姜启娟 谭 纹 雷 雪 杨建龙 高 鑫 李庆玲
HPLC法测定舒泌通片中蒙花苷的含量
姜启娟1谭 纹2雷 雪2杨建龙2高 鑫2李庆玲2
(1吉林省通化市食品药品检验所,通化134000;2吉林省长春中医药大学,长春130117)
采用HPLC法测定舒泌通片中蒙花苷的含量。色谱柱:大连依利特C18(4.6×200mm,5μm),流动相:甲醇-水-冰醋酸(26∶23∶1),流速为0.8ml/min,检测波长:334nm。线性范围0.027~0.243μg,r=0.9999,平均回收率为100.03%,RSD为0.7%。本法操作简便、方法准确、重现性好,可用于该制剂的质量控制。
舒泌通片;蒙花苷;HPLC
野菊花为舒泌通片处方中的君药之一。野菊花为菊科植物野菊(Chrysanthemum indicum L.)的干燥头状花序。主要成份为蒙花苷、绿原酸、野菊花内酯等。具有清热解毒等作用。与本品的功能主治有密切关系。原标准以绿原酸为指标性成分,控制其制剂的内在质量,由于绿原酸不是野菊花的专属性成分,在很多药材中都含有,本文采用反相高效液相色谱法测定野菊花中特有成份蒙花苷的含量来控制本制剂的内在质量,方法简便,结果准确,重现性良好,更具有合理性。
日本岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪;BT 25 S型电子天平,BS110S型电子天平。
蒙花苷对照品(批号:111528-200606,产地:中国药品生物制品检验所);规格:供含量测定用,含量以98.3%计;甲醇为色谱纯,水为纯化水,其它试剂均为分析纯。
2.1色谱条件色谱柱:大连依利特C18(4.6mm× 200mm,5μm),流动相:甲醇-水-冰醋酸(26∶23∶1),柱温:室温,流速:0.8ml/min,进样量5μl,检测波长:334nm,理论板数按蒙花苷峰计算应不低于3000。
2.2对照品及样品溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备精密称取蒙花苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含25μg的溶液,即得。
2.2.2供试品溶液的制备取本品10片,除去包衣,研细,精密称取约0.3g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量,加热回流3小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.2.3阴性对照溶液的制备按处方比例配成不含野菊花的阴性对照样品,照供试品溶液的制备方法,制成阴性对照溶液。
2.3干扰实验照上述色谱条件,吸取上述三种溶液各5μl,分别注入液相色谱仪,进行测定。结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,有相同保留时间的色谱峰,而阴性对照样品溶液在此保留时间无干扰,见下图。
图 舒泌通片HPLC色谱图
2.4线性关系考察分别精密吸取对照品溶液1、3、5、7、9μl测定,以进样量和峰面积积分值进行回归,得到回归方程为Y=2439306x-1493,r=0.9999。结果蒙花苷在0.027~0.243μg范围内,呈良好的线性关系。
2.5精密度试验分别精密吸取同一供试品溶液5μl,注入液相色谱仪,连续进样6次,蒙花苷峰面积平均值为340553,其RSD=0.21%。
2.6稳定性试验分别精密吸取同一供试品溶液5μl,于0,2,4,8,12h进样,测定蒙花苷平均峰面积值为340260,其RSD=0.72%。
2.7重复性试验取同一批样品6份,按供试品溶液的制备方法制备、测定,结果蒙花苷每片平均含量为1.02mg,其RSD=0.78%。
2.8回收率试验精密称取已知含量的供试品 (含量为1.02mg/片)6份,分别精密加入对照品溶液(0.027mg/ml)20ml,依法测定结果见表1。
表1 回收率试验结果
如表1所示,测得蒙花苷的平均回收率为100.03%,RSD=0.7%。
2.9样品含量测定取3批样品,按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,依上述色谱条件测定含量,结果见表2。
表2 样品中蒙花苷含量测定结果 (n=4)
3.1流动相的选择参照《中国药典》2010年版一部野菊花项下含量测定的流动相甲醇-水-冰醋酸(26∶23∶1),结果分离效果较好,保留时间适度,因此,确定其为本法的流动相。
3.2提取方法的考察我们采用了甲醇超声提取;80%甲醇超声提取;甲醇加热回流提取;80%甲醇加热回流提取,经对比发现甲醇加热回流提取野菊花提取的既充分,干扰成分又少,同时我们又对加热回流的时间进行了考察,结果加热回流提取3小时比加热回流提取1小时的含量高,因此我们采用正文所述的供试品溶液的制备方法。
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社,2010:295.
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