孕妇外周血胎儿有核红细胞检测与优生优育

王志宏（综述），李陈莉（审校）

（1.承德医学院附属医院产科，河北承德 067000；2.河北医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，河北石家庄 050017）

·综 述·

孕妇外周血胎儿有核红细胞检测与优生优育

王志宏1（综述），李陈莉2*（审校）

（1.承德医学院附属医院产科，河北承德 067000；2.河北医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，河北石家庄 050017）

孕妇；红细胞；优生学；综述文献

目前国内外常用的产前诊断胎儿遗传性疾病的技术是羊水穿刺，其常见的并发症是流产和绒毛膜羊膜炎［1］。有创产前诊断的并发症成为医疗纠纷的潜在因素。因此，无创产前诊断成为广大优生遗传学者们一直在积极探索的课题。经过几十年的大量的研究，利用孕妇外周血胎儿细胞或游离遗传物质诊断胎儿遗传性疾病成为目前比较有发展前景的无创产前诊断方法［2］，其中，孕妇外周血胎儿有核红细胞（fetal nucleated red blood cell，FNRBC）被认为是较理想的无创产前诊断的靶细胞［3］。在不断的临床试验研究过程中，学者们发现有些高危妊娠如妊娠高血压疾病子痫前期［4-5］、妊娠期糖尿病［6］、慢性胎儿宫内窘迫［7］发生时母血中胎儿有核红细胞数量增加。因此，母血中FNRBC数目增加在产前预测病理妊娠的发生及发病机制方面的研究引起广大产科临床医师的关注。

1 FNRBC的特点

FNRBC是胎儿造血系统建立和发育过程中胎儿血液循环中出现的特征性细胞，FNRBC含有胎儿基因的全部遗传信息，可直接进行遗传学分析，其平均寿命较短，适合用于第1次及多次妊娠妇女的产前诊断，而且能表达多种相对稳定特异性抗原，如转铁蛋白受体、Glycophorin A受体、多种胎儿血红蛋白肽链（γεζ），这些都有利于对细胞进行分类、鉴别和富集。

2 孕妇外周血FNRBC的检测方法

孕早期胎儿血液中有核红细胞含量丰富，但透过胎盘进入到孕妇外周血中的FNRBC数量很少，需特殊的方法才能检测得到。目前已知主要的检测方法有荧光激活细胞分选法、磁激活细胞分选法、免疫磁珠分离法、密度梯度离心法、流动分离、选择性红细胞裂解、凝集素和其他方法。目前没有确定一种简便经济、准确度较高的用于分离纯化孕妇外周血FNRBC的方法。

2.1 荧光激活细胞分选法（即流式细胞计数法）：原理是用荧光染料标记FNRBC特异性的单克隆抗体，与相应的抗原识别，然后通过细胞分选器将FNRBC从整个细胞群体中分离出来。常用的FNRBC表面抗原有转铁蛋白受体、血型糖蛋白A、血栓敏感素受体及CD35、CD47。由于至今尚未发现任何一种FNRBC特有的表面抗原，故常运用多种表面抗原进行综合筛选。这种方法分离出的FNRBC纯度高，但价格昂贵，操作复杂，临床不宜推广。

2.2 磁激活细胞分选法：原理是用FNRBC特异性的单克隆抗体与抗原识别，将抗体用磁珠标记，在外加磁场的作用下，磁激活细胞分选器可将样品中带磁与不带磁的细胞分开，以达到分离纯化的目的。此种方法简便、省时，而且可在短时间内分离大量及多个样品，但分离效率不及荧光激活细胞分选法。

2.3 密度梯度离心法：该方法是根据胎儿细胞与母体细胞在体积、密度、沉降系数、渗透压等方面不同，通过离心分离出胎儿细胞。这种方法经济简便，获取细胞比例高，容易在临床推广，但精确度稍差，可作为实验前的筛选方法，然后结合其他方法如荧光激活细胞分选法、磁激活细胞分选法或显微操作，才能较好地获得胎儿有核红细胞。当前应用较成熟的密度梯度离心法主要有一倍密度梯度离心法、二倍密度梯度离心法及不连续三倍密度梯度离心法。文献［8］表明，二倍密度梯度离心法优于其他密度梯度离心法，配以适宜的浓度可大幅度提高FNRBC分离率。

3 检测孕妇外周血FNRBC在优生优育中的应用

3.1 胎儿染色体异常的筛选和诊断：Krabchi等［9］报道16例怀21-三体综合征胎儿的孕妇外周血中FNRBC数量为6～32个/mL，比正常孕妇明显增多，提示如果把母血中FNRBC计数增加作为21-三体胎儿筛查的一项指标，结合唐氏筛查三联生化检查及B超检查，可能会减少21-三体产前筛查结果的假阳性率。相文佩等［10］研究提示血清三联筛查、超声检查结合病史筛选出高危孕妇，然后利用母血中FNRBC进行多重引物原位杂交监测细胞染色体，可作为快速、无创性产前诊断唐氏综合征的有效模式。

3.2 孕妇外周血FNRBC计数与高危妊娠：严重的妊娠并发症可引起胎盘病理改变间接引起胎儿血供减少而缺氧。李芹等［11］研究表明孕妇外周血FNRBC数量变化与胎盘损伤程度相关，孕妇外周血FNRBC数量变化可作为间接反映胎盘损伤程度的指标之一，胎盘受损后致胎盘功能下降，胎儿缺氧，缺氧刺激胎儿促红细胞生成素增加以增加携氧能力，因此血液中不成熟红细胞增加，通过胎盘屏障进入母血中的FNRBC计数增加。Boskabadi等［12］研究显示新生儿有核红细胞百分数和有核红细胞的绝对值可作为评估围产期胎儿（或新生儿）缺氧早期发病及严重程度的一项指标。胎儿脐血收缩期蜂值流速/舒张期流速（sytolic/diastolic，S/D）比值，是目前较常用的反映脐动脉血流阻力的指标。严重的妊娠并发症引起胎盘-胎儿血供减少，胎儿脐动脉舒张末期血流速度减小，S/D比值增高，提示胎儿缺氧。杜晓红等［13］报道多种产科并发症及胎儿畸形可致脐动脉血流S/D比值增高，存在高危因素时，脐动脉血流监测对预测不良妊娠结局有较高的实用价值。妊娠高血压组胎儿脐动脉血S/D比值较正常组增高，且胎儿脐动脉血S/D比值与胎儿体质量呈负相关［14］。

3.3 孕妇外周血FNRBC计数与妊娠高血压疾病：妊娠高血压疾病基本的病理变化是全身小动脉痉挛，全身各系统各脏器灌流减少，因为子宫胎盘血流灌注减少引起胎儿缺氧，因此孕妇外周血FNRBC计数较正常增加。Aali等［5］研究显示子痫前期孕妇外周血FNRBC和胎儿脐血有核红细胞数量比对照组显著增加，而且孕妇外周血FNRBC和脐血有核红细胞数量有相关性。Bayram等［15］测定子痫前期胎儿脐血FNRBC计数比对照组明显增加。杨晓菊等［4］报道33例重度子痫前期孕妇外周血FNRBC计数（17.42±4.11个）/6mL，子痫前期可能存在着某种胎-母细胞传输紊乱机制，从而导致胎儿细胞漏入母体。

3.4 孕妇外周血FNRBC计数与妊娠期糖尿病：Daskalakis等［16］报道妊娠期糖尿病孕妇外周血FNRBC计数及胎儿缺氧情况比正常孕妇明显增加。临床资料显示妊娠期糖尿病未治疗组的孕妇妊娠期高血压疾病、胎儿宫内窘迫发生率明显高于规范治疗组［17］。妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限患者的胎盘超微结构改变表现为微绒毛稀疏细小、细胞核不规则、细胞质内有较多的空泡、细胞器数量减少、毛细血管减少。其结构改变直接影响胎盘的供血和供氧功能，导致了不良妊娠结局［18］。Namavar Jahromi等［19］研究显示，需用胰岛素治疗的妊娠期糖尿病孕妇分娩后胎儿脐血有核红细胞数较正常孕妇明显增加，而且存在胎儿宫内酸中毒。

3.5 孕妇外周血FNRBC计数与妊娠合并血小板减少：妊娠合并血小板减少最常见的原因是妊娠合并特发性血小板减少性紫癜（idiopathicthrombocytopenic purpura，ITP）和妊娠期血小板减少症（gestational thrombocytopenia，GT），妊娠后发病的ITP与GT因临床症状不明显而不易鉴别，常表现单纯血小板减少，患者孕期一般无临床症状，如无其他并发症，胎儿一般无缺氧表现。晁爽等［20］报道ITP与GT患者新生儿早产率差异无统计学意义，而其他严重疾病继发血小板减少患者新生儿早产率明显增加。孕妇外周血FNRBC计数与妊娠合并血小板减少的关系目前尚不明确。

4 问题与展望

利用分子技术检测孕妇外周血胎儿有核红细胞的基因及染色体，有望成为无创产前诊断胎儿基因及染色体异常的新的方法之一，但由于孕妇外周血胎儿细胞含量很少，其分离和纯化技术复杂，价格昂贵，这些检测技术目前只处于实验室研究阶段，尚不能在临床推广普及。因此，寻找一种经济、简便、准确的外周血胎儿有核红细胞分离及纯化方法是学者们仍在积极探索的问题。

孕妇外周血中FNRBC数量增加与脐动脉血流阻力增加有关，当孕妇并发其他可能影响胎儿胎盘血液供应的疾病时，其外周血中FNRBC数量增加。动态监测一些病理妊娠母血中FNRBC计数可以评估预测疾病发展程度，指导临床治疗。同时其数量的明显增加又可以更容易地获取，为孕妇外周血FNRBC在产前诊断中作用的研究提供更方便的实验条件。

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（本文编辑：赵丽洁）

R714.5

A

1007-3205（2013）02-0244-03

2012-06-04；

2012-06-25

王志宏（1967-），女，河北景县人，承德医学院附属医院副主任医师，医学硕士，从事妇产科优生优育研究。

*通讯作者

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.02.045