鱼中硒含量测定方法的比较

范文娟

【摘要】效液相色谱法检测下限为3mg/mL的硒具有高选择性、高效率、高灵敏度和操作简单、快速等优点，国外应用较多。国内医学检验上因仪器昂贵、试剂消耗大，推广较慢。原子荧光分析法检出极限lmg/mL，线性范围为2.5～500ng/mL。它有一定的局限性，但在亚洲特别是中国和日本使用广泛。

【关键词】高效液相色谱法；原子荧光分析法；硒

一、原子荧光分析法测定鱼中硒的含量

测定鱼硒含量的方法有几种：原子荧光分析法、微分极谱法、气相色谱和高效液相色谱法、中子活化分析法、化学发光淬灭法等。本文采用原子荧光分析和高效液相色谱法对鱼硒含量进行测定并比较。

（一）材料与方法

1、仪器与试剂

仪器：AFS-230双道原子荧光光度计；硒高强度空心阴极灯；

试剂：盐酸、硝酸、高氯酸均为国产GR级试剂，硼氢化钾、氢氧化钾为国产AR级试剂。

2、仪器条件选择

光电倍增管负高压：320V；硒空心阴极灯电流：80Ma；原子化器温度：9000C；

炉高：8mm；载气流量900mL/min；屏蔽气流量1100mL/min；

测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；读数时间：12s；进样体积：1mL

3、样品的获取与前处理

取草鱼的头部皮肤，中间鱼肉，尾巴和肝脏组织于60度左右的烘箱中烘干并碾成粉末状。

准确称取草鱼样品粉末0.2g，置于50mL小烧杯中，加入体积比为4：1的硝酸与高氯酸，室温放置过夜，加热消化。当溶液变为清亮并伴有白雾时，再加热至剩余体积约1mL。冷却，加入6mol/LHCl5mL，继续加热至溶液变为透明无色并伴有大量白雾出现。冷却，转移至容量瓶中，用10%HCl定容到10.00 mL。再准确称取0.1g草鱼粉末样品，同上述方法操作，最终定容到5.00mL。

4、实验方法

采用原子荧光法，将顺序注射仪的进样管放入盛有样品的容量瓶中，设定仪器进样量为1.0mL，以10%HC1为载流溶液，同体积进样，并与样品混合，进入反应器与还原剂硼氢化钾混合，以氩气为载气，采用标准曲线法确定样品硒含量。仪器工作条件如下：光电倍增管负高压320V；原子化器高度8 mm；空心阴极灯灯电流80mA；载气流量900mL/min；屏蔽气流量1100mL/min；载流液10%HC1；进样体积1.0mL。硒标准工作液质量浓度为10ng/mL，制作标准曲线时，采用10%的HC1，仪器自动逐级稀释为1、2、4、6、8和10ng/mL系列溶液，测定不同浓度硒标准溶液的含量。所有鱼样品硒含量均平行测定3次（n=3），取平均值。

5、硒标准曲线的绘制

配制硒标准系列0.004、0.012、0.020、0.040、0.120、0.200mg/L，根据实验优化条件进行鱼硒的测定，硒浓度在此范围与荧光强度呈线性正向关系，R=0.9997，曲线回归方程y=51.298+23294.412x，x为硒浓度，y为荧光强度。

结果见表2-1。

表2-1 标准硒系列的测定结果

图1 硒标准曲线

（二）结果

通过对草鱼样品的测定，平行测定三次得出三个荧光强度为771.51、769.79、801.56，得出平行三次测定的硒浓度为0.0353、0.0357、0.0366mg/kg。取其平均值为0.0359mg/kg。

（三）测定条件的选择原因

负高压和灯电流是影响测定灵敏度的主要因素，荧光强度随负高压或灯电流的增大而增加，但负高压、高电流会缩短灯的寿命，使仪器噪声增大，对测定不利，因此采用较高的负高压（320V）和灯电流（80mA），以获得较强的荧光强度和良好的信噪比。测定的灵敏度随炉高的增加而减少但炉高太低时，散射光将造成很高的背景读数，令空白值增大，本实验结果显示炉高8mm较合适。

二、高效液相色谱法测定鱼中痕量硒含量

（一）仪器与试剂

高效液相色谱仪，附带荧光检测器；

数据处理机硬件为Epson计算机，软件为Perkin—Elmer公司产品。

硒标准浓液：取l000μg/mL的硒标准贮存液（GSBG62029—90）1.0mL于100mL容量瓶中，以0.1mol/L HCL稀释至刻度作为标准中间液，硒含量为10μg/mL。再以0.1mol/L HCL稀释得硒含量为0.5μg/mL的标准使用液。

0.1 % 2，3-二氨基萘溶液：称取100mg2-3-二氨基萘于250mL磨口三角瓶中，加入l00mL 0.1mol/L盐酸，振摇至全部溶解后，加入20mL环己烷继续振播5min，移入分液漏斗，静置分层后将水相放回原三角瓶内，再用环已烷淬取几拔，直至环己烷相无色为止，将此纯化的水溶液贮于棕色瓶中，加一层约lcm厚的环己烷隔绝空气，置冰箱内保存。

EDTA混和液：量取50mL 0.2mol/L EDTA、50mL 1.0 mol/L 盐酸羟胺及5mL 0.02 mol/L 甲酚红指示液.加水稀释至1L混匀。

（二）实验方法

1、样品处理

称取1.0g均匀鱼样于50mL试管中，加入6mL浓HNO3浸泡过夜，次日沸水浴消化至无色或淡黄色透明。再加入2.0mL饱和草酸铵溶液，沸水浴加热60min，消除HNO3和NO-2对测定的影响，试管中溶液即为样品消化液。

2、荧光物的生成

于上述样品消化液中加入10mLEDTA混和液，用1 ： 1氨水及10% HCI调至粉红色（pH 1.5～2.0），加入2.0mL 0.1 % DAN水溶液，振匀，沸水浴加热5min后冷却，反应生成的4，5-苯并苤硒（NSD）用2mL环己烷振摇萃取2min，于暗处放置l0min，取l0μL环己烷相进液相色谱仪。

3、标准曲线的绘制

准确取0.5ug/mL硒标准溶液0、0.2、0.6、1.0、1.4、2.0mL（分别相当于0、0.1、0.3，0.5、0.7、1.0μg），加水至5mL，按样品消化液测定步骤同时进行测定，结果Se含量在0～1.0μg范围内。峰高与含量有良好的线性关系，线性方程为：Y=41.28x+0.4497 R=0.9923。

4、硒的回收率

表3-1 测定硒的回收率

5、 结果与讨论

用本法测定鱼中的痕量硒平行实验三次得出结果分别为：0.0297、0.0312、0.0361mg/kg。

取其平均值0.0299mg/kg。

（1）流动相的选择

反相液相色谱通常选用甲醇—水或乙腈—水体系为流动相。实验证明。4，5-苯并苤硒脑在乙腈—水体系中的荧光强度比在甲醇—水体系中的荧光强度强，100%乙腈中荧光强度最强，且峰分离最好，灵敏度最高。所以本法选用l00%乙腈为流动相。

（2）发射波长的选择

用一定量硒标准溶液的消化处理液多次注入液相色谱仪，分别选用不同波长进行实验，波长在558nm处有最大吸收。

三、结论

高效液相色谱法检测下限为3mg/mL的硒具有高选择性、高效率、高灵敏度和操作简单、快速等优点，国外应用较多。现今虽然在国内医学检验上因仪器昂贵、试剂消耗大，使其方法推广较慢。

原子荧光分析法检出极限lmg/mL，线性范围为2.5～500ng/mL。它有一定的局限范围，在中国和日本用到的比较多。

因此，原子荧光分析法在现今的社会应用广泛。