妊娠母体不同阶段花生四烯酸乙醇胺水平变化分析＊

封玉玲，周海英，李家莉，苗加伟，李 晶△，周 敏

（1.重庆三峡医药高等专科学校病理教研室，重庆万州404120；2.重庆三峡中心医院，重庆万州404100；3.重庆三峡医药高等专科学校药理教研室，重庆万州404120；4.重庆医科大学附属第一医院妇产科，重庆400016）

内源性大麻系统的两种大麻素受体Ⅰ型大麻受体（cannabinoid receptor 1，CB1）和Ⅱ型大麻受体（cannabinoid receptor 2，CB2），在分娩过程中具有很好的止痛、镇静和抗炎的作用［1-2］。本文通过柱前衍生化高效液相色谱法（HPLC）分离，荧光检测器检测，测定妊娠女性血浆中内源性大麻受体（cannabinoid receptor，CBR）的内源性配体花生四烯酸乙醇胺（arachidonylethanolamide，anandamide，AEA）的变化，探讨内源性大麻素AEA在这一过程中可能扮演的角色。通过分析妊娠过程中血浆AEA水平发生的变化，为临床产科寻找新药提供思路和策略。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年10月至2011年3月在重庆医科大学附属第一医院妇产科产前检查和住院分娩的孕妇200例，其中年龄为（26.5±3.2）岁，孕周为（28.6±3.7）周。根据妊娠时间不同分为孕早期（5～12周），孕中期（15～28周），孕晚期（36～39周）及产前4个组，每组50例。所选对象按照全国统编教材《妇产科学》［3］提出的诊断标准进行筛选。此外，选择10名女性未孕的健康体检者为对照组，年龄22～28岁，平均24.9岁。近期体检合格，自愿参与本次研究。

1.2 方法

1.2.1 收集标本 所有孕妇取静脉血3.0mL，孕早期及孕中期组清晨体检时坐位抽取静脉血，孕晚期组入院后次日清晨采集空腹静脉血液；产前组于宫缩进入活跃期后抽取肘正中静脉血3.0mL；志愿者采血时间同孕晚期妇女时间。上述血样不同时间点采血后迅速转入加有肝素抗凝试管，-70℃保存待测。样品处理后用HPLC分离测定AEA水平。

1.2.2 血浆中AEA衍生化合物水平测定 分别取上面所得血浆样品，精密吸取3mL，装入含有肝素抗凝的试管中，加入甲苯0.5mL混悬器充分混匀2min，快速离心（10 000r／min）10min。微孔滤膜过滤，取1mL滤液（恒温20℃）氮气挥干后加入衍生化试剂DBD-COCl衍生化，HPLC测定样品AEA衍生化合物水平，外标法定量。本文采用的AEA衍生化法［4］经改进在1.05～52.70ng呈良好线性。当信噪比（S／N）＝3时，AEA-DBD-COCl衍生物的检测限为0.30ng。该方法中衍生物达到完全分离，没有明显内生杂质峰的干扰，具有较高的专属性。此外日内、间密度试验表明该方法稳定，准确可靠，适用于生物样品分析测定样品中AEA的水平。

1.3 统计学处理 所有实验数据采用SPSS11.0统计软件进行分析，计量资料以±s表示，样本均数比较进行t检验，以P＜0.01为差异有统计学意义。

2 结 果

孕早期开始到孕晚期，妊娠母体血浆中AEA水平具有一定降低趋势，孕中期及孕晚期孕妇血浆中AEA水平显著低于对照组女性静脉血浆中AEA，差异有统计学意义（P＜0.01）；临产孕妇母体血浆中AEA水平发生急剧升高，即刻孕妇静脉血浆中 AEA水平增加到（18.64±3.95）ng／L，并显著高于妊娠母体孕中、晚期血浆中AEA水平（P＜0.01），见表1。

表1 各组血浆中AEA水平比较（±s，ng／L）

表1 各组血浆中AEA水平比较（±s，ng／L）

＊：P＜0.01，与对照组比较；△：P＜0.01，与产前组比较。

组别n AEA对照组10 11.57±3.94孕早期组 50 10.32±1.51＊孕中期组 50 6.17±1.78＊△孕晚期组 50 5.51±2.66＊△产前组 50 18.64±3.95＊

3 讨 论

大麻主要有三大类：内源性大麻、人工合成大麻和天然植物中提取的大麻。而CBR在系统调节多种生理和病理的过程中发挥重要的作用，如控制饮食吸收、疼痛敏感度、炎症和认知等。有研究发现内源性大麻配体AEA在人体不同生理状态时发生改变，这些改变可能对人体具有一定保护作用［5］。女性在妊娠期间体内许多内源性小分子会发生显著性变化，对妊娠整个过程常具有非常重要的生理及病理学意义［6-7］。

本文结果显示，整个妊娠过程血中内源性大麻配体AEA水平发生显著改变，孕早期到孕晚期孕妇血中AEA水平呈逐渐降低趋势。有研究报道认为某些女性习惯性流产的原因可能与其孕前期体内AEA较高有关［8］。如缺失CB1大鼠由于缺乏CB1信号转导而导致早产高发生率的现象［9］，意味着大麻受体信号转导对人类早产可能产生类似影响。此外，AEA还具有调节子宫一氧化氮合酶活性作用［10］，AEA升高可能与孕妇的产程具有相关性，AEA水平升高越快产程越短。孕晚期母体血浆中AEA水平显著低于未孕女性，但在临产前母体血浆中AEA开始出现急剧升高，AEA有极高脂溶性，AEA发生变化意味着大麻受体CB1／CB2可能参与了整个妊娠过程并发挥作用。AEA在分娩时水平急剧升高，减少了子宫平滑肌等组织中前列腺素类的生物合成［11］（AEA水解产物为花生四烯酸和乙醇胺），而前列腺素对于分娩具有重要作用。大麻CB1／CB2受体及它们对应选择性脂肪酰胺水解酶广泛存在于子宫平滑肌、胎盘及胎盘膜，AEA参与了妊娠生理全过程，因此，有研究者认为它可能对怀孕／分娩具有重要调节作用。此外AEA可在子宫被合成，在羊水中也同样发现AEA的存在。

焦虑是妊娠期主要的精神障碍，孕妇分娩时往往伴有疼痛及焦虑情绪，甚至妊娠焦虑症。焦虑情绪不但危害孕妇的自身健康，也对胎儿产生极为不利的影响。精神情绪紧张、恐惧、疲劳增加了体内儿茶酚胺的分泌，儿茶酚胺进一步产生抑制宫缩作用。调节大麻CB1可以松弛子宫平滑肌，反馈性减少产妇体内儿茶酚胺的分泌，松弛子宫肌层，有助于子宫收缩。大麻受体CB2具有类似吗啡受体的镇痛作用，临产前AEA浓度急剧升高作用于大麻CB1／CB2受体，对于孕妇生产过程发挥了缓解情绪紧张、镇痛和助产等作用。毒品大麻素类物质可以产生令人愉悦的状态，包括虚幻的感觉、欣快感、镇痛、体温降低，引起短期记忆缺失等作用，分娩过程急剧升高的AEA在体内可能扮演了同样的角色。

大麻类提取物常被滥用，并产生不良精神症状和明显成瘾性，人们对于大麻药物认识和研究一直被这些负面因素所影响。妊娠过程中内源性大麻配体AEA水平发生显著改变，而这一变化可能意味着大麻系统在妊娠及分娩过程中发挥了作用，从这一角度来看，可能需要重新审视大麻类药物在临床妇产科的地位和意义。

［1］Ameri A.The effects of cannabinoids on the brain［J］.Prog Neurobiol，1999，58（4）：315-348.

［2］Dennedy MC，Friel AM，Houlihan DD，et al.Cannabinoids and the human uterus during pregnancy［J］.Obstet Gynecol，2004，190（1）：2-9.

［3］乐杰.妇产科学［M］.7版.北京：人民卫生出版社，2008.

［4］李晶，董志，乐乐乐.脑缺血／再灌注对大鼠脑内花生四烯酸乙醇胺浓度的影响及其机理初步研究［J］.激光杂志，2010，31（3）：93，96.

［5］Van Sickle MD，Duncan M，Kingsley PJ，et al.Identification and functional characterization of brainstem cannabinoid CB2 receptors［J］.Science，2005，310（5746）：329-332.

［6］Park B，Gibbons HM，Mitchell MD，et al.Identification of the CB1cannabinoid receptor and fatty acid amide hydrolase（FAAH）in the human placenta［J］.Placenta，2003，24（10）：990-995.

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［8］Sun X，Dey SK.Cannabinoid／endocannabinoid signaling impact on early pregnancy events［J］.Curr Top Behav Neurosci，2009，1（1）：255-273.

［9］Wang H，Xie H，Dey SK.Loss of cannabinoid receptor CB1 induces preterm birth［J］.PLoS One，2008，3（10）：e3320.

［10］Sordelli MS，Beltrame JS，Burdet J，et al.The effect of anandamide on uterine nitric oxide synthase activity depends on the presence of the blastocyst［J］.PLoS One，2011，6（4）：e18368.

［11］Mitchell MD，Sato TA，Wang A，et al.Cannabinoids stimulate prostaglandin production by human gestational tissues through a tissue-and CB1-receptor-specific mechanism［J］.Am J Physiol Endocrinol Metab，2008，294（2）：E352-356.