谭氏萎胃方治疗慢性萎缩性胃炎及其对细胞凋亡因子影响的研究

赵 鹏 谭明义 王新芳

（广东省中西医结合医院，佛山528200）

谭氏萎胃方治疗慢性萎缩性胃炎及其对细胞凋亡因子影响的研究

赵 鹏 谭明义 王新芳

（广东省中西医结合医院，佛山528200）

目的观察谭氏萎胃方治疗慢性萎缩性胃炎的临床疗效及其对细胞凋亡因子的影响，研究和探讨该方治疗慢性萎缩性胃炎的机理。方法将符合纳入标准的61例患者随机分为观察组31例、对照组30例，观察组给予谭氏萎胃方，对照组给予国家药典香砂六君子方，免煎颗粒剂冲服，每日2次。治疗前后分别检测两组患者胃黏膜的细胞凋亡指数、Fas蛋白、Bcl-2蛋白进行疗效评价。结果两组药物均能抑制患者胃黏膜上皮细胞Bcl-2蛋白的表达，促进Fas蛋白的表达，细胞凋亡指数增加，且谭氏萎胃方组较香砂六君子组疗效显著（P＜0.05）。结论谭氏萎胃方能有效促进慢性萎缩性胃炎患者胃黏膜上皮细胞凋亡，从而有利于促进胃黏膜异型增生的上皮细胞发生凋亡，可能是其逆转肠上皮化生，治疗慢性萎缩性胃炎的机理之一。

谭氏萎胃方；慢性萎缩性胃炎；细胞凋亡

慢性萎缩性胃炎（CAG）是一种临床常见病、多发病，该病病程长，症状反复难愈，以胃脘痞满、上腹痛、胃纳差、大便性状改变为主要临床表现，多归属于中医“胃痛”、“痞满”范畴［1］。病理学显示慢性萎缩性胃炎患者胃黏膜上皮和腺体萎缩、黏膜变薄、黏膜肌层增厚［2］。我院名中医谭明义主任医师，从多年脾胃病诊治经验中总结出谭氏萎胃方，主要针对广东岭南地区气候湿热、生活节奏快、工作压力大、居民多食海鲜、喜饮凉茶的饮食习惯，易形成脾胃虚弱夹湿证型进行配伍、治疗，在临床中取得很好的疗效。本课题针对谭氏萎胃方对慢性萎缩性胃炎患者胃黏膜细胞凋亡因子的影响进行研究，探讨该方治疗慢性萎缩性胃炎的机理，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料研究病例来源于广东省中西医结合医院消化内科门诊及病区的患者，年龄18～65岁，中医诊断为脾胃虚弱夹湿型痞满病，西医诊断为慢性萎缩性胃炎的患者，采用随机数字表法，按就诊顺序分为观察组和对照组。排除有过多兼夹证或明显兼夹证者、辨证不明和全身其他系统疾病者。选取经电子胃镜检查诊断为慢性萎缩性胃炎，且病理活检确诊的患者，胃镜在治疗前、后各做1次，复查胃镜进行活检时尽可能在原病变部位。

1.2治疗方法试验包括2周基线期、6周治疗期。观察组予谭氏萎胃方（党参、白术、茯苓、荷叶、布渣叶、徐长卿等），采用免煎颗粒剂冲服；对照组予国家药典香砂六君子方，每日2次。试验期间不得使用对本病本证有治疗作用的其他药物。

1.3主要试剂Bcl-2、Fas免疫组化药盒由美国Santa-Cruz公司生产；二氨基联苯胺（DAB）药盒由北京中山生物技术有限公司生产；TUNEL药盒由德国ROCHEB.M公司生产；磷酸盐缓冲液（PBS）由广州东盛生物科技有限公司提供。

1.4主要设备无菌操作台（苏州佳宝净化工程设备有限公司）、电热恒温培养箱（上海光学仪器厂）、光学显微镜（OLYMPUSCX42-12C02）。

1.5检测方法

1.5.1 TUNEL细胞凋亡检测标本切片脱蜡，蛋白酶K（20μg／ml）室温孵育30min，PBS冲洗5min，共2次，加入50ul TUNEL反应液，湿盒37℃孵育60min，PBS冲洗5min，共3次，加入50ul转化剂-酶标抗荧光素抗体（POD），湿盒37℃孵育30min，PBS冲洗5min，共3次，加入50ul DAB染色，室温孵育10min，PBS冲洗5min，共3次，封片，镜检。细胞核呈棕褐色染色者为阳性凋亡细胞。每张切片油镜下至少观察600个细胞，计算每百个细胞中的阳性细胞数即凋亡指数（AJ）。

1.5.2 Bcl-2蛋白和Fas蛋白检测Bcl-2蛋白检测：标本切片脱蜡，PBS冲洗5min，0.3%H2O2甲醇孵育10min，室温PBS冲洗5min，共3次，浸入0.1mmol／L，p H6.0的柠檬酸磷酸盐中，煮沸15min，加入10%健康羊血清，37℃湿盒孵育20min，吸去羊血清，加入1∶50的兔抗大鼠Bcl-2多抗，37℃湿盒孵育60min，PBS冲洗5min，共3次，加入1∶2000的抗兔IgG，37℃湿盒孵育30min，PBS冲洗5min，共3次，用H2O2处理的0.05% DAB染色，镜下观察控制显色，显色后净水冲洗2min，封片。Fas蛋白检测：初次加入的抗体为1∶50稀释的兔抗大鼠Fas多抗，其余步骤同Bcl-2免疫组化染色。结果：以上皮细胞核、细胞质出现棕色颗粒为Bcl-2蛋白、Fas蛋白表达阳性；Bcl-2蛋白阳性程度判断标准：按染色强度分为强阳性（+++）、中等阳性（++）、弱阳性（+）、阴性（-）。

1.6统计分析用SPSS13.0统计软件建立数据库、录入数据及统计分析。正态分布的计量资料以χ±SE表示，自身前后比较或组间比较采用t检验，方差不齐时采用t’检验。检验水准α=0.05，双侧检验。

2 结果

结果显示治疗前基线期两组患者细胞凋亡指数组间比较无显著性差异（P＞0.05）。治疗后谭氏萎胃方组患者上皮细胞凋亡指数比治疗前显著升高（P＜0.05），也比对照组治疗后显著升高，组间比较有显著性差异（P＜0.05）（见表1）；谭氏萎胃方组Bcl-2蛋白阳性率明显下降、Fas蛋白阳性率明显升高，组间比较有显著性差异（P＜0.05）（见表2）。

表1 两组治疗前后细胞凋亡指数情况比较

表1 两组治疗前后细胞凋亡指数情况比较

注：经t检验。与对照组比较*P＜0.05

细胞凋亡指数观察组治疗前组别n 30 23.31±16.68 31 20.62±12.49治疗后31 43.27±18.83*对照组治疗前30 21.86±13.03治疗后

表2 两组治疗前后细胞Bcl-2、Fas蛋白表达情况比较

表2 两组治疗前后细胞Bcl-2、Fas蛋白表达情况比较

注：经t检验。与对照组比较*P＜0.05

Fas观察组治疗前组别n Bcl-2分级表达-++++++ Bcl-2阳性率31 6 6 10 9 80.6 11.68±8.95治疗后31 20 8 2 1 35.5*31.29±11.80*对照组治疗前30 7 5 12 6 76.7 12.03±8.31治疗后30 12 8 5 5 60.0 21.91±10.36

3 讨论

结果显示在慢性萎缩性胃炎患者胃黏膜中存在Bcl-2蛋白过度表达，谭氏萎胃方组患者治疗后细胞凋亡指数比治疗前显著升高，也比对照组治疗后显著升高；Bcl-2蛋白表达显著下降；Fas表达显著升高，细胞凋亡指数增加，从而有利于促进胃黏膜异型增生的上皮细胞发生凋亡，且疗效优于香砂六君子方组。结果提示谭氏萎胃方能有效促进慢性萎缩性胃炎患者胃黏膜上皮细胞凋亡，从而有利于促进胃黏膜异型增生的上皮细胞发生凋亡，可能是其逆转肠上皮化生，治疗慢性萎缩性胃炎的机理之一。

细胞凋亡是由基因调控而发生的细胞自我消亡，肿瘤形成的其中一个环节就是诱导相关调控基因发生突变，抑制凋亡基因的表达使凋亡不足。慢性萎缩性胃炎的细胞凋亡指数以胃黏膜肠化生为分界点，在前半阶段，随病变的加重凋亡指数逐渐上升，在后半阶段则随病变的加重而下降，而细胞增殖指数在整个演化序列中，一直处于逐步上升状态［3］。说明在该病的初始阶段，胃黏膜细胞的凋亡与增殖同时增加，黏膜内细胞积聚不明显，病变继续发展则细胞凋亡开始下降，黏膜内的细胞积聚增加，最终导致癌变形成。

中医认为慢性萎缩性胃炎的病位在胃，以脾胃为病变中心，可涉及肝胆肾等脏腑。初期多为实多虚少，实证为主，忧思郁怒，肝郁气滞，或肝气犯胃，肝胃气滞；饮食不节，损伤脾胃，食积内停，胃气壅滞；外邪犯胃，邪遏中阻，胃气痞塞。后期以虚为主，虚实夹杂。肝郁气滞，淤血内停；肝郁化火，脾失健运，水湿停滞化热，热邪伤阴，均致胃阴不足，甚至肝肾阴虚。病延日久，失治误治可致脾胃虚弱、中气下陷甚至脾肾阳虚。本虚多为脾胃气虚、阳虚、阴血不足，标实则为气滞、血瘀、湿阻、痰凝、热毒［4］。

谭明义名中医认为岭南地区慢性萎缩性胃炎的病因病机有其独特的地域特点，该地区气候湿热、居民多食海鲜、喜饮凉茶，易致脾胃虚弱，运化水谷失职，水反为湿，聚而为病，湿邪困阻脾胃，或内湿化热，湿性秽浊，久蕴成毒，治疗当以健脾为主，以健脾祛湿，调中祛瘀为法。在多年临床经验基础上总结出的谭氏萎胃方治疗慢性萎缩性胃炎取得了很好的临床疗效。本研究从细胞凋亡的角度对谭氏萎胃方的治疗机理进行研究，证明该方能有效促进此类患者胃黏膜上皮细胞凋亡，从而有利于促进异型增生细胞的凋亡，有利于逆转肠上皮化生，具有重要的治疗意义，值得进一步研究及临床推广。

［1］余绍源，刘茂才，罗云坚，等.中西医结合内科学［M］.北京：科学出版社，2003：333.

［2］宓晓鸣，戴晓波，陆一峰.幽门螺杆菌感染与慢性萎缩性胃炎病理改变的相关性［J］.徐州医学院学报，2008，28：806-808.

［3］许岸高，李韶光，刘集鸿.胃癌癌前病变演化与细胞凋亡和增殖的关系［J］.中华医学杂志，1999，3（79）：185.

［4］田德录，唐旭东.近十年中医药治疗慢性萎缩性胃炎临床研究述评［J］.新消化病学杂志，1993，1（1）：8-12.

姜维庙的“祠联”

四川省剑阁县有一座姜维庙，祠内有一副对联，不知出自何人之手，却很好地概括了姜维这位威武将军的一生，同时寄予无限惋惜之情。

联云：

雄关高阁壮美观，捧出热血，披开大胆；

剩水残山余落日，虚怀远志，空寄当归。

若不熟悉当时历史，可能很难理解这副对联。蜀汉后主刘禅，人称“扶不起来的阿斗”，怯弱无能，竟投降了魏将邓艾，并命姜维出降。姜维拗不过主公，假投魏将钟会，以图东山再起，重建蜀业。不期计谋未成，却被魏军内乱所杀，并且死后被剖腹挖心，发现他的胆特别大。《三国志·蜀书》中就有姜维“胆大如斗”的记载，这就是上联中“捧出热血，披开大胆”意思。

下联“虚怀远志，空寄当归”，指姜维降蜀后，其母尚在魏，因思念儿子，信寄中药当归，暗示儿子回归魏土。姜维是个孝子，本应听母训，但受诸葛亮重托，胸怀统一中原的大志，故在信中寄去中药远志，信称：“良田百顷，不在一亩；但在远志，不在当归。”

姜维虽有远志，但未遇良主，最后连自己也被剖腹挖心，实在可叹可悲。清朝末年，湖北省名医何九香先生，运用这一典故，自题药店门联：独有痴儿惭远志；更无慈母望当归。一语双关，耐人寻味。

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.13.107

：1672-2779（2013）-13-0158-02

吴义红

2013-05-25）