HPLC法测定消糖灵丸中格列本脲、芍药苷的含量

车环宇，刘 畅，闫丽莉

(1.通化师范学院 制药与食品科学学院，吉林 通化 134002; 2.通化市食品药品检验所，吉林 通化 134002；3.通化东宝五药有限公司)

消糖灵丸是部颁标准消糖灵胶囊剂的更改品种，其处方中含有化学成分格列本脲和中药成分芍药苷，是一种中西复方药物，具有益气养阴、清热泻火、益肾缩尿的功效．格列本脲又称优降糖，为本处方中的西药成分．为N-[2-[4-[[[(环己氨基)羰基]氨基]磺酰基]苯基]乙基]-2-甲氧基-5-氯苯甲酰胺，具有降血糖的功效．白芍在本处方中为主要成分之一．白芍为毛莨科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根．主要化学成分为芍药苷及少量的芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等．具有活血散瘀，清热凉血等功效．两者与本品的功能主治密切相关，均可采用高效液相色谱法进行含量的测定，以便控制本制剂的内在质量．

1 仪器及试药

美国SeriesⅢ型高效液相色谱仪，格列本脲对照品(中国药品生物制品检定所，批号：10135-0103，规格：供含量测定用)．芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110736-200321，规格：供含量测定用)甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯．

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

(1)格列本脲色谱条件.色谱柱：Hypersil GoLD Dim(mm)250×4.6色谱柱，甲醇-磷酸二氢铵溶液(磷酸二氢铵1.725g，溶于300ml水，磷酸调pH3.5±0.05)(65∶35)为流动相，流速为0.8mL·min-1室温，检测波长为230nm；理论板数按格列本脲计算应不低于2000．

(2)芍药苷色谱条件．色谱柱：依利特C18(4.6×200mm,5μm)；乙腈-0.2%磷酸(15∶85)为流动相；流速0.8ml/min；室温；检测波长:230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500．

2.2 对照品及供试品溶液的制备

(1)格列本脲对照品及供试品溶液的制备．对照品溶液的制备：精密称取格列本脲对照品适量，加甲醇制成每1ml含32μg的溶液，即得．供试品溶液的制备：取本品适量，研细，精密称取1g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得．

(2)芍药苷对照品及供试品溶液的制备．对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含35μg的溶液，即得．供试品溶液的制备：取本品适量，研细，精密称取1g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，在水浴中回流提取1h后，取出，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，作为供试品溶液．

2.3 方法学考察

(1)格列本脲方法学考察．①按对照品溶液制备方法，精密吸取对照品溶液2、6、10、14、18μl测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线(见图1)，并计算回归方程：Y=7676.7+2855648.4X(r=0.99996)，结果表明格列本脲0.064～0.576μg范围内，呈线性关系，符合外标法定量测定的要求．②精密度试验．精密吸取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，重复5次，测定其色谱峰面积值，算得RSD值为0.7%．结果表明，所用的仪器具良好的精密性．③稳定性试验．取供试品溶液,依正文方法测定，算得RSD值0.3%．结果表明12h内供试品溶液中格列本脲的含量基本稳定．④重复性试验．取同一供试品，依正文方法独立测定五次，算得RSD值为0.19%．结果表明本法具有良好的重复性．⑤回收率试验．精密称取已知含量的供试品5份，分别精密加入对照品溶液5ml，依法测定，计算回收率(见表1)．

图1 格列本脲标准曲线

表1 回收率试验结果

由表1，测得格列本脲平均回收率为97.1%，RSD=0.5%.结果表明本法回收率较好，准确度较高．

(2)芍药苷方法学考察．①按对照品溶液制备方法，精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20μl测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线(见图2)，并计算回归方程：Y=8466.51+2668043.3X(r=0.99995)，结果表明芍药苷0.0356～0.712μg范围内，呈线性关系，符合外标法定量测定的要求．②精密度试验．精密吸取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，重复5次，测定其色谱峰面积值，算得RSD值为0.4%．结果表明，所用的仪器具良好的精密性．③稳定性试验．取供试品溶液,依正文方法测定，算得RSD值0.4%．结果表明12h内供试品溶液芍药甘的含量基本稳定．④重复性试验．取同一供试品，依正文方法独立测定五次，算得RSD值为0.47%．结果表明本法具有良好的重复性．⑤回收率试验．精密称取已知含量的供试品0.5g5份，分别精密加入对照品溶液20ml，依法测定，计算回收率(见表2)．

图2 芍药苷标准曲线

表2 回收率试验结果

由表2，测得芍药苷平均回收率为97.3%，RSD=0.6%.结果表明本法回收率较好，准确度较高．

2.4 结果

(1)格列本脲测定结果.依正文方法测定十批样品，格列本脲的含量均值为0.8(mg/g)．

结果表明高效液相色谱法测定格列本脲含量，该方法专属性强，方法易于操作，结果准确，重现性良好．

(2)芍药苷测定结果．依正文方法测定十批样品，芍药甘的含量均值为1.8(mg/g).

结果表明高效液相色谱法测定芍药苷含量，该方法专属性强，方法易于操作，结果准确，重现性良好．

3 讨论

格列本脲在三氯甲烷中略溶，在甲醇或乙醇中微溶，在水或乙醚中不溶．针对格列本脲溶解性较差的特点，我们呈做了大量的试验，结果以甲醇为溶媒效果较好．十批样品中格列本脲的平均含量为0.8mg/g，考虑到在生产中受工艺波动的影响，我们将含量限度初步规定为每1g含格列本脲(C23H28ClN3O5S)为0.72～0.9mg．

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:中国医药科技出版社,2012.

[2]江涛涛.复方降脂滴丸的研制[D].镇江:江苏大学,2006.