高效液相色谱法测定化痔灵片中没食子酸含量

刘 源，沈好文

(江苏省镇江药品检验所，江苏 镇江 212003)

高效液相色谱法测定化痔灵片中没食子酸含量

刘 源，沈好文

(江苏省镇江药品检验所，江苏 镇江 212003)

目的测定化痔灵片中没食子酸含量，建立一种灵敏度高、重现性好的检测方法。方法使用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，采用甲醇－0.1%磷酸溶液(10∶90)为流动相，检测波长273 nm，柱温为30℃，流速为1.0 mL/min。结果没食子酸质量浓度在3.25 ～16.27 μg/mL 范围内与峰面积有良好线性关系(r=1.000)，平均回收率为 100.17%，RSD=0.94%(n=6)。结论该法灵敏、简便、准确、重现性好，线性关系良好，可作为制剂质量控制的的指标之一。

化痔灵片;没食子酸;高效液相色谱法;含量测定

化痔灵片[1]主要由黄连[2]、琥珀、苦地胆、三七、五倍子等12味 传统中药组方，有凉血、收敛、消炎的功效，用于内外痔疮。本品是有10多年生产历史的中药复方制剂，疗效确切，市场需求量大。五倍子[3]为方中主药，没食子酸为五倍子中鞣质主要成分。为更好控制化痔灵片质量，现采用高效液相色谱法对制剂中没食子酸含量[4－5]进行测定，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪;AG245型电子天平(瑞士梅特勒公司);UV－2401PC型紫外分光光度计。没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110831－200302);甲醇为色谱醇，其他试剂(AR级);化痔灵片(吉林长春制药有限公司，批号为 090810，100101)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 －0.1%磷酸溶液(10 ∶90);柱温:30 ℃;进样量:10 μL;检测波长:273 nm。理论板数按没食子酸计算应不低于3 000。

2.2 溶液制备

称取没食子酸对照品10.17 mg，置50 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，精密量取5 mL溶液，置25 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为对照品贮备液;精取溶液2 mL，置10 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取样品装量差异项下供试品，研细，取一片量，精密加入4 mol/L的盐酸溶液50 mL，水浴中加热水解3.5 h，放冷，滤过，精密量取续滤液1 mL，置100 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，作为供试品溶液。取不含五倍子的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取2.2项下3种溶液，依法进样测定。结果表明，阴性对照品溶液对测定无干扰。高效液相色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:分别精取对照品贮备液 2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置25 mL容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀。精密取10 μL进样，以峰面积为纵坐标、对照品质量浓度(g/L)为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=30.145 X+0.065 9，r=1.000。结果表明，没食子酸质量浓度在 3.25 ～ 16.27 μg/mL范围内与峰面积有良好线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液，按拟订的色谱条件连续进样6次。结果的 RSD为1.18%，表明进样精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，12 h 时进样测定并计算。结果含量的 RSD为0.36%，表明12 h内溶液稳定性良好。

重现性试验:取同一批号样品6份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果没食子酸平均含量为 0.125 mg/片，RSD为0.34%，表明方法重现性良好。

加样回收试验:分别称取已知含量的样品适量，精密加入对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量。结果见表1。

表1 没食子酸加样回收试验结果

2.4 样品含量测定

取2.2项下供试品溶液和对照品溶液，各进样10 μL，以峰面积按外标法计算含量。结果没食子酸的含量分别为36.61，35.40 mg/片，平均 36.00 mg/片。

3 讨论

曾比较甲醇－0.1%磷酸溶液(15∶85)和甲醇 －0.1%磷酸溶液(10∶90)为流动相时的效果，前者因甲醇量较多且出峰太快使峰难分开。化痔灵片中还有黄连、琥珀、槐花等其他成分，使分离效果不好。用后者为流动相，没食子酸出峰时间比较合适，且能与他成分峰分开，可以测定样品中没食子酸含量。

曾比较用50%甲醇和用流动相稀释2.2项下的溶液，结果表明在用流动相稀释的溶液中的最大吸收波长，在高效液相色谱法中，选择其附近的273 nm作为检测波长时，响应值最大，灵敏度最高，故选择273 nm作为测定波长。

[1]WS3－B－2294－97，卫生部药品标准·中药成方制剂(第十二册)[S].

[2]蔡小玲，秦贻强.HPLC法测定化痔灵片中盐酸小檗碱的含量[J].中国民族民间医药，2010(13):18－24.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:62.

[4]许乾丽，茅向军，熊慧林，等.HPLC测定宁泌泰胶囊中没食子酸的含量[J].中成药，2001(9):19－21.

[5]张建民，关 晶，徐萧槿.高效液相色谱法测定利水通淋软胶囊中没食子酸含量[J].中国药业，2009，18(21):40－41.

Determination of Gallic Acid in Huazhiling Tablets by HPLC

Liu Yuan，Shen Haowen
(Zhengjiang Municipal Institute for Drug Control，Zhenjiang，Jiangsu，China 212003)

ObjectiveTo establish highly sensitive and better reproductive determination method by determining the gallic acid content in Huazhiling Tablets.Methods The Shimadzu C18column(250 mm × 4.6 mm，5 μm)was used with methanol－ 0.1% phosphoric acid(10 ∶90)as the mobile phase，the detecting wavelength:273 nm，the column temperature:30 ℃ and the flow rate:1.0 mL/min.Results The linear relationship was good in the range of 3.25 － 16.27 μg/mL(r=1.000)，the average recovery rate was 100.17% ，RSD=0.94%(n=6).Conclusion This method is sensitive，simple and accurate with good repeatability and good linearity，and can be used as one of criteria for the quality control.

Huazhiling Tablets;gallic acid;HPLC;content determination

R284.1;R286.0

A

1006－4931(2013)08－0056－02

2012－05－21;

2012－10－16)