高效液相色谱法测定黄连上清片中栀子苷含量

孟建升，何 波，蒋俊春

(河南省商丘市食品药品检验所，河南 商丘 476000)

黄连上清片是国家基本药物目录中的常用药品，现收载于2010年版《中国药典》，是由黄连、栀子、连翘、炒蔓荆子、防风等17味中药组成的复方制剂，具有散风清热，泻火止痛的功效，用于风热上攻、肺胃热盛所致的头晕目眩、暴发火眼、牙齿疼痛、口舌生疮、咽喉肿痛、耳痛耳鸣、大便秘结、小便短赤[1]。处方中的主要有效成分栀子为临床常用中药，始载于《神农本草经》，为茜草科植物栀子的干燥成熟果实，具泻火除烦、清热利尿、凉血解毒之功，用于热病心烦、目赤肿痛等症[2]。现行质量标准仅对栀子进行了薄层色谱鉴别，未进行含量测定。为更好地控制产品质量，保证临床用药有效、安全，建立了测定本品中栀子苷含量的高效液相色谱法，为完善产品质量标准提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);MSA225S-000-DU型电子分析天平(德国赛多利斯公司)。栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110749-200714);乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。黄连上清片为市售品。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:Thermo BDS Hypersil C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:乙腈-水(15∶85);流速:1．0 mL/min;检测波长:238 nm;进样量:10 μL;柱温:28℃。理论板数应不低于2 000。

2．2 溶液制备

精密称取栀子苷对照品5 mg，置200 mL容量瓶中，加甲醇适量，振摇使其完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取本品20片，精密称定，研细，取0．8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，作为供试品溶液。另取缺栀子的其他味药按处方工艺制成阴性制剂，按上述方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

干扰试验:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图。结果表明，其他成分对栀子苷测定无干扰，见图1。

线性关系考察:精密称取栀子苷对照品5 mg，置200 mL棕色容量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀。按拟订色谱条件，分别进样 1，3，5，10，12，15，20 μL，记录栀子苷峰面积值，以峰面积积分值(Y)对进样量(X)进行线性回归，得回归方程 Y=1 109．9 X ＋32．84(r=0．999 9)。结果表明，栀子苷对照品进样量在0．023 45～0．469 0 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:取同一对照品溶液，重复进样5次，每次10 μL，记录峰面积。结果的RSD=0．99%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一样品约0．8 g，精密称定5份，分别照供试品制备方法制备供试品溶液，进样测定，记录峰面积。结果的RSD=1．16%(n=5)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:精密量取同一供试品溶液10 μL，分别在0，1，2，4，6，8，10 h 时进样测定。结果的 RSD=1．03%(n=6)，表明供试品溶液中栀子苷在10 h内稳定。

加样回收试验:称取6份已知含量为1．536 9 mg/g的样品0．4 g，精密称定，分别置1～6号锥形瓶中，另取栀子苷对照品约10 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5，6，7 mL，置上述 1～6号锥形瓶中，依法制备供试品溶液并按拟订色谱条件，分别测定含量，结果见表1。

表1 栀子苷加样回收试验结果(n=6)

2．4 样品含量测定

取5批样品，依法制备供试品溶液，各进样10 μL，按外标法计算栀子苷的含量，结果5批样品中栀子苷的含量分别为1．536 9，1．463 7，1．652 6，1．369 8，1．598 7 mg/g。

3 讨论

洗脱系统的选择:比较了甲醇-水、乙腈-0．1%磷酸、乙腈-水洗脱系统。试验证明，乙腈-水洗脱系统栀子苷与其他物质色谱峰分离度较好，故选用乙腈-水洗脱系统分析样品。

供试品处理方法的选择:参考文献[3-4]，比较了稀乙醇、甲醇、氯仿、水几种提取溶剂，结果表明，甲醇为最佳提取溶剂。比较了回流、超声、冷浸3种提取方法，结果表明，超声提取30 min能将供试品中的栀子苷较充分的提取，故选用甲醇超声处理30 min作为供试品的处理方法。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:1 067-1 068．

[2]刘 锋，黄显会，付美琴．高效液相色谱法测定复方清开灵注射液中栀子苷的含量[J]．华南农业大学学报，2010，31(4):104-107．

[3]吴学军．HPLC测定黄栀花口服液中栀子苷[J]．中国实验方剂学，2010，16(8):67-68．

[4]笔雪艳，刘晓凤，张清波．HPLC法测定清开灵泡腾片中栀子苷的含量[J]．中国药房，2011，22(3):240-241．