涂小红 黄玉婷 蔡粤川 何跃 彭顺林
慢性咽炎是一种临床常见病、多发病,是咽部黏膜、黏膜下组织及淋巴组织的慢性炎症。属上呼吸道感染的一部分,临床发病率高,易反复发作。动物模型作为人类疾病的替身在药物疗效评价上担当着非常重要的角色,为了使动物模型与人类的疾病具有更高的临床相似性,实验动物的选择、模型的建立及标本的制备就显得格外重要。导师彭顺林教授采用氨水和松节油复合因素塑造日本大耳白家兔慢性咽炎动物模型的方法,符合慢性咽炎动物模型的生物学特征,被广泛应用于咽炎动物模型的制备,现将彭顺林教授的咽炎造模法与其他慢性咽炎造模法总结如下:
彭顺林[2]教授选用日本大耳白家兔为实验动物,随机分组后,造模组与实验组第1 ~ 15 日均用2.5%氨水喷咽部,在第8 日于兔咽部粘膜下注射0.5mL 松节油。造模组于造模的第16日处死;自然恢复组第16 ~ 25 日让其自然恢复,第26日处死;治疗组第16~25日咽部喷治疗药物,第26日处死;空白对照组第1~15日用蒸馏水(与造模组同体积)喷咽部,第16~25用蒸馏水喷咽部,第26日处死。
将家兔股动脉放血处死后,取咽部组织立即投入10%甲醛液内固定,继之经由低到高各级酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋连续切片(厚度6 üm),每10 张随机取样片一张,每只动物标本共计3 张,然后脱蜡染色,HE、常规苏木精、伊红染色,在光学显微镜下观察。[2]
关于慢性咽炎造模大多采用氨水喷咽、松节油咽部粘膜下注射的方法,在造模过程中,实验者根据自己的需求调整氨水的浓度,每次使用的剂量及造模时间。而实验组基本采用蒸馏水或生理盐水喷咽。王颍[1]用2.5%氨水喷兔咽部1 次,每次用喷雾器喷3 揿(每揿约0.08ml);空白对照组喷3揿生理盐水,各组均连续喷13天。造模第8天,除空白对照组外,其余各组大鼠用扁桃体注射针将松节油注射于兔咽部黏膜下,每只动物注射0.5ml。造模第14天,兔咽部组织呈慢性充血状态,暗红色、黏液性分泌物增多,明显肿胀为造模成功。高瑞宁[3]组用喉头喷雾器于动物咽部喷15%氨水,每次喷3掀,每天上、下午各1次,连续3 d,造成急性咽炎模型。空白对照组动物喷等量蒸馏水。于第4天各组动物按表1剂量相应给药,每天1次,连续3 d天。第7 d断尾取血涂片,各组动物取血涂片后,股动脉放血处死动物,立即取咽部黏膜及其下组织,进行肉眼观察,并10%中性福尔马林溶液固定,进行病理组织学检查。
本人跟随导师彭顺林教授坐诊两年余,诊治咽炎患者上千例,其中以慢性咽炎者居多,以异物感、咽干、咽痒、咽痛、咳嗽、咳痰为主,病情易反复发作,迁延不愈。虽不危及生命,但却不同程度影响患者的工作、学习及生活。近年来,医家对咽炎模型的实验研究较多,但大多都在彭氏[2]造模法的基础上进行改造创新,彭氏造模法即用氨水在咽部喷雾和松节油在其粘膜下注射的方法研制慢性咽炎的动物模型。氨水是碱性刺激物质,局部喷雾能刺激咽部粘膜,使之充血水肿,反复刺激能使粘膜逐渐转化为慢性炎症。松节油是一种油质化学因子,在咽粘膜下注射,让组织对其缓慢吸收,能达到对咽局部持续刺激的作用,符合人慢性咽炎的发病因素。故未来我们在慢性咽炎造模方式上可继续采用彭氏造模法,并不断完善及创新,使其更符合人类发病特征。
[1] 王颍.陈皮利咽合剂对慢性咽炎模型家兔全血黏度咽黏膜的影响[J].中医杂志2013,6(54):12.
[2] 彭顺林,钟渠,熊大经,等.慢性咽炎动物模型研究[J].成都中医药大学学报,1999,22(1):51.
[3] 高瑞宁.清咽喷雾剂对急性咽炎治疗作用的实验研究[J].中医研究,2009,22(1).