人胃腺癌组织中MMP-9及其与临床病理因素的关系的研究

何健 漆兴芝 樊松 李丽华

在我国，胃癌化疗效果不佳，晚期胃癌化疗一线有效率在30%左右，目前为止还没有标准的一线、二线化疗方案，近几年分子靶向药物在肺癌、乳腺癌、淋巴瘤等肿瘤方面的成功，为胃癌的治疗提供了新的思路。特异性强的分子靶向治疗是近年来用于胃癌治疗的新方法。胃癌分子标记物，对于早期发现胃癌，提高胃癌的疗效和延长患者生存期有重要的临床意义。人类基质金属蛋白酶9(MMP9)基因位于染色体20q12～q13，通常情况下，它在正常胃组织中表达量极少。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2011年2月至2012年7月在本院行胃腺癌手术的59对患者的术后蜡块和临床病理资料，每例均有距胃肿瘤组织至少3 cm以上的正常胃组织作为对比。每位患者均未行术前介入治疗及放、化疗。

1.2 方法 采用MaxVisionTM2/HRP法检测癌及正常胃组织中的 MMP9。切片先脱蜡、水化，再加热，然后流水冷却。加过氧化物酶阻断试剂，再加一抗置湿盒内，加 MaxVisionTM2/HRP试剂，室温下孵育15分。显色、苏木素复染1 min，树胶封固。采用美国Sigma-Aldrich公司提供的阳性病理切片作为阳性对照。

1.3 结果判定 双盲下，由本院病理科的2名副主任医师行阅片判断。在光学显微镜下(×400)10个视野计数，每视野计数100个细胞。细胞核或胞浆内出现淡黄色、黄棕色、褐棕色颗粒判为阳性细胞。根依据阳性细胞着色的强弱和阳性百分比率两个方面进行判别：(1)无染色为0分;浅黄色为1分;黄棕色为2分;褐棕色为3分(2)无阳性为0分;阳性细胞百分比率≤25% 为1分;阳性细胞百分比率26%～50% 为2分;阳性细胞百分比率51% ～75% 为3分;阳性细胞百分比率≥76% 为4分。两种判断评分相加后，按0～1分判为(-)，2～3分判为(+)，4～5分判为(++)，6～7分判为(+++)的标准判断结果。而(+)、(++)、(+++)均判断为组织染色阳性。

1.4 统计学方法 使用SPSS 15.0统计软件对数据进行分析，组间用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义，检测水准取双侧。

2 结果

MMP-9在胃腺癌中有59例表达，阳性率为76%(45/59);在正常胃黏膜中有7例表达，阳性率为12%(7/59)，前者明显高于后者，P＜0.001，两者MMP9表达有明显差异。组别阳性率及 p值，性别：男32/43例，女13/16例，P=0.738;年龄：＜60岁26/35，≥60岁19/24，P=0.762;肿瘤直径：≥2 cm 31/37，＜2 cm 14/22，P=0.114;组织学分级：高/中分化9/18，低/未分化36/41，P=0.006;浸润深度：早期10/18，进展期35/41，P=0.021;区域淋巴结转移：有34/39，无11/20，P=0.010 远处转移：有 18/19，无 27/40，P=0.024临床分期：I/II期12/21，III/IV期 33/38，P=0.023。

3 讨论

胃腺癌浸润与转移的恶性生物学行为，其实质是癌细胞自原发灶脱落直接向周围组织中浸润扩展，或者是进入淋巴管或血管，通过血流或淋巴液，到达远处靶组织中定植，再形成新的继发灶。而这个过程的第一步便是破坏脉管的基膜和周围基质，所以胃血管基底膜及周围基质是否完整，是癌细胞浸润的关键。

由Grossji1962年首次报道的基质金属蛋白酶家族(matrix metalloproteinases，MMPs)是组高度保守的蛋白水解酶家族，他能降解全身各种基底膜(basilar membrane，BM)和细胞外基质(eartecnularmartix，ECM)，迄今为止发现和纯化的基质金属蛋白酶有20多种，与人类有关的共有17个。基质金属蛋白酶参与生成血管、细胞的迁移、胚胎发育、愈合伤口、恶性肿瘤的浸润和转移等多种病理及生理过程。根据酶与底物亲和力及结构域的不同，可将基质金属蛋白酶分为4组，各组作用于不同的基底膜、细胞外基质和其他的金属蛋白酶家族成员。基质金属蛋白酶9属于第2组，又叫明胶酶B，人类基质金属蛋白酶9基因位于染色体20q12～q13，是基质金属蛋白酶中分子量最大的蛋白酶，其分子量大约是92KD。

在肿瘤细胞浸润组织屏障向远离原发瘤部位移动的过程中，需要降解细胞外的基质来使肿瘤细胞转移。MMP9能有效分解基底膜的主要成分IV型蛋白胶原。有研究显示MMP9在宫颈癌［1］、肾细胞癌［2］等恶性肿瘤中过表达。它在正常胃组织中表达量极少，有少数研究报道胃腺癌组织中MMP9表达增高。

在本研究中：胃腺癌中MMP9表达的阳性率明显高于正常胃黏膜中的表达，阳性率为76%比12%(P＜0.001)，两者的MMP9表达有显著差异。胃腺癌中的MMP9表达的增多与患者性别、年龄和肿瘤直径无相关(P＞0.05)，而与浸润深度、组织学分级、有无远处转移、有无区域淋巴结转移、临床分期有相关(P＜0.05)，组织学分级低的、浸润黏膜下的、有远处转移或者区域淋巴结的、分期晚的患者，MMP9阳性率更高。这些结果与其他文献报道的相近。

这些结果表明：胃腺癌中MMP9增多是促进胃腺癌产生、浸润、转移的因素之一，且这种促进作用部分是通过MMP9降解细胞外基质与胶原来实现的。

［1］ Boyer J，Maxwell PJ，Longley DB，et al.5-Fluorouraeil：identification of novel downstream mediators of tumor response.Anticaneer Res，2004，24(2A)：417-423.

［2］ Liu Y，Xiao Z，Li M，et al.Quantitative proteome analysis reveals annexin A3 as a novel biomarker in lung adenocarcinoma.Pathol，2009，106：570-579.