液相色谱串联质谱法测定饲料中尼卡巴嗪的含量

2013-02-20 03:03:42金晓峰章厉劼

饲料工业 2013年3期

■金晓峰章厉劼

(贵州省饲料监察所，贵州贵阳 550003)

尼卡巴嗪(Nicarbazin),别名球虫净，是一种广谱抗球虫药物，常用于饲料药物添加剂，具有较强的球虫病防治作用[1-2]，禽类对尼卡巴嗪的抗药性产生相当缓慢，是目前较少受到球虫抗药性困扰的几种药物之一[3-4]。同时，它还具有良好的促进禽类生长发育的作用，因此，被广泛应用于禽类的饲养[5]。但是，尼卡巴嗪在禽肉及禽蛋中的残留，是食品安全的一项严重隐患，目前尼卡巴嗪药物残留已被列为我国禽肉出口检验的重要内容之一。国家农业部也明确指示，要进一步完善饲料质量标准，重点是饲料卫生标准和检测方法。并明确规定了饲料中尼卡巴嗪的最大允许添加量[6]。

尼卡巴嗪(Nicarbazin)为两种单一成分4，4’-二硝基碳酰替苯胺(DNC)和α-羟基-4，6-二基嘧啶(HDP)组成的1∶1复合物。为黄色或黄绿色粉末，无臭，稍具异味。在乙腈、二甲基甲酰胺中微溶，在水、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、乙醚中不溶。而国外有关文献报导，主要起驱虫作用的是DNC，而HDP只是辅助作用，但是当二者1∶1组合时，驱虫效果最好[7]。因此，本方法以DNC为标示物对尼卡巴嗪的含量进行测定(化学结构式见图1)。

图1 DNC化学结构式

目前，已报道的饲料中尼卡巴嗪的检测方法主要有分光光度检测方法[8]、高效液相色谱法[1-2，5-6]。我国也于2003年颁布了《GB/T 19423—2003饲料中尼卡巴嗪的测定高效液相色谱法》的检测标准。但是目前国内还没有使用液相色谱-串联质谱进行确证检测的标准方法报道。因此，本文旨在建立一种操作简便、快速，结果稳定、可靠的LC-MS/MS方法，以保障对饲料中尼卡巴嗪残留的确证检测。

1 材料与方法

1.1 试剂

DNC对照品：德国WITEGA，含量98.5%；

DNC-D8对照品：德国WITEGA，含量98.0%；

NN-二甲基甲酰胺：色谱纯；

乙腈：色谱纯；

甲醇：色谱纯；

甲酸：色谱纯；

无水硫酸钠：分析纯；

正己烷：分析纯；

试验用水均为超纯水。

1.2 仪器设备

液相色谱串联质谱仪：美国Waters UPLC PremierXE；

高速冷冻离心机：德国SIGMA 3K15；

电子分析天平：瑞士METTIJER AB104-S；

氮吹仪：美国Reacti-Therm III；

振荡器：德国GLF 3005；

超声波清洗机：上海冠特SG5200HPT。

1.3 标准溶液的配制

1.3.1 分别精密称取DNC及DNC-D8对照品适量，用NN-二甲基甲酰胺分别配制得到含DNC浓度为1 mg/ml的储备液及含DNC-D8浓度为1 μg/ml的内标物储备液。

1.3.2 将DNC-D8内标物储备液稀释为20 μg/l的内标物工作液。

1.3.3 分别精密量取适量的DNC储备液，制得浓度为10、20、50、100、200、500、1 000 μg/l（含内标为100 μg/l）的标准工作曲线。

2 DNC的分析过程

2.1 饲料中DNC的提取

准确称取2 g左右经粉碎的饲料于50 ml离心管中，加入 20 μg/l的内标物工作液 200 μl，加入2.0 g无水硫酸钠、10.0 ml乙腈，振荡器上振荡10 min，超声提取10 min。10 000 r/min离心10 min，收集上清液。

2.2 提取液的净化

将上述溶液在40℃下氮气流吹干，加入75%甲醇水溶液饱和的正己烷1.0 ml，涡旋1 min，再加入75%甲醇水溶液1.0 ml，涡旋1 min，40℃下静置分层，弃去上层溶液，用75%甲醇水溶液饱和的正己烷1.0 ml再洗涤1次，40℃下静置分层，取下层清液过0.22 μm滤膜后供液相色谱串联质谱仪分析。