咳特灵片质量标准

马冬云，姜文艳

（1．江苏省连云港市药品检验所，江苏 连云港 222006； 2．江苏省连云港市东方医院·市涉外医院，江苏 连云港 222006）

咳特灵片由小叶榕干浸膏、马来酸氯苯那敏组成，具有镇咳、祛痰、平喘、消炎的功效，用于咳喘及慢性支气管炎，收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂(第十四册)》。原质量标准用薄层色谱（TLC）法对小叶榕进行鉴别，按原标准的方法进行TLC鉴别，得不到清晰一致的荧光斑点；用光电比色法对马来酸氯苯那敏限量进行检查，操作复杂，重现性差。现拟增加高效液相色谱（HPLC）法对马来酸氯苯那敏进行定性鉴别，改进小叶榕的TLC鉴别方法，并采用HPLC法对咳特灵片中马来酸氯苯那敏进行含量测定，以全面控制咳特灵片的质量。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪。小叶榕对照药材（批号为110797-200307），马来酸氯苯那敏对照品（批号为 110854-200306）；均由中国药品生物制品检定所提供；咳特灵片（市售药品）；甲醇为色谱纯，水为纯化水，聚酰胺薄膜（薄层层析用，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂），其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2．1 小叶榕的TLC鉴别[1]

取样品 10片，研细，加甲醇 30 mL，加热回流 20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用稀盐酸调节pH至2～3，置分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取小叶榕对照药材20 g，加水煎煮 2次，每次 150 mL，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至约30 mL，加乙醇使含醇量约达85%，静置，吸取上清液，置水浴上蒸干，加甲醇30 mL，按供试品溶液制备方法同法制成对照药材溶液。模拟处方制备不含小叶榕干浸膏的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（2 ∶8 ∶0．5 ∶1）的上层溶液为展开剂，展开，展距 10 cm，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色斑点，而在相应位置上阴性对照品溶液色谱无干扰斑点(见图1)。

2．2 马来酸氯苯那敏含量测定

2．2．1 色谱条件[2]

色谱柱：PhenomenexC18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流速：1．0 mL ／min；柱温：30 ℃ ；流动相：0．0 5 mol／L 磷酸二氢钾溶液（含1%三乙胺和0．005 mol／L庚烷磺酸钠，用磷酸调节 pH至3．0）-甲醇（40∶60）为流动相，检测波长：264nm，进样量：10 μL。

2．2．2 溶液制备

精密称取马来酸氯苯那敏对照品 13．61 mg，置50 mL量瓶中，加流动相适量使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；分别精密量取 1．0，3．0，5．0，7．0，8．0，10．0 mL，分置 25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取样品20片，精密称定，研细，精密称取 0．4 g（相当于马来酸氯苯那敏1．4 mg），置25 mL量瓶中，加入流动相，超声处理（功率 250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，加流动相至刻度，摇匀，用0．45 μm的微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。模拟处方制备不含小叶榕干浸膏的阴性样品，依法制成阴性对照品溶液。

图1 咳特宁薄层色谱图

2．2．3 方法学考察

干扰试验：取2．2．2项下3种溶液，在相同色谱条件下进样，记录色谱图。结果表明，在该条件下，马来酸氯苯那敏的出峰区阴性样品无干扰峰。色谱图见图2。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密量取2．2．2项下对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪测定峰面积，以对照品质量浓度（μg／mL）为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程 A＝7．40 C＋1．72，r＝0．999 9（n ＝6）。结果表明，马来酸氯苯那敏质量浓度在10．89 ～ 108．90 μg／mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密量取同一对照品溶液（54．44 μg ／mL）10 μL，连续进样6次，记录峰面积。结果峰面积的 RSD＝0．63%（n＝6）。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液 10 μL，分别在 0，3，6，9，12，18，24 h 时进样。结果峰面积的 RSD ＝1．1% （n＝7），表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批(批号为100615）样品6份，按2．2项下的方法制备并测定峰面积。结果马来酸氯苯那敏含量为3．739 mg／g，RSD ＝1．2%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的同批号样品6份，每份0．2 g，分别置25 mL量瓶中，分为3组，每组分别加入对照品溶液1，2，3 mL（质量浓度为 0．255 1 mg ／mL），加流动相溶液，依法操作，测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 马来酸氯苯那敏加样回收试验结果（n＝6）

2．3 样品含量测定

按2．2．1项下条件，分别测定3批咳特灵片样品含量，结果见表 2。

表2 样品含量测定（n＝3）

2．4 马来酸氯苯那敏HPLC鉴别

取 2．2．2 项下 3 种溶液，按 2．2．1 项下色谱条件，精密量取10 μL，分别进样，记录色谱图。结果供试品溶液色谱主峰保留时间与对照品溶液色谱主峰保留时间一致，阴性对照品溶液色谱在相应位置无干扰(见图2)。

3 讨论

采用文献[1]报道的小叶榕TLC鉴别方法，较原标准中的TLC法色谱特征明显，专属性强，所得小叶榕的薄层色谱主斑点与文献一致，进一步说明了文献中小叶榕TLC法的可行性。采用HPLC法对马来酸氯苯那敏进行定性鉴别，快速、简便。采用HPLC法对咳特灵片中马来酸氯苯那敏进行含量测定，与光电比色法测定马来酸氯苯那敏限量检查比较，具有准确、重现性好的特点。因此，文中建立的方法可供咳特灵片质量标准修订时参考。

[1]钟名诚，唐娟娟．咳特灵胶囊质量标准的研究[J]．中国药品标准2008，9（4）：270．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：1 208．