miR－338－3p通过调节细胞周期蛋白D1影响HBx缺失突变体（HBx－d382）介导的肝细胞增殖

乙型肝炎病毒（HBV）DNA整合和HBx蛋白缺失突变发生在HBV阳性肝癌患者中，HBx基因突变的C端缺失与肝癌发生密切相关。鉴于以前发现HBx－d382缺失突变体（缺失382～400 nt）可下调miR－338－3p表达，该研究旨在检测miR－338－3p在HBx－d382介导的肝细胞增殖中的作用。通过脂质体2000转染建立HBx基因表达的LO2细胞。转染miR－338－3p类似物或抑制剂至LO2／HBx－d382细胞和LO2／HBx细胞，miR－NC作为对照miRNA。电脑分析miR－338－3p潜在的靶蛋白，提示miR－338－3P可靶向细胞周期调节蛋白D1。为确认细胞周期蛋白D1受miR－338－3P的负调控，该研究构建了与miR－338－3p结合的细胞周期蛋白D1的3′非翻译区（3′UTR）野生型和突变体荧光素酶报告系统。通过荧光定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白免疫印迹法检测细胞周期蛋白D1表达，采用流式细胞仪、Ed U掺入法及软琼脂集落形成分析细胞增殖活性。结果显示，HBx－d382促进LO2细胞增殖，上调细胞周期蛋白D1表达。mi R－338－3p的表达抑制LO2／HBx－d382细胞（和LO2／HBx细胞）增殖，也下调细胞周期蛋白D1表达。在细胞周期蛋白D1的3′UTR区2个假定的miR－338－3p结合位点中，第2个位点（2 397～2 403 nt）是抑制所必需的。结果提示，MIR－338－3p可通过结合到细胞周期蛋白D1的3′UTR区2 397～2 403 nt，下调细胞周期蛋白D1表达。下调 miR－338－3p表达能促进LO2／HBx和LO2／HBx－d382突变的肝细胞增殖，而对LO2／HBx－d382细胞效果更显著。该研究阐明了一种新的机制，从一个新的mi RNA调控角度发现HBx基因缺失突变体比HBx蛋白具有更快诱导肝癌的倾向。

（Fu X，etal．PLoS One，2012，7（8）：e43204．）