Rh(D)阴性献血者资料库的建立及其构成状况调查

卢海燕，姜利军

(怀化市中心血站，湖南怀化418000)

Rh血型系统是人类最复杂的血型系统，也是输血医学最主要的血型系统之一，在世界人口比例中属Rh(D)阴性血型人只占0.3%左右，在中国汉族人群中占0.2% ～0.5%［1-2］。因Rh(D)阴性比例低，常规备血相当困难，近年来虽然有些地方采用了红细胞冰冻技术，但在实际应用中所起的作用十分有限，所以建立起一支稀有血型献血者队伍显得尤为重要。为丰富本站的Rh(D)阴性血液，以满足临床的需求，近年来，本站加大对Rh(D)阴性献血者的筛查工作，建立了一支Rh(D)阴性献血者队伍和稀有血型血库。近期我们对该资料库的构成状况进行了调查。

材料和方法

一、标本来源

1998年5月1日～2011年12月31湖南省怀化市无偿献血者136 887名，年龄18～55岁，身体健康检查均符合《献血者健康检查要求》［3］。

二、标本采集

献血者留取2.5 mL血样本，肝素抗凝，并且在每个标本上贴条形码标签，备用。

三、试剂

IgM抗-D血清购自加拿大DBL公司，IgM 抗-C、抗-c、抗-E、抗-e单克隆抗体购自英国Serolgicai Ltd公司、德国Biotest公司;抗人球蛋白试剂购自上海血液生物制药有限责任公司、加拿大DBL公司;筛选红细胞由上海血液生物制药有限公司生产;凝聚胺试剂购自合肥天一生物技术研究所;IgM+IgG抗-D血清购自加拿大DBL公司及Dominion Biologicals Limited公司。

四、Rh血型系统表型的检测

参照《全国临床检验操作规程》［4］(血型血清学部分)进行。

1.初筛试验 IgM抗-D血清，由检验科采用平板法进行初筛，按照试剂说明书操作，结果可疑者用试管法确认，初筛阴性标本送血型参比室进行确认试验。

2.确认试验 初筛阴性标本采用2个不同厂家IgM+IgG抗-D血清，用间接人球蛋白试验进行确认，经初筛和确认均为阴性的标本为Rh(D)阴性，初筛试验为阴性而确认中有1个或1个以上试剂检测为阳性的标本定为弱D。

3.Rh表型筛选 采用IgM 抗-C、抗-c、抗-E、抗-e单克隆抗体试管法进行筛选，凝集为阳性，不凝集为阴性。

4.不规则抗体筛选 采用凝聚胺法和抗人球蛋白法，均按试剂说明书操作。阴性结果用排除法，阳性结果用可能包含法，根据献血者血清与筛检红细胞反应格局，初步判断献血者血清中可能出现的抗体，再用谱细胞做鉴定试验。

5.Rh(D)阴性献血者资料库的建立 将筛出的Rh(D)阴性献血者，分别建立以ABO血型、人口来源、性别、年龄、民族、联系电话、献血证件及出生年月日等资料为主的档案，然后汇总所有Rh(D)阴性献血者的档案，即形成Rh(D)阴性献血者资料库。

6.Rh(D)阴性献血者资料库的构成状况调查 将资料库中的Rh(D)阴性献血者分别按ABO血型、性别、人口来源、年龄及民族分类，分别统计各类中的A型、B型、AB型及O型Rh(D)阴性献血者的例数。

五、统计学方法

采用SPSS13.0统计软件进行χ2检验。

结 果

一、在136 887名无偿献血者中共筛选出Rh(D)阴性献血者 340名(0.25%)、弱 D 2名(0.005%)、不规则抗体1名(0.002%)。按ABO血型分为 A型 99名(29.1%)、B型 86名(25.3%)、O 型 124名(36.4%)、AB型 31名(9.2%)。

二、340名Rh(D)阴性者的表现型与基因型的分布情况见表1。340名Rh(D)阴性表现型的频率ccdee最高，占49.7%，其次为Ccdee，其他依次为CCdee＞ccdEe＞CcdEe＞CCdEe＞ccdEE。

表1 340名Rh(D)阴性者的表现型与基因型分布

三、无偿献血者弱D抗原是D抗原量的变化，即每个RBC上正常D抗原表位是完整的，只是表达弱，RBC上抗原点单纯性减少，不能被IgM抗-D凝集，但在IgG抗-D的抗球蛋白试验中有凝集。本资料库中A型CcDuee 1例、B型CcDuEE1例。

四、资料库中的Rh(D)阴性献血者按性别分类，男性及女性Rh(D)阴性献血者的例数及其ABO血型分布见表2。

表2 Rh(D)阴性献血者的男、女例数及其ABO血型分布

五、资料库中的Rh(D)阴性献血者按人口来源分类，常住人口及流动人口的Rh(D)阴性献血者的例数及其ABO血型分布见表3。

六、资料库中的Rh(D)阴性献血者按年龄分类，不同年龄的Rh(D)阴性献血者的例数及其ABO血型分布见表4。

表3 常住及流动人口的Rh(D)阴性者例数及ABC血型分布

七、资料库中的Rh(D)阴性献血者按民族分类，不同民族的Rh(D)阴性献血者的例数及其ABO血型分布见表5。

表4 不同年龄的Rh(D)阴性献血者例数及其ABO血型分布

表5 不同民族的Rh(D)阴性献血者例数及ABO血型分布

讨 论

Rh血型系统是仅次于ABO血型系统的第二大红细胞血型系统，是最复杂的遗传多态性血型系统之一。Rh系统内有45种不同的抗原，D抗原最为重要。根据红细胞上D抗原的有无，可分类红细胞为Rh阳性或Rh阴性。Rh系统主要抗原有C、c、E、e。Rh阴性个体经由输血或怀孕接触D抗原后，3个人中就有2个会产生抗-D抗体［5］。此抗体可引起输入的 Rh阳性红细胞破坏，若不经免疫球蛋白预防，抗-D将成为最常见的严重的新生儿溶血病抗体。在怀孕期间，IgG类抗-D能通过胎盘影响Rh阳性胎儿，引起新生儿溶血病［6］。

本研究结果显示，Rh(D)阴性者在本血站的献血者中的分布频率较低，仅为0.25%。在表型分析中可见表型ccdee最多见，ccdEE、CcdEe和CCdEe表型在ABO各型中分布较罕见，表型分析中未发现CCdEE和CcdEE表型，符合Rh血型系统在血清学有复杂表现及表型频率严重不平衡的特点［7］。如遇到临床急需时，无法供应或供应难度大。另外，弱D或不完全D及已产生不规则抗体者的存在，提醒我们在输血时要给这些人群输入Rh(D)阴性的血液，并要配型成功。已产生抗体者，以后不宜再献血，如果需要输血时，一定要输入Rh(D)阴性血液［8］。我们于2002年开始，从广泛的献血者中筛查Rh(D)阴性献血者，并对筛出的Rh(D)阴性献血者分别建立档案，然后根据Rh分型结果、血型抗体检测结果、血型分布和献血史等情况输入计算机管理系统，形成Rh(D)阴性献血者资料库，满足临床供血者、受血者间Rh、ABO血型系统各种不同相适度的快速、准确、详细的优选检索。由此可见，建立Rh(D)阴性献血者资料库，是满足临床对Rh(D)阴性血液需求的首要保证。

通过对Rh(D)阴性献血者资料库的构成状况调查发现:(1)资料库中的Rh(D)阴性献血者，年龄在18～42岁之间的例数较多，占278名(81.76%)，这种状况有利于丰富Rh(D)阴性血液的来源;(2)资料库中的Rh(D)阴性献血者的民族分布不平衡，汉族人口较多，其他民族人口较少，这种状况对Rh(D)阴性血液的来源影响不大;(3)资料库中的Rh(D)阴性献血者的ABO血型有些偏型、属流动人口较多及有2名年龄偏大已不适合献血。这种状况将影响Rh(D)阴性血液的来源，日久将导致无法满足临床对Rh(D)阴性血液的需求。针对资料库中存在的不利状况，我们认为，为能够做到长期满足临床对Rh(D)阴性血液的需求应做到:(1)必须加强Rh(D)阴性献血者的队伍建设，使原来稀少且较分散的血源相对集中起来，便于在急需时能做到及时、准确、便捷的查找;(2)仅仅建立档案是远远不够的，如果没有自愿献血者，在急需用血时不能做到随叫随到，那么前面的工作将是徒劳的。这就要求在宣传和动员方面下功夫，可以成立Rh(D)阴性献血者爱心之家，定期举办联谊会，并通过Rh(D)阴性献血者之间开展互助、献爱心的活动，调动大家参加无偿献血的积极性，保证了志愿者队伍的长期稳定性，使他们深切了解献血的知识和意义，同时加强血站与献血者之间的沟通，便于今后工作的开展;(3)建立冷冻血库，积极推广低温保存技术［9-10］，做好罕见表型血液的保存工作，以备急时所用;(4)血站要为临床输血提供科学依据，更好地指导各大医院临床Rh(D)阴性血的正确输注，帮助和督促临床医生严格掌握输血适应证，做到科学、合理用血，避免不必要的输血，可输可不输的血尽可能不输。因Rh(D)阴性血稀有珍贵，建议有条件的患者要进行贮存式、稀释式或回收式自身输血［11-12］，这是解决稀有血型输血的重要途径之一。做好这些工作，血站一定能够做好长期满足临床对Rh(D)阴性血液的需求，从而保障Rh(D)阴性患者的输血安全。

［1］ 江清华，李 鑫，蔡于旭，等.海南地区Rh(D)阴性血型资料库的建立与临床应用［J］.中国输血杂志，2007，20(3):222.

［2］刘嫦瑛，谢 波，陈春平，等.咸阳市Rh D阴性献血者的筛查与管理［J］.中国输血杂志，2007，20(3):223-224.

［3］中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.献血者健康检查要求［S］.GB18467-2001，中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，2001.

［4］叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.第3版.南京:东南大学出版社，2006:249-251.

［5］王 晨，陈和平，岳丹琪，等.上海地区人群中部分稀有血型筛选［J］.检验医学，2007，22(5):583-584.

［6］孙光伟，王厚照.Rh血型系列抗原检测在输血中的应用［J］.检验医学与临床，2010，7(19):2123-2124.

［7］Denise MH.Modern blood banking and transfusion practice［M］.3rd edition.Philadephia:F.A.DAVIS Company，1994:3-13.

［8］兰炯采，魏亚明，张印则，等.Rh阴性患者的科学安全输血［J］.中国输血杂志，2008，21(2):84.

［9］许德义，赵宁江，杜 勇，等.红细胞的低温冷冻保存及临床意义［J］.临床输血与检验，2004，6(3):182-184.

［10］张国清，杨玉发，彭丽珍，等.冰冻保存Rh阴性稀有血液方法的建立［J］.临床和实验医学杂志，2007，6(5):22-23.

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［12］庞桂芝，张趁利，娄白敏.新乡地区Rh血型资料库的建立与管理［J］.中国输血杂志，2009，22(8):688-689.