於学良 顾瑶华 薛 璟 丁荣敏
丹参醋制工艺条件的研究
於学良 顾瑶华 薛 璟 丁荣敏
(江苏省苏州卫生职业技术学院,苏州215009)
目的 确定丹参醋制的最佳工艺条件。方法 利用正交试验为设计方案,考察丹参醋制的醋量、炮制时间、炮制温度3个因素,以丹参酮ⅡA的含量为评价指标对不同工艺条件醋制样品进行分析,优选醋制丹参的最佳工艺条件。结果 丹参醋制的最佳工艺条件为加醋量30%,炮制时间60min,炮制温度60℃。结论 最佳工艺不仅很好地保证了丹参酮ⅡA的含量,还节约成本和资源。
丹参;醋制;丹参酮ⅡA;正交设计
丹参为唇形科植物丹参(Salvia mihiorrhiza Bge)的干燥根和根茎。味苦,性微寒,归心肝经,是我国传统中医学中的一种常用中草药,具有活血祛瘀、止痛、清心除烦等功效,其脂溶性成分丹参酮ⅡA是治疗冠心病的主要有效成分之一[1]。《中药炮制经验集成》中收载的地方习用品有炒丹参、丹参炭、米炒丹参、酒丹参、醋丹参等[2]。不同的炮制方法、炮制工艺条件对丹参中有效成分的含量有很大的影响[3-4]。我们课题组前期实验表明[5],醋制丹参比酒制等其他炮制方法更能增加丹参中丹参酮ⅡA的含量。本实验依照《中国药典》(2010年版一部)丹参项下的含量测定方法,以丹参醋制品中丹参酮ⅡA的含量为依据,从加醋量、炮制时间、炮制温度三个方面对丹参醋制工艺条件进行考察,筛选最佳方案,为保留其中医药特色及临床用药指导提供参考与依据。
丹参购于苏州市天灵中药饮片厂。对照品丹参酮ⅡA(批号:10081642)由上海同田生物技术有限公司提供。甲醇(色谱纯),水为超纯水,其余试剂为分析纯,Aglient1100高效液相色谱仪(G1311A四元泵,G1315B DAD检测器,G1322脱气机,7725i手动进样器),Aglient化学工作站,KQ-500B超声波清洗器,Sartorius电子天平(型号:CP225D)。
2.1 醋制丹参的制备 考察的醋制因素包括:加醋量、炮制时间、加热温度,每个因素各考察3个水平,按L9(34)正交实验设计方案行丹参醋制,因素和水平如表1所示。醋制方法为:称取丹参饮片10g,加入不同体积的醋,搅拌均匀,然后闷润直至醋被吸收完全,放在不同温度的烘箱中烘烤,按照试验考察的时间炮制,结束后,取出放凉粉碎,过筛,测定丹参酮ⅡA含量。
表1 炮制工艺的因素水平表(%)
2.2 丹参酮ⅡA的含量测定方法
2.2.1 色谱条件 色谱柱:Zorbax SB-C18(250μm× 4.6mm,5.0μm);流动相:甲醇-水(75∶25);检测波长:270nm;流速:1.0 ml/min,柱温:25℃;进样量:20μl,在此条件下丹参酮ⅡA与其他成分得到良好分离,图1为丹参酮ⅡA对照品(A),醋制丹参(B)的HPLC图谱,峰1即为丹参酮ⅡA的色谱峰,保留时间约为27min。
图1 丹参酮ⅡA对照品(A),醋制丹参(B)的HPLC图谱
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮ⅡA对照品0.0108g于10mL量瓶中,加甲醇溶液定容至刻度,摇匀,配制成浓度为1.08mg/mL的丹参酮ⅡA对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 取醋制丹参2.0g(过三号筛),精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 ml,称定重量,加热回流1h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液过微孔滤膜(0.45μl)作为供试品溶液。
2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6ml,置于10ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,得浓度为0.0216、0.0432、0.0864、0.130、0.173mg/ml的一系列溶液,分别吸取20μl进样测定,以峰面积(A)为纵坐标,样品浓度(C)为横坐标线性回归,得丹参酮ⅡA的线性回归方程为A=-167.4+54840C(r=0.9999)。
2.2.5 精密度试验 取浓度为0.0864mg/mL的对照品溶液,重复进样5次,进样量为20μl,测定峰面积,丹参酮ⅡA的RSD为0.87%,精密度良好。
2.2.6 重复性试验 精密称取6份丹参醋制品,按2.2.3项下方法,制备,进样,测定峰面积,计算丹参酮ⅡA的含量,RSD为1.2%,结果表明该方法的重复性比较好。
2.2.7 稳定性试验 取醋制丹参供试品溶液,分别于0、2、4、6、8h进样记录色谱图,丹参酮ⅡA峰面积的RSD为1.5%,表明供试品溶液在8h内稳定。
2.2.8 回收率试验 精密称取已知含量的丹参醋制品6份,精密加入一定量的对照品溶液,按1.2.4项下方法制备,进样,测定峰面积,加样回收率为98.73%,RSD为1.5%。
2.2.9 样品测定 分别精密吸取对照品溶液和各供试品溶液各20μl,进样,测定,计算不同工艺条件下醋制丹参中丹参酮ⅡA的含量。
3.1 计算分析实验结果 不同工艺下醋制丹参饮片中丹参酮ⅡA含量结果见表2。正交实验数据采用直观分析和方差分析,结果表明,加醋量、炮制时间和炮制温度对结果均无显著性差异(P>0.05),由级差大小可知,影响醋制丹参中丹参酮ⅡA含量的因素主次顺序为A>B> C,通过比较各因素水平的丹参酮ⅡA含量得出最佳工艺条件为A2B1C1。但以成分得率为评价指标,认为丹参醋制最佳工艺为A2B2C3,因此需要通过正式实验对其进行验证。
表2 不同工艺条件下丹参酮ⅡA的含量测定结果(%)
3.2 验证性实验 为了与正交试验选出的最佳方案进行对比,用A2B1C1方案和A2B2C3方案进行验证性试验,结果显示丹参酮ⅡA平均含量分别为0.650%和0.461%,RSD分别为0.93%和1.05%(n=5),表明A2B1C1方案确实为最佳方案,即加醋量30%,炮制时间60min,炮制温度60℃。
由丹参的炮制历史沿革、炮制现状调研可知丹参炮制方法有酒炙、炒炭、麸炒、猪血制、醋制等,历史上酒炙应用更为普遍和广泛,文献也多为酒炙丹参的研究报道,鲜见醋制丹参的研究。我们课题组根据醋常用来炮制活血化瘀类中药以增强其祛瘀功效这一传统炮制理论,在前期实验的基础上,对丹参醋制工艺条件进行研究,为药材资源的合理利用、发挥最佳临床疗效提供参考依据。
丹参酮ⅡA是丹参中脂溶性活性成分的代表物质,是丹参抗菌消炎和活血化瘀的有效成分,多含在丹参外皮中,因此在实验过程中,药材必须粉碎完全并充分混匀,以免导致取样不均出现较大偏差而不能反映真实结果。从实验中我们可以看出炮制方案为A2B1C1时,丹参酮ⅡA的含量最高,说明此炮制工艺能够很好保证丹参的有效成分,提高醋制效率,节约成本和资源。
中药炮制是以中医理论为核心基础,根据辨证论治用药需要和药物自身性质差异,及调剂、制剂的不同要求,综合多方面因素采取的一项制药技术,对于提高中药临床应用疗效,降低或消除药物的毒性或副作用,改变或缓和药物的性能等具有重要作用。中药疗效的物质基础是其所含的有效成分决定的,由于成分多种多样,
常常一药多效,但通过合理的炮制处理,所含有效成分性质和含量会产生不同程度的改变,导致中药的药理作用增强、减弱或发生改变,因而临床效用也发生相应的变化,从而更好地发挥中药临床疗效,满足辨证论治的需要,因此炮制应围绕着临床的需要展开,故本实验将继续进行丹参醋制后的药效活性评价。
[1]黄喜汝,曹冬,詹文红.高效液相色谱法测定冠心丹参滴丸中3种脂溶性成分的含量[J].中国医药药学杂志,2006,26(9):105-1055.
[2]中医研究院中药研究所,北京药品生物制品检定所.中药炮制经验集成[M].北京:人民卫生出版社,1974:38.
[3]程立方,崔秀君.丹参不同炮制品中丹参酮ⅡA含量比较[J].中国现代中药,2009,11(5):41-43.
[4]常明泉,袁胜浩,黄良永,等.不同酒制工艺对丹参中丹参酮ⅡA含量的影响[J].中国药师,2010,13(12):1736-1737.
[5]顾瑶华,朱悦.丹参不同炮制品中丹参酮ⅡA的含量差异研究[J].中成药,2010,32(2):252-254.
Study on Processing Conditions of Vinegar-fried Salvia Miltiorrhizae
Yu Xueliang Gu Yaohua Xue Jing Ding Rongmin
(Suzhou Health College,Suzhou,Jiangsu Province,215009,China)
Objective To study the optimal vinegar-fried method for Salvia miltiorrhizae.Methods Orthogonal design was used with three key factors:quantities of vinegar,processing time and temperature.The optimal vinegar-fried method was screened on the basis of TanshinoneⅡAcontent.Results The optimal processing conditions are as follows:the quantities of vinegar is 30%,the processing time is 60min and the processing temperature is 60℃.Conclusion For the optimized processing method,the content of TanshinoneⅡAof processed saliva miltiorrhizae is high,and the resources are saved.
Salvia Miltiorrhizae;Vinegar-fried;TanshinoneⅡA;Orthogonal design
10.3969/j.issn.1672-2779.2013.21.080
1672-2779(2013)-21-0107-03
杨 杰
2013-07-21)