潜在血源传播梅毒患者血清抗体检测方法的筛选

朱建锋，卢勤红，熊逸群，孙爱华

2.宁波市李惠利医院检验科，宁波 3151002；

3.浙江医学高等专科学校，杭州 310053

梅毒（syphilis）是梅毒螺旋体（Treponemapallidum）感染引起的一种慢性接触性传染病，梅毒螺旋体可通过血液传播、性传播和母婴垂直传播[1－3]。建立高灵敏度、特异性且廉价的方法用于产妇、输血或（和）手术患者等潜在血源患者血清梅毒抗体检测，对于阻断梅毒传播、及时发现梅毒感染者有重要意义。

1 材料与方法

1.1 标本来源 24 580例产妇、输血或（和）手术患者等潜在的血源传播患者血清标本及60例类风湿性关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）等免疫系统疾病病人血清标本，收集自宁波市鄞州第二医院和宁波市李惠利医院；TPPA检测结果阴性无梅毒治疗史，无性病史的健康人血清标本200例来自宁波市鄞州第二医院正常体检人群，上述标本采集时均获得病人或体检者的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 梅毒筛查试验 ELISA试剂盒购英科新创（厦门）有限公司，rTpN15－17－47－ELISA所需包被抗原及检测方法按文献[4]。

1.2.2 方法灵敏度检测 对 ELISA 法和／或rTpN15－17－47－ELISA 法 阳 性 血 清 标 本 进 行 ELISA、rTpN15－17－47－ELISA双孔复查试验和TPPA确定试验，以确定ELISA和rTpN15－17－47－ELISA方法的灵敏度。TPPA试剂盒购自日本富士公司。

1.2.2 方法特异性检测 ELISA 和rTpN15－17－47－ELISA分别检测200例TPPA检测结果阴性无梅毒治疗史，无性病史的健康人血清，60例类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等免疫系统疾病病人血清标本，以确定ELISA和rT－pN15－17－47－ELISA方法的特异性。

1.3 检测结果的分析和比较 采用Stata 8.0统计学软件中的χ2检验，对不同检测方法的检测结果进行比较，P＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 ELISA 和rTpN15－17－47－ELISA 检出率比较24 580例潜在的血源传播患者血清ELISA法和rTpN15－17－47－ELISA检测分别有1 453例和1 501例结果阳性，阳性检出率分别为5.9%和6.1%，χ2检验两种方法的阳性检出率无统计学意义（χ2＝0.8，P＞0.05）。

2.2 ELISA 和rTpN15－17－47－ELISA 方法的灵敏度比较 所有ELISA法和／或rTpN15－17－47－ELISA检测结果阳性标本1522例进行ELISA、rTpN15－17－47－ELISA双孔复查和TPPA确定试验，结果以TPPA确定试验为金标准，1 522例样本TPPA检测结果为阳性1 480例，ELISA和TPPA确定试验同为阳性1 439例，rTpN15－17－47－ELISA和 TPPA确定试验同为阳性1 470例，ELISA法和rTpN15－17－47－ELISA方法的灵敏度分别为97.2%和99.3%，方法的灵敏度有统计学意义（χ2＝19.6，P＜0.05）

2.3 ELISA 法和rTpN15－17－47－ELISA 方法的特异性比较200例无梅毒治疗史、无性病史的健康人血清标本，60例类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等免疫系统疾病病人血清标本，ELISA、rTpN15－17－47－ELISA和TPPA三种方法检测结果均为阴性、特异性为100%。

3 讨 论

梅毒检测国家卫生部明文规定为献血员体检输血传播性疾病4项必检项目之一，研究表明潜在的血源传播患者抗体的阳性率远高于无偿献血者，血液传播是梅毒主要传播途径之一，近年因梅毒感染而导致的医疗纠纷时有发生，因此选用了灵敏度、特异性高的梅毒检测方法尤其重要。

梅毒血清测试方法有采用心磷脂抗原的非特异性的血浆反应环卡片试验（RPR）、甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）等，这些方法共同特点是灵敏度和特异性较差，存在血清阳性抗体漏检，有少数RA、SLE、慢性迁延性肝炎等病人血清可呈现阳性检测结果[4－5]。TPPA可测出病人血清中微量的梅毒螺旋体特异性抗体，有较高敏感性和特异性，但需制备大量梅毒螺旋体抗原，鉴于目前制备梅毒螺旋体抗原方法限制此方法成本太高，一般只作为确认试验而不用于实验室筛查。近年浙江省多数医院利用商品化ELISA试剂盒对血源与受血者血清进行梅毒抗体筛查，其灵敏度与特异性明显高于RPR、TRUST等方法，但与TPPA比其特异性仍有待改善。本研究采用孙爱华教授建立的rTpN15－17－47－ELISA检测24 580份潜在的血源传播患者血清标本，结果表明方法的灵敏度为99.3%明显高于商品化ELISA试剂盒（97.2%）（p＜0.05）；另用rTpN15－17－47－ELISA检测200例正常健康对照人群与RA、SLE等免疫系统疾病病人血清梅毒抗体，发现rTpN15－17－47－ELISA检测免疫系统疾病病人血清梅毒抗体特异性与TPPA一致均为100%。上述结果表明rTpN15－17－47－ELISA法不仅能有效防止血清梅毒抗体受血者漏检且能有效防止免疫系统疾病假阳性发生，对于控制医疗纠纷有重要作用值得推广应用。

[1]Centers for Disease Control and Prevention，Workowski KA，Berman SM.Sexually transmitted diseases treatment guidelines，2006[J].MMWR Recomm Rep，2006，55（36）：997－1002.

[2]Manacvi K，Young H，McMillan A.The sensitivity of syphilis assays in detecting different stages of early syphilis[J].Int J STD AIDS，2006，17（11）：768－771.

[3]Ebel A，Bachelart L，Alonso JM.Evaluation of a new competitive immunoassay（BioElisa Syphilis）for screening forTreponemapallidumantibodies at various stages of syphilis[J].J Clin Microbiol，1998，36（2）：358－361.

[4]Sun AH，Fan XL，Mao YF，et al.Comparison of serological detection effects of ELISA using rTpN17or rTpN47ofTreponema pallidumas antigen with that of TPHA and TRUST[J].J Zhejiang Univ（Med Sci），2008，37（1）：67－72.（in Chinese）

[5]Serwin AB，Chodynicka B.Serological diagnosis of syphilis－current problems and controversies[J].Przegl Epidemiol，2009，63（4）：519－523.（in Polish）