调节性T淋巴细胞在肾细胞癌患者中的应用

张朝华 黄研

【摘 要】调节性T细胞 （regulatory T cells，Treg）是一群通过细胞间接触和产生抑制性细胞因子发挥免疫抑制作用，以调节自身T细胞为主要功能的T细胞亚群。诸多研究表明许多肿瘤的发生均和免疫低下有关。国外已在肺癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌等肿瘤患者全身以及肿瘤微环境进行了大量研究。检测Treg细胞的数量较正常人群居多。国内也研究发现了肾癌患者调节性T细胞的预后较差，但是这类病人使用免疫治疗有效率显著高于百分率水平低的和正常的患者，所以调节性T细胞的研究在临床上有着较大的临床价值和空间。

【关键词】调节性T细胞；肾癌患者；应用

T淋巴细胞参与机体的抗肿瘤免疫应答作用，它的亚群的数量是反映机体免疫功能的重要指标。调节性T细胞 （regulatory T cells，Treg）是一群通过细胞间接触和产生抑制性细胞因子而发挥免疫抑制作用，以调节自身得T细胞为主要功能的T细胞亚群。在众多癌症患者中，许多由自身T细胞识别的肿瘤相关抗原已被证实是正常的自体成分，而不是突变基因的产物。因此，肿瘤免疫从某种意义上来说也是一种自身免疫。诸多研究表明，在恶性肿瘤的治疗中免疫因素的作用日益明显，利用免疫治疗有利于患者免疫功能的恢复，增强机体的抗肿瘤能力，减少肿瘤的复发，从而提高患者生存率。

肾细胞癌是肾内最常见的恶性肿瘤，发病率占全世界恶性肿瘤2%，每年死亡超过10万人。肾癌的发病率从1950年至今增加126%，年死亡率增加37%。由于新的影像学诊断技术的提高，50%为偶发癌，尽管这些偶发瘤一般局限在肾内，但50%左右的患者最终发展为全身疾病。肾癌对化疗和放疗均不敏感，而有转移的肾癌愈后更差，放、化疗反应率仅2%～6%，这与肾癌的生物学特性和多重耐药有关。研究表明，免疫因素在肾癌自然消除中起非常重要的作用。而细胞因子已被证明在免疫调节中有特殊作用，外周单核细胞受激活后可以产生的α-干扰素，在免疫反应的启动中有重要作用，若它受到抑制，α-干扰素及IL-2水平均会下降， 而后两者在机体抗肿瘤的防御机制中是非常重要的。肾癌患者的干扰素水平均有不同程度的下降，补充这一类细胞因子使之在体内维持较高水准，对肿瘤的治疗有这非常重要的意义。研究发现，以α-干扰素和IL-2为基础联合应用5-FU治疗有转移的肾癌可明显提高病人生存率，但增加5-FU的用量并不能增加患者的生存时间。目前对转移肾癌使用以细胞因子为基础的免疫治疗反应率15%，完全反映率5%，可明显提高病人的生存率。因此探讨肾癌免疫治疗的具体机制，寻找未来的潜在治疗靶点，对肾癌的综合治疗具有重要临床意义。

自身反应性T细胞与机体保护性机制建立平衡，形成自身耐受，当机体调控出现一点偏差，自身耐受平衡就会被打破，会导致自身免疫失衡。所以Treg细胞对自身免疫性疾病、肿瘤免疫以及移植耐受起着重要的作用。Treg细胞在肿瘤免疫中的研究是目前的热点，已在肺癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌等肿瘤患者全身以及肿瘤微环境进行了大量研究。Sasada等[1]对149例胃癌患者及7例出现腹膜转移的胃癌患者外周血中检测Treg细胞的数量以及表型，并且与健康志愿者相比，胃癌患者外周血存在较高水平的Treg细胞，有腹膜转移者 Treg细胞比例最高， 结论Treg细胞的数量与肿瘤预后密切相关，其数量越高，患者预后越差。Ormandy等[2]也发现肝癌患者外周血以及肿瘤微环境中Treg细胞数量较正常人明显增高，而且病毒肝炎感染患者外周血中活动期Treg细胞较恢復期明显增高。这种Treg细胞改变了机体对于肿瘤细胞的免疫监视，此理论可以部分解释机体对肿瘤抗原反应性弱的原因。

大量研究表明，肿瘤患者常处于免疫功能低下的状态，肿瘤细胞可以产生逃避抗肿瘤免疫反应的机制。正常T细胞中包含Treg细胞，可控制外周自身免疫反应，导致对肿瘤的免疫耐受。Treg介导的免疫反应和肿瘤生长密切相关。近些年来的实验证据表明，机体主要通过 Treg细胞以“主动”的方式维持自身免疫耐受。小鼠肿瘤模型揭示Treg细胞能抑制肿瘤免疫反应[3]，Hall等[4]发现在无应答性小鼠体内，直接去除Treg可以引起有效的抗同源肿瘤免疫反应"。给予抗CD25单克隆抗体可引起有效的抗同源肿瘤细胞的特异性免疫反应。去除或减少Treg细数量可以诱导肿瘤免疫，从而产生抗肿瘤免疫反应，抑制肿瘤生长或减少肿瘤的发生[5]。由此可见，在体内或体外去除Treg可以消除对固有肿瘤的免疫无应答性，引起肿瘤特异性和非特异性效应细胞自然发育，这种新的激活抗肿瘤免疫的途径可能有助于设计有效的抗肿瘤治疗方案。

目前国内外的大量研究表明Treg细胞在肿瘤免疫方面有着广泛的应用前景。体外去除非肿瘤易感性小鼠脾细胞悬液中Treg细胞可引起肿瘤效应细胞如CD8+CTL、NK、LAK细胞等分化发育，共同激发有效的肿瘤免疫，而无需抗原刺激起作用，结合了APC自身抗原肽/MHC复合物的Treg还可有效增殖，这种CD4+自身反应性T细胞能产生大量IL-2，从而引起大量效应细胞的产生[6]。研究还发现，使用已克隆出的CD8-GITRL可下调Treg的抑制作用[7]。Treg通过细胞接触方式发挥抑制CD8+细胞的作用，并在转录水平抑制穿孔素、颗粒酶B及γ-干扰素的分泌，使CD8+T细胞出现对外界刺激的低反应性[8]。因此不能杀灭肿瘤细胞。最近研究表明在体内Treg细胞通过TGF-β信号来抑制CD8+T细胞的增殖和细胞毒性来抑制肿瘤免疫[9]。因此通过免疫治疗恢复患者正常免疫反应促进细胞因子产生有助于诱导CD8+T细胞溶解靶细胞的功能。

国内曾经有人通过流式细胞术与免疫组化的方法研究了外周血及肿瘤组织内Treg细胞百分率的变化对肾癌IL-2、INF-α联合5-FU抗肿瘤免疫治疗临床疗效的影响[10]。通过研究患者的术后生存率和无复发生存时间来评价。结果为外周血Treg细胞百分率水平高的患者免疫治疗有效率显著高于百分率水平低的和正常的患者。得出结论外周血Treg细胞百分率水平高的患者对IL-2、INF-α联合5-FU抗肿瘤免疫治疗的疗效显著优于Treg细胞百分率水平低和正常的患者。所以说，外周血Treg细胞百分率水平可能作为肾癌抗肿瘤免疫治疗临床疗效的预测指标之一。

国内有人在明确了Treg细胞在肾癌外周血及肿瘤组织中的百分率的基础上，并且进一步研究了Treg细胞与肾癌患者的预后的关系[11]。结果显示，肾癌患者总生存时间和无复发生存时间与外周血中Treg细胞的百分率显著相关，Treg细胞百分率水平较高者，其术后复发时间较早，总生存时间也较短，说明了患者的外周血中Treg细胞水平可能作为提示肾癌患者预后的指标之一。

总之 肾癌与Treg细胞的关系，已经在国内得到了重视和研究，相信将来会有更多地人参与研究当中去。Treg细胞的比例与肾癌发生，发展，治疗和预后等诸方面，都等待的人去研究。

参考文献：

[1] Sasada T， Kimura M， Yoshida Y， et al. CD4+CD25+ regulatory T cells in patients with gastrointestinal malignancies： possible involvement of regulatory T cells in disease progression [J]. Cancer， 2003， 98（5）： 1089-1099.

[2] Ormandy LA， Hillemann T， Wedemeyer H， er al. Increased populations of regulatory T cells in peripheral blood of patients with hepatocellular carcinoma [J]. Cancer Res， 20005， 65（6）： 2457-2464.

[3] Golgher D， Jones E， Powrie F， et al. Depention of CD25+ regulatory cells uncovers immune response to shared murine tumor rejection antigens[J]. Eur J Immunol， 2002， 32： 3267-3275.

[4] Hall BM. Mechanisms of induction of tolerance to organ allografts[J]. J Crit Rev Immunol， 2002， 20（4）：267-324.

[5] Yu P， Lee Y， Liu W， et al. Intratumor depletion of CD4+ cells unmasks tumor immunogenicity leading to the rejection of late-stage tumors[J]. J Exp Med， 2005， 201（5）： 779-791.

[6] Wildin RS， Smyk-Pearson S， Filipovich AH. Clinical and molecular features of the immunodysregulation， polyendocrinopathy， enteropathy， X linked IPEX） syndrome[J]. J Med Genet， 2002， 39（8）： 537-545.

[7] Kim JD， Choi BK， Bae JS， et al. Cloning and characterization of GITR ligand[J]. Genes Immunol， 2003， 4（8）： 564-569.

[8] Camara NO， Sebille F， Lechler RI. Human CD4+CD25+ regulatory cells have marked and sustained effects on CD8+ T cell activation[J]. Eur J Immunol， 2003， 33（12）： 3473-3483.

[9] Chen ML， Pittet MJ， Leonid Gl. Regulatory T cells suppress tumor-specific CD8 T cell cytotoxicity through TGF-β signals in vivo[J]. Proc Natl Acad Sci USA， 2005， 102（2）： 419-424.

[10] 張朝华 肾癌患者外周血和肿瘤组织内TREG细胞比例与预后的关系 中国药业 2010，18（9）；30-31

[11] 张朝华 肾癌患者外周血和肿瘤组织内TREG细胞比例与患者术后免疫治疗临床疗效的关系 中华医学杂志 2010，117（8）；7-10.