陈武
摘 要:目的:研究甘松挥发油的体外抑菌活性。方法:以水蒸气蒸馏法对甘松挥发油进行提取,采用滤纸片法对其进行体外抑菌活性实验。结果:甘松挥发油对白色念珠菌和沙门氏杆菌有一定抑菌作用,但对枯草杆菌的抑菌效果不明顯。
关键词:甘松;挥发油;抑菌活性甘松 Nardostachys chinensis Batal.系败酱科甘松属植物甘松的干燥根及根茎。甘松属植物全世界仅有3种,我国2种,分别为甘松Nardostachys chinensis Batal.及匙叶甘松N·jatamansi DC[1]。本论文主要对其挥发油进行体外抑菌活性研究,为甘松的进一步开发利用提供依据,现将结果总结如下。
1 实验材料
1.1 药品与试剂
药材:甘松N.chinensis Batal.购自通化市医药公司,经鉴定为败酱科甘松属植物甘松的干燥根及根茎。
菌株:白色念珠菌(Candida albicans)、沙门氏杆菌(Salmonella)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为实验室存留样本。
培养基:成分为牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g、蒸馏水1000mL。
实验试剂:二甲基亚砜(DMSO);95%乙醇(长春化学试剂厂);对照品:水杨酸(购于广州市医药工业研究所)。
1.2 实验仪器
立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-50S11 上海博讯实业有限公司医疗设备厂;FA-1604A电子分析天平 日本岛津公司;
KQ-100E型超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司;
净化工作台 上海新苗医疗器械有限;
ZNHW-Ⅱ型智能恒温电热套 郑州长城科工贸有限公司;
SPX-150B-Z型生化培养箱 上海博讯实业有限公司医疗设备厂;
微量定量移液器 上海狄士医疗器械有限公司;
酒精灯;1000mL锥形瓶;培养皿若干;试管若干等。
2 方法与结果
2.1 甘松挥发油提取
采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,将甘松粉碎后,用挥发油提取器按常规水蒸气蒸馏法提取挥发油,经无水硫酸钠干燥后得挥发油,淡黄绿色,具有特殊嗅味。
2.2 不同浓度挥发油的配制
用DMSO溶解,配制浓度分别为50%(用微量定量移液器分别取DMSO 5μL和挥发油5μL混匀)、25%(用微量定量移液器分别取DMSO 15μL和挥发油5μL混匀)、20%(用微量定量移液器分别取DMSO 20μL和挥发油5μL混匀)。
2.3 滤纸片的制备
将普通定性滤纸用打孔机打成若干圆形纸片,直径为5.0mm,置于干燥洁净的培养皿内,放入立式压力蒸汽灭菌锅中经121.3℃、20min高压灭菌后,取出放入恒温干燥箱内进行干燥。在无菌操作条件下,取干燥后的纸片一定数量,放入甘挥发油不同浓度溶液中,浸润后备用。
2.4 培养基的制备
用电子天平称取培养基各成分于容量为1000mL的烧杯中,并加蒸馏水1000mL于此烧杯中,将此烧杯放在电炉上加热,并不断搅拌使之完全溶解,1mol·L-1的氢氧化钠溶液调节pH7.0~7.5,将溶解的培养基平均倒入3个1000mL锥形瓶,用报纸包扎好,然后放入立式压力蒸汽灭菌锅中经121.3℃、20min高压灭菌。
2.5 菌株的培养
在无菌操作条件下,用接种环取沙门氏菌菌株一环,用划线法接种在制作好的平板和固体斜面培养基中,然后用不同接种环分别以同样方法对枯草芽孢杆菌、白色念珠菌进行接种。把各菌种植于37℃恒温培养箱中进行培养24h,24h后取出放入4℃环境保存备用。
2.6 体外抑菌实验
分别取上述菌株的新鲜培养物,在无菌操作条件下,用接种环分别取不同的菌种置于三个装有无菌蒸馏水的试管中,制成三种菌悬液,再用微量定量移液器接种菌种于平板培养基上,分别用不同涂布棒均匀涂布接种过不同菌种的平板培养基,再用无菌镊子,将浸润在不同浓度药液中的纸片均匀间隔贴于各平板培养基表面,轻压纸片使之接触良好,放入37℃恒温培养箱中,培养24h后取出,观察抑菌圈大小,测量并记录结果,结果见表1。判定标准:抑菌圈直径小于9mm为低度敏感;9.1~11mm为中度敏感;11.1~15mm为高度敏感。
2.7 结果
三 结论
抑菌试验结果表明:甘松挥发油的抑菌作用弱于对照品水杨酸,对白色念珠菌有明显的抑菌作用,最大抑菌圈的样品浓度为50%,并且对白色念珠菌的抑菌活性随浓度的降低而减弱,而对沙门氏杆菌有一定的抑菌活性,最大抑菌圈的样品浓度为50%,但对枯草芽孢杆菌无明显抑菌效果。
[参考文献]
[1]张毅,徐丽珍,杨世林.甘松化学成分的研究[J].中草药,2006,37:181-183.
[2]中国药典[S].一部.2010:58.
[3]张毅,徐丽珍,杨世林.甘松化学成分的研究(Ⅱ)[J].中草药,2007,38(6): 823-825.