苹果叶枯病发病规律

赵俊芳，乔趁峰，常聚普，杨玉巧，郭利民，李洁茹

(濮阳市林业科学院，河南濮阳 457000)

苹果叶枯病病原立枯丝核菌Rhizctonia solani Kühn是近几年河南苹果树上发生的一种新病害。主要分布在濮阳市南乐县、清丰县，安阳市内黄县，郑州市中牟县，商丘市虞城县等地，几年来发病日趋严重。2011年调查，严重果园病株率达到90%以上，病枝率达到50%以上。为掌握该病发生规律，我们自2008年开始对该病害进行研究，在确定该病病原的基础上，对该病在豫北苹果上的发病规律进行了系统研究，为生产上防治提供科学依据。

1 材料和方法

1.1 寄主范围的测试 立枯丝核菌菌株采自河南省内黄县中召乡徐寨苹果园叶枯病树，用常规组织分离方法获得。测试树种有梨、桃、李、杏、山楂、枣、核桃、樱桃、葡萄等。

1.1.1 室内接种 每个树种各采茎粗0.5～1 cm、长20～25 cm的1年生带叶枝段6个，进行无伤接种。即枝段用70%酒精消毒后，把5 mm×5 mm的病原菌饼贴在枝条上，用无菌棉保湿、保鲜膜固定，下部放入盛有清水的三角瓶中，水以上部位套塑料袋，袋内装湿棉球保湿，然后置于28℃恒温培养箱培养。3～7 d观察枝段菌丝生长和发病情况。7 d后取疑似病叶做分离纯化培养，每个树种分离5皿，每皿3点，共15点。24 h后调查感病点，对疑似点纯化，最后确定是否感染丝核菌。

1.1.2 室外接种 在田间每个树种选择6个粗0.5～1 cm 1年生枝条，进行无伤和贴病叶接种。无伤接种方法同上，贴叶接种时用70%酒精消毒被接种叶片，将从田间采回的病叶贴到消毒过的叶片上，用无菌棉保湿、保鲜膜固定，整个枝条套上塑料袋，袋内装湿棉球保湿，每隔1 d加湿1次，3～7 d观察田间菌丝生长和发病情况。7 d后采回田间疑似病叶做分离纯化培养，方法同上，最后确定是否感染丝核菌。

1.2 侵染循环

1.2.1 病原菌的越冬场所 2010—2012年在早春3月从病树上采回1年、2年和多年生病枝，老粗树皮和病树下土壤。

对从田间采回的病枝分叶芽(叶芽又分带菌核和不带菌核)、花芽(花芽又分表层、中间层、花心)、带芽枝段、不带芽枝段(带菌核的和不带菌核的)、芽鳞痕、枯叶，以及病树主干基部树皮等部位。各供试材料用清水冲洗并消毒后分别放入培养皿中，用无菌药棉保湿，然后置入28℃的恒温培养箱中保湿培养。每个部位3皿，每皿3～5个点。72 h后镜检带菌情况。

采用5点取样法采取病树基部和病枝下部土壤，挑出杂草后分别装袋，实验室风干，过20目筛，放入5℃冰箱保存备用。

称取准备好的土壤样品10 g，加到盛有100 mL无菌水的三角瓶中，摇床震荡2 h，分别配成10-1，10-2，10-3的悬浮液，充分震荡，静置5 min。吸取不同浓度的悬浮液各1mL放入灭菌培养皿中(每个浓度培养3皿，连续做3次)，然后把PDA培养基倒入15～18 mL，并按住培养皿盖轻轻地在台面上划转小圈，顺时针5圈，逆时针5圈，混匀后平放冷却，凝成平板，置于28℃恒温培养箱中培养。1 d后，对疑似菌丝分离、纯化，确定是否含有病原菌株。

1.2.2 侵染方式和途径 供试品种为红星和富士苹果。

采用人工接种试验法，2010—2011年对苹果树无病1年生枝进行室内和室外接种试验。室内做有伤、无伤和叶片贴叶接种，以无菌水作对照，28℃恒温培养箱中培养，3～7 d观察枝段菌丝生长和发病情况。室外接种72 h后观察菌丝扩展和枝条、叶的发病情况，连续观察7 d。每个处理10个重复。

1.2.3 田间发病期的观察 2010—2012年每年在安阳市内黄县中召乡徐寨自6月开始选代表性病株5株，选东、西、南、北、中5个方位各1枝进行定枝观察，每3 d调查1次，记录发病情况，统计菌丝、菌核和病叶出现的始期和盛期。

2 结果与分析

2.1 寄主范围 室内、外接种试验结果见表1。

表1 丝核菌室内、外接种感病点

从表1可以看出:丝核菌在枣树、山楂、梨、核桃、桃、李、杏树上接种后，室内外分离纯化后都有感病点。这7个树种在室内和室外的接种试验中均分离到了该菌，说明枣树、山楂、梨、核桃、桃、李、杏树都是该病原菌的寄主。柿树和樱桃室内接种后感病点分别为4/15和13/15，室外为0。这2个树种在室内接种后均分离到了该菌，但室外接种未发现，是否寄主还有待进一步验证。葡萄室内外接种后均未分离到该菌，说明该病原菌不能成功侵染葡萄。

2.2 侵染循环

2.2.1 病原菌的越冬场所和形态 1年生病枝上的花芽不论外层、中间层和心层均带有大量的丝核菌，72 h后的带菌点分别为 24/60，16/60，25/60;2年生病枝上的花芽也带有丝核菌，带菌点分别为1/45，3/45，1/45，明显少于1年生的;3年生病枝上的花芽中间层未发现带菌点。病枝上的叶芽外层和内层均带有丝核菌，72 h后的带菌点分别为5/40和3/40。病树的健康枝上、1～3年生病枝上的芽鳞痕均带有该菌，72 h后的带菌点分别为4/15，15/60，1/60，2/60。病枝上残留的叶和叶柄72 h后的带菌点为2/16。病枝上不带菌核的树皮、病枝上部健康树皮、病枝附近健康枝上残留的叶和叶柄、病枝上的皮孔、病树主干基部树皮、病树下草莓和病树下落叶均未发现病原菌。1～3 a的菌核经过保湿培养均能生长。

病树下基部和病枝下土壤培养分离纯化后均未发现丝核菌。分析原因该病症状主要表现在1年生枝和叶上，在花芽、叶芽和芽鳞痕均能分离到病原菌，跟土壤关系不大，不同于禾本科植物感染丝核菌引起的枯萎病。

2.2.2 侵染方式和途径 不同接种方式丝核菌72 h侵染率见表2。

表2 不同接种方式丝核菌72 h侵染率 %

从表2可以看出:不论有伤、无伤和贴病叶接种病原菌都可以侵染，但有伤侵染速度稍慢，室内接种72 h侵染率为25%，室外为35%;无伤接种室内为90%，室外为65%;贴叶接种室内外均为90%。无伤和贴叶接种没有显著差别。

2.2.3 田间发病期 2010—2012年菌丝、菌核、病叶出现的始期和盛期见表3。

表3 菌丝、菌核、病叶的发生期

连续3 a的系统观察得出:苹果叶枯病丝核菌菌丝的发生期为6月底—7月上旬;菌核的产生期为8月上旬，形成盛期为9月中下旬;病叶产生的初期为7月上旬，盛期为7月中下旬—9月底。8—9月若遇阴雨连绵，则暴发成灾。

3 结论与讨论

苹果叶枯病病原丝核菌寄主范围比较广泛，蔷薇科果树基本上都能感染发病，可通过伤口或直接接触侵入寄主，以菌丝和菌核在病花芽、叶芽、芽鳞痕和树上的病叶上越冬。田间发病期观察和室内保湿培养证明:病原菌6月末—9月末均有侵染能力，7月中下旬—9月下旬为发病盛期。菌丝接触叶片即可引起叶片干枯。菌丝在雨季生长旺盛，遇干旱或天气变冷即停止生长形成菌核或菌丝团。在豫北苹果栽培区，一般7月初开始发病，7月中下旬—9月底为发病盛期，10月初为末期。

［1］ 任飞娟，常聚普，贺伟，等.河南省苹果新病害—丝核菌叶枯病病原鉴定［J］.中国果树，2011(4):38-41.

［2］ 张永春，方宇澄，黄镇，等.烟草主要土传病害拮抗微生物生物菌株的筛选［J］.贵州农业科学，2009(8):93-94.