射频消融术对原发性肝癌患者甲胎蛋白和外周血CD4 + CD25 + Foxp3 + Treg 细胞的影响

崇杨，江涛，张冬华，王兵济，王轩*

(1.南京中医药大学第一临床医学院，江苏 南京210023;2.解放军第81 医院肿瘤外科，江苏 南京210002)

射频消融术(radiofrequency ablation，RFA)是近年发展起来的一种治疗肝癌的新兴手段，具有微创、痛苦少、治疗确切、耗时短、并发症少、可重复治疗等优点，日益受到临床的重视［1]。RFA 为位置深在的较小病灶或肝功能差无法耐受手术的患者提供了可靠的治疗手段。众所周知，在肝癌的治疗中，机体免疫功能尤其是细胞免疫功能对预后起到重要的作用。Forkhead 家族叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)组成性表达CD4+CD25+调节性T 细胞，是真正意义上的调节性T 淋巴细胞，对机体免疫起着决定性的作用［2]。研究表明Treg 细胞在肿瘤患者外周血和肿瘤组织中升高［3]，而且比例越高，肿瘤患者的预后越差［4]。本文拟观察RFA 治疗前后原发性肝癌患者CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞的变化，探讨其用于判断肝癌预后的临床价值。

1 对象与方法

1.1 病例

选择2011年6月至2012年6月期间在我科行经皮肝穿刺RFA 治疗的58例原发性肝癌患者，其中男40例，女18例。年龄38 ～79 岁，中位年龄(57.5 ± 6.5)岁。肝癌病灶1 ～3 枚，病灶直径2 ～5 cm，平均3.2 cm。所有患者均按2011年版原发性肝癌诊断标准［5]临床诊断为原发性肝癌或行肝穿活检病理学明确诊断。

1.2 治疗设备

多电极射频消融系统(S-1500 射频治疗仪，上海迈德医疗科技公司)，主频460 kHz，输出功率1 ～90 W 连续可调，术中阻抗变化和组织凝固性坏死程度由主机自动测试完成。配套使用该公司的VITA(10-161361)型多电极射频针，穿刺后可呈伞状均匀张开10 枚电极，展开最大直径为4.0 cm。若病灶较大者按重叠消融原理多次反复穿刺消融以最大限度灭活病灶。

1.3 检测方法

于术前、术后1月分别抽血送检，采用流式细胞计数仪(XL/XL-MCL，美国贝克曼公司)检测CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值及CD4+/CD8+比值。采用全自动化学发光免疫分析仪(ACCESS，美国贝克曼公司)检测甲胎蛋白含量。术后1月随访，行彩超、超声造影、CT、MRI 等检查明确有无肝内、肝外复发、转移。

1.4 疗效标准

均按卫生部办公厅公布的《肿瘤射频消融治疗技术管理规范》疗效标准评价:射频消融后1 个月左右，采用对比增强CT/MRI 或超声造影判定肿瘤是否被完全消融。获得完全消融的病灶表现为完全无血供即影像学表现为无增强。

1.5 统计学方法

所有检测结果以均数±标准差(±s)表示，应用SPSS 13.0 统计软件包进行统计学分析。两个独立样本间采用Wilcoxon 检验，术前术后两样本间采用配对t检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 疗效

本组所有患者经过射频消融治疗后无死亡病例，无射频消融相关手术并发症，均于术后1月正常随访和完成检查、检验，无失访。这58例患者中术前甲胎蛋白正常者4例，甲胎蛋白值10 ～400μg/L者30例，甲胎蛋白值＞400 μg/L 者24例。术后复查所有病灶完全消融者39例，不完全消融者5例，发现新病灶者8例。术后1月甲胎蛋白恢复正常者38例，甲胎蛋白部分降低但未达到正常范围者16例，未降低反而增高者4例。

2.2 术前甲胎蛋白与CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞的关系

如果将术前甲胎蛋白值按800 μg/L 进行分组来观察CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值及CD4+/CD8+比值两项细胞免疫指标，我们发现 甲胎蛋白明显升高组的患者CD4+/CD8+比值显著降低，CD4+CD25+Foxp3+Treg 明显增高，两指标在两组间差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 术前甲胎蛋白与CD4 +CD25 +Foxp3 + /CD4 +变化

2.3 RFA 后甲胎蛋白恢复正常患者CD4+CD25+Foxp3+ /CD4+的变化

术后1月甲胎蛋白恢复正常的38例外周血中CD4+/CD8+比值未见明显变化，但射频消融后CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值明显下降，差异有统计学意义(P＜0.01)。见表2。

表2 甲胎蛋白恢复正常患者中CD4 +CD25 +Foxp3 + /CD4 +的变化

2.4 甲胎蛋白部分降低但未达到正常范围患者CD4+CD25+Foxp3+ /CD4+的变化

本组射频消融术后有16例患者甲胎蛋白有所下降，但未达正常水平。这部分病例CD4+/CD8+比值在射频前后变化不明显，但CD4+CD25+Foxp3+/CD4+在射频消融后明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

2.5 术后甲胎蛋白增高患者CD4+CD25+Foxp3+ /CD4+的变化

有4例患者术后甲胎蛋白不降反增，其CD4+CD25+Foxp3+/CD4+及CD4+/CD8+均变化不明显。见表4。

表3 甲胎蛋白部分降低但未达到正常范围患者CD4 +CD25 +Foxp3 + /CD4 +在射频前后的变化

3 讨论

目前常规治疗原发性肝癌的方法如手术切除、肝动脉插管化疗栓塞术对机体的免疫功能干扰大，手术后早期出现明显的免疫抑制，可促进肿瘤细胞的生长，增加了肿瘤的转移和复发率［6]，对肝癌患者不利。射频消融治疗原发性肝癌的疗效已得到临床上的肯定，有文献认为有增强细胞免疫功能的作用［7]。

CD4+细胞为辅助性T 细胞，帮助完成抗肿瘤免疫，在协同清除、消灭肿瘤细胞方面有重要作用，CD4+细胞减少可使肿瘤发生免疫逃逸，CD8+细胞增多往往引起细胞免疫功能损害，我们常通过CD4+/CD8+比值来反映细胞免疫功能［8]。肿瘤患者的细胞免疫缺陷与肿瘤的发生、发展及预后密切相关［9]，本研究结果中我们发现甲胎蛋白显著升高组的患者CD4+/CD8+比值异常增高，也同样反映了这个问题。但我们发现CD4+/CD8+比值在消融术后短期内未见明显变化，因此无法作为即时反映免疫功能变化的参考指标。

Sakaguchi 等［10]首次定义CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞的概念后，越来越多证据表明CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞是具有免疫抑制作用的真正意义上的Treg 细胞，Foxp3 在Treg 细胞发育和发挥功能的过程中起决定作用。于荣等［11]的研究表明CD4+CD25+Foxp3+Treg 可在有效治疗后明显下降，并建议将其作为评估疗效的重要预测指标之一。本研究检测了射频消融术前术后CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值的变化，结果显示RFA 治疗后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞出现显著变化，在术后甲胎蛋白恢复正常的患者中CD4+CD25+Foxp3+Treg 在射频治疗后1月迅速下降，提示RFA后细胞免疫功能得以恢复或者是抗肿瘤免疫的增强，因此我们认为射频消融可通过免疫途径对机体产生积极影响。

综上所述，本研究提示CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在射频消融治疗前后的变化与甲胎蛋白存在相关性，对肝癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞水平的监测，不但有利于了解患者的免疫状态，对肝癌的预后评估也具有重要的意义。因本研究例数较少，CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞的水平变化能否成为一种预后预测指标，需要今后作进一步的研究。

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［11]于荣，候建青.紫杉醇联合铂类化疗对晚期卵巢上皮细胞癌患者CD4+CD25+Foxp3+细胞的影响及意义［J].滨州医学院学报，2012，35(4):248-250.