安局刑侦支队，山东 烟台 264000；2.烟台市公安局芝罘公安分局刑警大队，山东 烟台 264000）

疑难生物检材的发现、提取和检验越来越多地应用到了各类刑事案件的侦破中，并发挥了良好的作用。现场粪便检材因其中含有的抑制物种类繁多并且不易去除，检验成功率不高。本研究采用磁珠分离试剂盒（sbeadex®forensic kit）提取粪便检材，有效去除抑制因子，并高效回收高纯度DNA，提高此类检材的检验成功率，现报道如下。

1 材料与方法

5份粪便检材和3份粪便擦拭物（载体为卫生纸）分别来自本公安局实验室2010年以来受理的案件。剪取黄豆粒大小粪便检材、约1cm×2cm大小粪便擦拭物分别放入1.5 mL离心管中。分别采用磁珠分离试剂盒（sbeadex®forensic kit，烟台澳斯邦公司）和Chelex法，提取以上检材的基因组DNA。采用 Identifiler试剂盒（美国AB公司）在9700型扩增仪（美国AB公司）上进行复合扩增，扩增产物用3130XL遗传分析仪（美国AB公司）进行检测，使用GeneMapper ID v3.2软件进行基因分型。

2 结果与讨论

采用Chelex法提取的8份检材均未检出STR基因型。采用磁珠分离试剂盒提取的检材中有3份粪便检材和3份粪便擦拭检材均得到了完整的STR基因分型结果（图1），2份粪便检材未检出基因型。

图1 磁珠法提取粪便检材的STR分型结果

粪便检材所含成分复杂，含有大量的抑制因子，采用常规提取方法不易去除，往往导致扩增失败。磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异性地吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间后，在磁场作用下，使磁性颗粒与液体分开，回收颗粒（即磁珠-DNA混合物），再用洗脱液洗脱即可以得到高质量的DNA，而高质量的DNA避免了扩增抑制剂的存在，保证了下一步扩增环节顺利进行。

本研究采用的磁珠分离试剂盒中80%以上的磁珠颗粒直径在0.5～10μm、质量浓度0.3～0.35g/mL、每克磁珠颗粒最多能吸附2mg DNA，使得磁珠粒子在悬浮液状态时，沉降速度变慢，能够最大程度与液体中的DNA相结合，并且磁珠面积较大可以结合更多的核酸，使DNA结合的量最大化。此外，在粪便检材的选择上首选粪便擦拭物，一方面因粪便的量减少而抑制物的含量也随之减少，另一方面擦拭物上存在与皮肤接触时遗留的DNA成分，更易于得到高质量的DNA。