高效液相色谱法测定黄连上清片中栀子苷含量

2013-04-17 08:45孟建升蒋俊春
中国药业 2013年21期
关键词:栀子容量瓶乙腈

孟建升,何 波,蒋俊春

(河南省商丘市食品药品检验所,河南 商丘 476000)

黄连上清片是国家基本药物目录中的常用药品,现收载于2010年版《中国药典》,是由黄连、栀子、连翘、炒蔓荆子、防风等17味中药组成的复方制剂,具有散风清热,泻火止痛的功效,用于风热上攻、肺胃热盛所致的头晕目眩、暴发火眼、牙齿疼痛、口舌生疮、咽喉肿痛、耳痛耳鸣、大便秘结、小便短赤[1]。处方中的主要有效成分栀子为临床常用中药,始载于《神农本草经》,为茜草科植物栀子的干燥成熟果实,具泻火除烦、清热利尿、凉血解毒之功,用于热病心烦、目赤肿痛等症[2]。现行质量标准仅对栀子进行了薄层色谱鉴别,未进行含量测定。为更好地控制产品质量,保证临床用药有效、安全,建立了测定本品中栀子苷含量的高效液相色谱法,为完善产品质量标准提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);MSA225S-000-DU型电子分析天平(德国赛多利斯公司)。栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号为110749-200714);乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。黄连上清片为市售品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Thermo BDS Hypersil C18柱(150 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(15∶85);流速:1.0 mL/min;检测波长:238 nm;进样量:10 μL;柱温:28℃。理论板数应不低于2 000。

2.2 溶液制备

精密称取栀子苷对照品5 mg,置200 mL容量瓶中,加甲醇适量,振摇使其完全溶解后,稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。取本品20片,精密称定,研细,取0.8 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 mL,称定质量,超声处理30 min,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,作为供试品溶液。另取缺栀子的其他味药按处方工艺制成阴性制剂,按上述方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL,按拟订色谱条件进样测定,记录色谱图。结果表明,其他成分对栀子苷测定无干扰,见图1。

线性关系考察:精密称取栀子苷对照品5 mg,置200 mL棕色容量瓶中,加甲醇适量,振摇使完全溶解后,稀释至刻度,摇匀。按拟订色谱条件,分别进样 1,3,5,10,12,15,20 μL,记录栀子苷峰面积值,以峰面积积分值(Y)对进样量(X)进行线性回归,得回归方程 Y=1 109.9 X +32.84(r=0.999 9)。结果表明,栀子苷对照品进样量在0.023 45~0.469 0 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:取同一对照品溶液,重复进样5次,每次10 μL,记录峰面积。结果的RSD=0.99%(n=5),表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一样品约0.8 g,精密称定5份,分别照供试品制备方法制备供试品溶液,进样测定,记录峰面积。结果的RSD=1.16%(n=5),表明方法重复性良好。

稳定性试验:精密量取同一供试品溶液10 μL,分别在0,1,2,4,6,8,10 h 时进样测定。结果的 RSD=1.03%(n=6),表明供试品溶液中栀子苷在10 h内稳定。

加样回收试验:称取6份已知含量为1.536 9 mg/g的样品0.4 g,精密称定,分别置1~6号锥形瓶中,另取栀子苷对照品约10 mg,精密称定,置100 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,分别精密量取5,6,7 mL,置上述 1~6号锥形瓶中,依法制备供试品溶液并按拟订色谱条件,分别测定含量,结果见表1。

表1 栀子苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取5批样品,依法制备供试品溶液,各进样10 μL,按外标法计算栀子苷的含量,结果5批样品中栀子苷的含量分别为1.536 9,1.463 7,1.652 6,1.369 8,1.598 7 mg/g。

3 讨论

洗脱系统的选择:比较了甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸、乙腈-水洗脱系统。试验证明,乙腈-水洗脱系统栀子苷与其他物质色谱峰分离度较好,故选用乙腈-水洗脱系统分析样品。

供试品处理方法的选择:参考文献[3-4],比较了稀乙醇、甲醇、氯仿、水几种提取溶剂,结果表明,甲醇为最佳提取溶剂。比较了回流、超声、冷浸3种提取方法,结果表明,超声提取30 min能将供试品中的栀子苷较充分的提取,故选用甲醇超声处理30 min作为供试品的处理方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:1 067-1 068.

[2]刘 锋,黄显会,付美琴.高效液相色谱法测定复方清开灵注射液中栀子苷的含量[J].华南农业大学学报,2010,31(4):104-107.

[3]吴学军.HPLC测定黄栀花口服液中栀子苷[J].中国实验方剂学,2010,16(8):67-68.

[4]笔雪艳,刘晓凤,张清波.HPLC法测定清开灵泡腾片中栀子苷的含量[J].中国药房,2011,22(3):240-241.

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