CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3在甲状腺乳头状微小癌与乳头状增生活跃组织中的表达及意义

郑海红 翁寿向 罗华荣 徐铖 甘梅富

●论 著

CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3在甲状腺乳头状微小癌与乳头状增生活跃组织中的表达及意义

郑海红 翁寿向 罗华荣 徐铖 甘梅富

目的 探讨CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3在甲状腺乳头状微小癌（PTMC）和结节性甲状腺肿伴乳头状增生活跃组织中的表达及意义。方法 采用免疫组化EnVision法检测40例PTMC及40例结节性甲状腺肿伴乳头状增生组织中CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3的表达水平。结果 CD56在PTMC中的表达均为阴性，在结节性甲状腺肿伴乳头状增生活跃组织中呈阳性表达；Galectin-3、CK19和HBME-1在PTMC中大部分呈中重度阳性表达，而在结节性甲状腺肿伴乳头状增生活跃组织中呈阴性或弱阳性。结论 CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3联合检测对PTMC及甲状腺乳头状增生活跃的诊断、鉴别诊断具有重要的实用价值。

甲状腺 乳头状微小癌 乳头状增生 CD56 Galectin-3 CK19 HBME-1

甲状腺乳头状病变是外科体检工作的诊断难点，其主要包括乳头状增生活跃及乳头状癌。甲状腺微小癌通常在良性甲状腺疾病的切除标本或尸检标本中偶然发现，是指直径≤1cm的甲状腺肿瘤，最常见的是乳头状微小癌[1]。结节性甲状腺肿为甲状腺最常见的增生性病变，伴乳头状增生活跃时很难与恶性相鉴别[2]。目前对Galectin-3、CK19、HBME-1的研究主要集中于甲状腺乳头状癌，对于甲状腺乳头状微小癌（PTMC）的研究相对较少，且有研究显示Galectin-3、CK19、HBME-1在甲状腺乳头状癌的鉴别诊断中起重要作用，但其在结节性甲状腺肿或其他甲状腺乳头状增生疾病中仍会表达[3]，因而对一些形态学不典型的PTMC仍有必要继续寻找一些新的标记物。本研究旨在阐明CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3在PTMC及结节性甲状腺肿伴甲状腺乳头状增生活跃组织中的表达及意义。

1 资料和方法

1.1 一般资料 按照病理诊断标准选取本院2008-01—2011-12因各种原因切除的甲状腺标本80例。其中PTMC的病理标本40例；结节性甲状腺肿伴滤泡上皮乳头状增生活跃40例。

1.2 方法 所有手术切除标本均经4%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋。免疫组化采用EnVision法，具体操作步骤按试剂说明书进行，抗原修复采用高压锅高温修复，DAB显色，苏木精复染，中性树胶封固，镜下观察。以PBS代替一抗作为阴性对照。多克隆抗体Galectin-3和单克隆抗体购自丹麦基因公司。Galectin-3、CK19、HBME-1的阳性对照用诊断明确的PTMC，CD56以肺小细胞癌作为CD56阳性对照。

1.3 结果判定 CD56阳性信号为细胞膜染色伴或不伴细胞质染色；HBME-1、CK19阳性信号为细胞膜和细胞质内出现棕黄色颗粒；Galectin-3阳性信号为细胞质内出现棕黄色颗粒。染色的评分方法：按阳性细胞数所占比例并参考着色强度分为：无明显阳性细胞为阴性（-），阳性细胞数＜25%为弱阳性（+），阳性细胞数25%～50%为中度阳性（++），阳性细胞数＞50%为强阳性（+++）。

2 结果

2.1 临床及组织病理学特征 PTMC主要发生于中老年，女性明显多于男性，组织学上主要呈现乳头状结构，细胞核呈毛玻璃状，可见核重叠、核沟及纤维瘢痕；肿瘤间质中或乳头轴心内可见砂砾体，间质钙化常见于玻璃样变性的纤维性间质或坏死组织内。结节性甲状腺肿伴乳头状增生活跃病例，常伴有囊性变，乳头伸向囊腔中心，均可见纤维血管轴心，有些可见2级及以上分支，乳头状增生活跃时的乳头被覆上皮形如周围滤泡上皮，无上述PTMC细胞特征，细胞呈柱状，细胞核圆形、卵圆形，细胞核位于乳头基底部，保持良好极性。乳头间质可见水肿及滤泡结构，而无上述PTMC间质特征。

2.2 免疫组化

2.2.1 CD56、CK19、HBME-1、Galectin-3在各组病例中的表达水平 见表1。

表1 CD56、HMBE-1、CK19、Galectin-3在各组病例中的表达水平（例）

2.2.2 CD56在PTMC及结节性甲状腺肿伴乳头状增生活跃组织中的表达 CD56阳性定位于细胞膜，40例PTMC病例中CD56全部阴性，但其中有8例PTMC的癌巢与正常甲状腺交界处可见散在的CD56弱阳性（图1），乳头状癌中CD56失表达与肿瘤的组织学类型和大小均无关；40例结节性甲状腺肿组织CD56全部阳性，其中25例呈弱阳性，10例呈中度阳性，5例呈强阳性（图2），阳性率为100%；40例甲状腺乳头状增生活跃组织CD56全部阳性，其中21例呈弱阳性，11例呈中度阳性，8例呈强阳性（图3），阳性率为100%。

图1 癌旁良性甲状腺组织中CD56阳性（左下），而癌组织阴性（右上）（EnVision，×100）

图3 甲状腺乳头状增生活跃组织中CD56阳性（EnVision，×100）

2.2.3 HBME-1在PTMC及结节性甲状腺肿伴乳头状增生活跃组织中的表达 HBME-1阳性定位于细胞膜，可伴有细胞质或甲状腺胶质的阳性着色，阳性表达主要位于细胞的腺腔面及乳头表面，强阳性时阳性信号连接成线状。40例PTMC中HBME-1全部阳性，弱阳性2例，呈中度阳性4例，呈强阳性34例（图4），阳性率为100%；结节性甲状腺肿中仅有弱阳性1例（图5），阴性39例，阳性率2.5%；甲状腺乳头状增生活跃组织中呈阴性30例，弱阳性5例，中度阳性4例，强阳性1例（图6），阳性率25%。

图4PTMC组织中HBME-1强阳性（EnVision，×100）

图 5 结节性甲状腺肿组织中HBME-1阳性（EnVision，×100）

图6 甲状腺乳头状增生活跃组织中HBME-1阳性（EnVision，×100）

2.2.4 CK19在PTMC及结节性甲状腺肿伴乳头状增生活跃组织中的表达 CK19阳性定位于细胞膜及细胞质，40例PTMC中呈阴性1例，呈弱阳性1例，呈中度阳性3例，强阳性35例（图7），阳性率为97.5%；在结节性甲状腺肿呈阴性32例，弱阳性8例（图8），阳性率为20%；甲状腺乳头状增生活跃组织中阴性38例，弱阳性2例（图9），阳性率为5%。

图7 PTMC组织中CK19强阳性（EnVision，×100）

图8 结节性甲状腺肿组织中CK19中度阳性（EnVision，×100）

2.2.5 Galectin-3在PTMC及结节性甲状腺肿伴乳头状增生活跃组织中的表达 Galectin-3阳性定位于细胞质，有时可见细胞核着色，组织细胞、淋巴细胞、纤维母细胞及炎细胞周围新生的滤泡上皮呈明显的阳性着色。PTMC中Galectin-3弱阳性2例，中度阳性4例，强阳性34例（图10），阳性率100%；结节性甲状腺肿病例全部呈阴性表达；甲状腺乳头状增生活跃组织中阴性32例，弱阳性4例，中度阳性2例，强阳性2例（图11），阳性率20%。

3 讨论

PTMC是乳头状癌的亚型，WHO分类中将其定义为直径≤1cm的乳头状癌，因为体积小，在体检时易被漏诊。通常在由于其它原因切除甲状腺标本或尸检中偶然发现。尽管文献报道PTMC同样可以出现乳头状癌的特征，如毛玻璃状核、核内假包涵体和核沟等，具备这些特征的典型PTMC诊断并不困难，但有一些良性病变（如结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤等）囊性变后形成的假乳头或乳头状增生可以与PTMC中的真乳头非常相似；同时，当PTMC癌核的特征不明显或为特殊组织学类型（如滤泡亚型）时易诊为良性。本研究联合运用CD56、HBME-1、Galectin-3、CK19，检测其对PTMC及甲状腺乳头状增生活跃诊断的敏感性。

图9 甲状腺乳头状增生活跃组织中CK19中度阳性（EnVision，×100）

图10 PTMC组织中Galectin-3强阳性（EnVision，×100）

图11 甲状腺乳头状增生活跃组织中Galectin-3中度阳性（En-Vision，×100）

PTMC多见于女性，男女发病比例各家报道不一[4]，大多在1∶3左右，有的高达1∶9，本组病例男女之比约为1∶3，与多数文献报道相一致。好发年龄一般在40～50岁，本组平均年龄45岁。肿瘤体积一般较小，本组最小的肿瘤直径仅0.2cm。因而在这一年龄段的女性结节性甲状腺肿患者一定要将甲状腺按书页状切开，多取材，同时在阅片时要仔细，谨防漏诊。

CD56是一种神经黏附分子，可影响肿瘤的迁移。国外Demellawy等[5]对72例甲状腺乳头状癌进行CD56染色，结果提示CD56在所有病例中均呈阴性表达，而在良性甲状腺上皮则呈持续性阳性表达。国内有文献报道，其中有一项研究显示在10例PTMC中2例CD56呈阳性表达，另一项研究对73例PTMC进行CD56染色，结果提示CD56在所有病例中均呈阴性表达[3]。本研究提示100%的PTMC CD56呈阴性表达。我们研究结果不仅证实了Demellawy等的研究结果，也表明CD56在PTMC诊断中可能具有一定价值。同时我们的研究结果发现有8例标本其阳性部位均位于肿瘤组织与周围正常甲状腺组织的交界处，这与Demellawy等的研究相似。我们推测，可能是癌组织侵及周围被包裹的正常甲状腺组织的表达，而不是真正的乳头状癌组织的表达。

HBME-1是目前临床上应用的间皮瘤相关抗体，可与存在于间皮瘤细胞微绒毛表面的抗原起反应[6]。这种抗体在大多数上皮型间皮瘤中呈强阳性细胞膜表达，为新近应用于甲状腺病理诊断中的抗体。Prasad等[7]的研究结果发现HBME-1在恶性甲状腺肿瘤中的表达为72%，良性病变为6%。本研究显示PTMC HBME-1的阳性率为100%，且主要为中、重度着色，结节性甲状腺肿的阳性率为2.5%，且主要为轻度着色，甲状腺乳头状增生组织阳性率为25%。证实了HBME-1可以区分癌性乳头和乳头状增生，可作为PTMC诊断的依据。

CK19是一种低分子量的角蛋白，存在于正常上皮和一些上皮来源的肿瘤中。Laco等[8]研究提示22例PTMC中有13例CK19阳性，阳性率为59%。我们的研究结果提示40例甲状腺乳头状微小癌均阳性，其中38例呈中至重度阳性着色；在结节性甲状腺肿中尽管40例标本中有8例CK19呈阳性着色，但其表达水平多数为轻度阳性；在甲状腺乳头状增生活跃组织中40例标本中有2例CK19呈阳性着色，但其表达水平为轻度阳性。因此，在应用CK19辅助诊断PTMC只有弥漫强阳性才有意义，且需结合其他标记物诊断。

Galectin-3是一种β-半乳糖苷结合凝集素，在调节细胞生长、黏附、凋亡和恶变等过程中发挥重要作用，在PTMC的诊断中越来越受到重视。本研究结果显示Galectin-3在PTMC中表达阳性率100%，显著高于甲状腺乳头状增生（20%）及结节性甲状腺肿（0%），支持Galectin-3在甲状腺乳头状病变的鉴别诊断中具有良好的应用价值。另外，对于甲状腺病变中乳头状增生活跃的意义目前尚不明了，Coli等[9]认为良性乳头状增生中Galectin-3的表达提示该病变具有向甲状腺乳头状癌转化的趋势，因病例较少，还需我们进一步随访研究。

综上所述，某些PTMC极易误诊为恶性的结节性甲状腺肿伴乳头状增生活跃。单凭形态学，其诊断有一定困难，出现乳头不一定意味着乳头状癌，对乳头状结构须严格评估其细胞学特征及免疫组化表达特点[10]，上述4种抗体的单一染色阳性或阴性对诊断意义不大，联合4种抗体染色对PTMC及结节性甲状腺肿伴乳头状增生活跃的诊断及鉴别诊断具有重要的提示意义。

[1]DeLellis R A．Pathology and genetics of tumours of endocrine organs[M]．World Health Organization,2004:69-71．

[2]佟杰,罗杰,笪冀平,等．甲状腺乳头状增生活跃与微小乳头状癌的诊断与鉴别诊断[J]．诊断病理学杂志,2011,18（3）:173-177．

[3]陈云新,沈丹华,孙昆昆,等．甲状腺微小乳头状癌中Galectin-3,CK19, HBME-1和CD56的表达及意义[J]．临床与实验病理学杂志,2010,26(4): 425-428．

[4]Pazaitou-Panayiotou K,Capezzone M,Pacini F．Clinical features and therapeutic implication of papillary thyroid microcarcinoma[J]．Thyroid,2007,17(11):1085-1092．

[5]Demellawy D,Nasr A L,Babay S,et al．Diagnostic utility of CD56 immunohistochemistry in papillary carcinoma of the thyroid[J]．Pathol Res Pract,2009,205(5):303-309．

[6]滕晓东,王丽君,姚洪田,等．细胞角蛋白19,galectin-3,HBME-1在甲状腺病变上的表达及鉴别诊断意义[J]．中华病理学杂志,2004,33 (3):212-216．

[7]Prasad M L,Pellegata N S,Huang Y,et al．Galectin-3,fibronectin-1,CITED-1,HBME1 and cytokeratin-19 immunohistochemistry is useful for the differential diagnosis of thyroid tumors[J]．Mod Pathol,2005,18(1):48-57．

[8]Laco J,Ryska A,Cap J,et al．Expression of galectin-3,cytokeratin 19,neural cell adhesion molecule and E-cadhedrin in certain variants of papillary thyroid carcinoma[J]．Cesk Patol,2008,44 (4):103-107．

[9]Coli A,Bigotti G,Parente P,et al．Atypical thyroid nodules express both HBME-1 and Galectin-3,two phenotypic markers of papillary thyroid carcinoma[J]．J Exp Clin Cancer Res,2007,26 (2):221-227．

[10]佟杰,王岩,笪冀平．CK19 HBME-1 Galectin-3等表达在甲状腺乳头状微小癌与良性病变鉴别诊断中的意义[J]．中华肿瘤杂志, 2011,33(8):599-604．

Expression of CD56，HBME-1，CK19 and Galectin-3 in thyroid papillary microcarcinomas and papillary hyperplasia

Thyroid Papillary microcarcinomas Papillary hyperplasia CD56 Galectin-3 CK19 HBME-1

2012-04-05）

（本文编辑：杨丽）

317000 台州恩泽医疗中心（集团）台州医院病理科

甘梅富，E-mail:ganmf@sohu.com

【 Abstract】Objective To investigate the expression and significance of CD56,HBME-1,CK19 and Galectin-3 in thyroid papillary microcarcinomas and thyroid papillary hyperplasia．Methods The expression of CD56,HBME-1,CK19 and Galectin-3 was examined by immunohistochemical EnVision method in tissue specimens of 40 patients with thyroid papillary microcarcinomas and 40 patients with nodular goiter combined with thyroid papillary hyperplasia．Results The moderate to strong staining for HBME-1,CK19,Galectin-3 was observed in most papillary microcarcinomas,but negative to mild in nodular goiter and papillary hyperplasia．CD56 was negatively stained in papillary microcarcinomas,while it was positive in nodular goiter and papillary hyperplasia．Conclusion The combined detection of CD56,HBME-1,CK19 and Galectin-3 can be used for differential diagnosis between thyroid papillary microcarcinomas and papillary hyperplasia．